Zona Pellucida Ředění versus vrtání během laserem podporovaného šrafování

Zapsáno bude dvě stě cyklů (100 laserem asistovaného ztenčování a 100 laserem asistovaného vrtání).

Všichni účastníci studie podstoupí řízenou stimulaci vaječníků pomocí dlouhého protokolu agonisty GnRH počínaje střední luteální fází. Úplnou hypofyzární supresi potvrdí hladina E2 v séru nižší než 30 pg/ml a hladina LH v séru nižší než 2 mIU/ml, poté bude zahájena terapie gonadotropiny ode dne 2 do dne zrání potvrzeného přítomností 3 zralých folikulů popř. více, jeden z nich 18 mm; v tuto chvíli bude podáno 10 000 IU hCG a poté odběr vajíčka proveden 36 hodin po podání hCG pod transvaginálním ultrazvukovým vedením Masy kumulálních buněk kolem oocytů budou odstraněny pomocí vytahovacích denudačních pipet v 5jamkové kultivační misce (MTG , Bruckberg, Německo) obsahující 27 IU/ml hyaluronidázy.

Všechny oocyty, které budou zralé 4-6 hodin po odběru oocytů, budou inseminovány podle kvality spermií a oocytů a předchozí IVF anamnézy pacientky. Oplodnění bude potvrzeno 17-18 hodin po inseminaci přítomností dvou odlišných pronukleů. Zygoty budou kultivovány ve 30 μl mikrokapkách s 1-krokovým médiem a překryty parafinovým olejem v atmosféře 6 % CO2, 5 % O2 a 95 % vlhkosti při 37 °C. Dostupné embrya budou hodnoceny u všech pacientů podle kritérií stejných a pravidelných blastomer, počtu životaschopných blastomer a poměru fragmentace.

LAH bude prováděna pomocí laserového systému s 1,48 μm diodovým laserem při 300 m W prostřednictvím ztenčování nebo vrtání. Embrya podstoupí buď LAT nebo LAD v 10- až 20-μl mikrokapkách sestávajících z G-MOPS plus média. Embrya budou fixována v mikrokapkách na inverzním mikroskopu. Velikost jednoho laserového výstřelu bude 5μm v ZP při stejném celkovém počtu 3000-μs pulzů. V LAT je cílem metody ztenčování ztenčit vnější část vnější ochranné glykoproteinové vrstvy. Laserové ztenčení bude provedeno vytvořením 2-3 otvorů bez dosažení vnitřní membrány v hloubce 60-80% tloušťky ZP. V LAD bude laserový otvor proveden zvenčí dovnitř ZP.

Laserový paprsek vystřelil směrem k ZP nad perivitelinní prostor mezi dvěma blastomerami, aby se minimalizovalo riziko poškození embrya, pod pečlivou kontrolou. Embrya v mikrokapce budou po LAH několikrát promyta a poté přenesena do 1-jamkové misky (Falcon 353,653, USA) obsahující kultivační médium G-2. LAH byla provedena 2 až 3 hodiny před embryotransferem. Embrya budou kultivována v atmosféře 6 % CO2, 5 % O2 a 95 % vlhkosti při 37 °C.