Ausdünnung der Zona Pellucida im Vergleich zum Bohren beim lasergestützten Schlüpfen

Es werden zweihundert Zyklen registriert (100 lasergestütztes Ausdünnen und 100 lasergestütztes Bohren).

Alle Studienteilnehmer werden ab der mittleren Lutealphase einer kontrollierten Stimulation der Eierstöcke durch ein langes GnRH-Agonisten-Protokoll unterzogen. Die vollständige Unterdrückung der Hypophyse wird durch einen Serum-E2-Spiegel von weniger als 30 pg/ml und einen Serum-LH-Spiegel von weniger als 2 mIU/ml bestätigt. Anschließend wird mit der Gonadotropintherapie vom 2. Tag bis zum Tag der Reifung begonnen, der durch das Vorhandensein von 3 reifen Follikeln bestätigt wird mehr, einer davon 18 mm; Zu diesem Zeitpunkt werden 10.000 IE hCG verabreicht, dann erfolgt die Entnahme der Eizelle 36 Stunden nach der hCG-Verabreichung unter transvaginaler Ultraschallkontrolle. Die Kumuluszellmassen um die Eizellen werden mithilfe von Pull-and-Cut-Entblößungspipetten in einer Kulturschale mit 5 Vertiefungen (MTG) entfernt , Bruckberg, Deutschland) mit 27 IU/ml Hyaluronidase.

Alle Eizellen, die 4–6 Stunden nach der Eizellentnahme reif sind, werden entsprechend der Qualität der Spermien und Eizellen sowie der vorherigen IVF-Anamnese der Patientin besamt. Die Befruchtung wird 17–18 Stunden nach der Befruchtung durch das Vorhandensein von zwei unterschiedlichen Vorkernen bestätigt. Zygoten werden in 30-μl-Mikrotropfen mit einem 1-Schritt-Medium kultiviert und mit Paraffinöl in einer Atmosphäre aus 6 % CO2, 5 % O2 und 95 % Luftfeuchtigkeit bei 37 °C überschichtet. Die verfügbaren Embryonen werden bei allen Patienten anhand der Kriterien gleicher und regelmäßiger Blastomeren, einer Anzahl lebensfähiger Blastomeren und des Fragmentierungsverhältnisses beurteilt.

LAH wird mit einem Lasersystem mit einem 1,48-μm-Diodenlaser bei 300 mW durch Dünnung oder Bohren durchgeführt. Die Embryonen werden entweder einer LAT- oder LAD-Behandlung in 10 bis 20 μl großen Mikrotropfen unterzogen, die aus G-MOPS plus Medium bestehen. Die Embryonen werden in den Mikrotropfen am Umkehrmikroskop fixiert. Die Größe eines Laserschusses wird im ZP bei der gleichen Gesamtzahl von 3000-μs-Impulsen 5 μm betragen. Bei LAT besteht das Ziel der Ausdünnungsmethode darin, den äußeren Teil der äußeren schützenden Glykoproteinschicht dünner zu machen. Die Laserverdünnung wird durchgeführt, indem 2–3 Löcher in einer Tiefe von 60–80 % der ZP-Dicke gebohrt werden, ohne die innere Membran zu erreichen. Bei LAD erfolgt die Laseröffnung von außen nach innen im ZP.

Der Laserstrahl schoss unter sorgfältiger Kontrolle auf das ZP über dem perivitellinen Raum zwischen zwei Blastomeren, um das Risiko einer Schädigung des Embryos zu minimieren. Die Embryonen im Mikrotropfen werden nach der LAH mehrmals gewaschen und dann in eine 1-Well-Schale (Falcon 353.653, USA) mit G-2-Kulturmedium überführt. Die LAH wurde 2 bis 3 Stunden vor dem Embryotransfer durchgeführt. Die Embryonen werden in einer Atmosphäre mit 6 % CO2, 5 % O2 und 95 % Luftfeuchtigkeit bei 37 °C kultiviert.