Zona Pellucida udtynding versus boring under laserassisteret udklækning

To hundrede cyklusser vil blive tilmeldt (100 laser-assisteret udtynding og 100 laser-assisteret boringer).

Alle undersøgelsesdeltagere vil gennemgå kontrolleret ovariestimulering ved GnRH agonist lang protokol startende fra mid-luteal fase. Den fuldstændige hypofyseundertrykkelse vil blive bekræftet af serumE2-niveau mindre end 30 pg/ml og serum-LH-niveau mindre end 2 mIU/ml, derefter vil gonadotropinbehandling blive startet fra dag 2 til modningsdagen bekræftet af tilstedeværelsen af ​​3 modne follikler eller mere, en af ​​dem 18 mm; på dette tidspunkt vil der blive administreret 10.000 IE hCG, hvorefter ægopsamling foretages 36 timer efter hCG-administration under transvaginal ultralydsvejledning Cumulus-cellemasser omkring oocytterne vil blive fjernet ved hjælp af pull-and-cut denudationspipetter i en 5-brønds kulturskål (MTG) , Bruckberg, Tyskland) indeholdende 27 IU/ml hyaluronidase.

Alle oocytter, der vil være modne 4-6 timer efter oocytopsamling, vil blive insemineret i henhold til kvaliteten af ​​spermatozoer og oocytter og patientens tidligere IVF-historie. Befrugtning vil blive bekræftet 17-18 timer efter insemination ved tilstedeværelsen af ​​to forskellige pronuclei. Zygoter vil blive dyrket i 30-μL mikrodråber med et 1-trins medium og overlejret med paraffinolie i en atmosfære af 6% CO2, 5% O2 og 95% luftfugtighed ved 37 °C. De tilgængelige embryoner vil blive vurderet hos alle patienter i henhold til kriterierne for lige og regelmæssige blastomerer, et levedygtigt blastomertal og fragmenteringsforhold.

LAH vil blive udført ved hjælp af et lasersystem med en 1,48-μm diode-laser ved 300 m W gennem udtynding eller boring. Embryonerne vil gennemgå enten LAT eller LAD i 10- til 20-μL mikrodråber bestående af G-MOPS plus medium. Embryonerne fikseres i mikrodråberne på det omvendte mikroskop. Størrelsen af ​​et laserskud vil være 5μm i ZP'et ved at bruge det samme samlede antal 3000-μs-impulser. I LAT er målet med udtyndingsmetoden at gøre den ydre del af det ydre beskyttende glykoproteinlag tyndere. Laserfortyndingen udføres ved at lave 2-3 huller uden at nå den indre membran i en dybde på 60-80% af ZP-tykkelsen. I LAD vil laseråbningen blive lavet fra ydersiden til indersiden af ​​ZP'en.

Laserstrålen skød mod ZP over perivitelline-rummet mellem to blastomerer for at minimere risikoen for at skade embryoet, under omhyggelig kontrol. Embryonerne i mikrodråben vil blive vasket flere gange efter LAH og derefter overført til en 1-brønds skål (Falcon 353.653, USA) indeholdende G-2 dyrkningsmedium. LAH blev udført 2 til 3 timer før embryooverførsel. Embryonerne vil blive dyrket i en atmosfære af 6% CO2, 5% O2 og 95% luftfugtighed ved 37 °C.