Desbaste da zona pelúcida versus perfuração durante a incubação assistida por laser

Duzentos ciclos serão registrados (100 desbastes assistidos por laser e 100 furações assistidas por laser).

Todas as participantes do estudo serão submetidas à estimulação ovariana controlada por protocolo longo de agonista de GnRH a partir do meio da fase lútea. A supressão hipofisária completa será confirmada pelo nível sérico de E2 inferior a 30 pg/ml e nível sérico de LH inferior a 2 mIU/ml, então a terapia com gonadotropina será iniciada a partir do dia 2 até o dia da maturação confirmada pela presença de 3 folículos maduros ou mais, um deles de 18 mm; neste momento, 10.000 UI de hCG serão administrados e a coleta do óvulo será feita 36 horas após a administração de hCG sob orientação de ultrassom transvaginal. , Bruckberg, Alemanha) contendo 27 UI/mL de hialuronidase.

Todos os oócitos que estarão maduros em 4-6 horas após a coleta de oócitos serão inseminados de acordo com a qualidade dos espermatozoides e oócitos e o histórico de fertilização in vitro anterior da paciente. A fertilização será confirmada 17-18 h após a inseminação pela presença de dois pró-núcleos distintos. Os zigotos serão cultivados em microgotas de 30 μL com meio de 1 etapa e sobrepostos com óleo de parafina em uma atmosfera de 6% CO2, 5% O2 e 95% de umidade a 37 °C. Os embriões disponíveis serão avaliados em todas as pacientes de acordo com os critérios de blastômeros iguais e regulares, número de blastômeros viáveis ​​e taxa de fragmentação.

O LAH será conduzido usando um sistema de laser com um laser de diodo de 1,48 μm a 300 m W por meio de desbaste ou perfuração. Os embriões serão submetidos a LAT ou LAD em microgotas de 10 a 20 μL, consistindo em G-MOPS mais meio. Os embriões serão fixados nas micro-gotas no microscópio invertido. O tamanho de um disparo de laser será de 5 μm no ZP usando o mesmo número total de pulsos de 3000 μs. No LAT, o objetivo do método de desbaste é tornar mais fina a porção externa da camada protetora externa de glicoproteína. O desbaste a laser será realizado fazendo 2-3 furos sem atingir a membrana interna a uma profundidade de 60-80% da espessura da ZP. No LAD, a abertura do laser será feita de fora para dentro da ZP.

O feixe de laser disparou em direção ao ZP acima do espaço perivitelino entre dois blastômeros para minimizar o risco de prejudicar o embrião, sob controle cuidadoso. Os embriões na microgota serão lavados várias vezes após LAH e então transferidos para uma placa de 1 poço (Falcon 353,653, EUA) contendo meio de cultura G-2. A LAH foi realizada 2 a 3 horas antes da transferência do embrião. Os embriões serão cultivados em uma atmosfera de 6% CO2, 5% O2 e 95% de umidade a 37 °C.