Zona Pellucida Thinning 대 Laser-assisted Hatching 중 드릴링

200주기가 등록됩니다(100개의 레이저 보조 박피 및 100개의 레이저 보조 드릴링).

모든 연구 참가자는 중간 황체기부터 시작하여 GnRH 작용제 긴 프로토콜에 의해 제어된 난소 자극을 받게 됩니다. 완전한 뇌하수체 억제는 30 pg/ml 미만의 혈청 E2 수준 및 2 mIU/ml 미만의 혈청 LH 수준에 의해 확인되고, 성선자극호르몬 요법은 2일째부터 3개의 성숙 난포의 존재에 의해 확인되는 성숙일까지 시작되거나 또는 그 중 하나는 18mm입니다. 이때 10000 IU의 hCG를 투여한 다음 질식 초음파 안내 하에 hCG 투여 후 36시간 후에 난자 픽업을 수행합니다. 난모세포 주변의 적운 세포 덩어리를 5웰 배양 접시(MTG , Bruckberg, Germany)는 27 IU/mL의 히알루로니다아제를 함유하고 있습니다.

난모세포 수집 후 4-6시간에 성숙할 모든 난모세포는 정자 및 난모세포의 품질과 환자의 이전 IVF 이력에 따라 수정됩니다. 수정은 2개의 별개의 전핵의 존재에 의해 수정 후 17-18시간에 확인됩니다. Zygotes는 37°C에서 6% CO2, 5%O2 및 95% 습도의 분위기에서 1단계 배지를 사용하여 30μL 마이크로 드롭에서 배양되고 파라핀 오일로 오버레이됩니다. 사용 가능한 배아는 동일하고 규칙적인 할구, 생존 가능한 할구 수 및 단편화 비율의 기준에 따라 모든 환자에서 평가됩니다.

LAH는 300mW에서 1.48μm 다이오드 레이저가 있는 레이저 시스템을 사용하여 박형화 또는 드릴링을 통해 수행됩니다. 배아는 G-MOPS 플러스 배지로 구성된 10~20μL 마이크로 드롭에서 LAT 또는 LAD를 겪게 됩니다. 배아는 거꾸로 된 현미경의 미세 방울에 고정됩니다. 동일한 총 3000μs 펄스 수를 사용하는 ZP에서 하나의 레이저 샷 크기는 5μm입니다. LAT에서 박막화 방법의 목표는 외부 보호 당단백질 층의 외부 부분을 더 얇게 만드는 것입니다. 레이저 씨닝은 ZP 두께의 60-80% 깊이에서 내부 멤브레인에 도달하지 않고 2-3개의 구멍을 만들어 수행됩니다. LAD에서는 ZP 외부에서 내부로 레이저 개구부가 만들어집니다.

레이저 빔은 두 개의 할구 사이의 perivitelline 공간 위의 ZP를 향해 발사되어 배아에 해를 끼칠 위험을 최소화하고 주의 깊게 제어합니다. 마이크로 드롭의 배아는 LAH 후 여러 번 세척한 다음 G-2 배양 배지가 들어 있는 1-웰 접시(Falcon 353,653, USA)로 옮깁니다. LAH는 배아 이식 2~3시간 전에 수행되었습니다. 배아는 37°C에서 6% CO2, 5% O2 및 95% 습도의 분위기에서 배양됩니다.