Hledání metod k predikci vývoje srdečního selhání po infarktu myokardu (PHFMI)

Pacienti byli rekrutováni na základě regionálního vaskulárního centra (RVC) 1. kardiologického oddělení pro pacienty s infarktem myokardu Státního rozpočtového zdravotnického ústavu Novosibirské oblasti "Městská klinická nemocnice" (SBUZ NSO GKB) № 1 Novosibirsk. Podle návrhu byly ve studii tři body: nulový bod - první den hospitalizace pacienta v nemocnici; první bod - 30. den vývoje MI; druhý bod - 12 měsíců od doby vývoje AMI. Ve všech fázích studie jsme provedli vyšetření stanovená standardem péče o pacienty s akutním infarktem myokardu, klinickými doporučeními a protokolem disertační práce: klinický stav pacienta (vyhodnocení obtíží, objektivní vyšetření), laboratorní testy (celkový krevní obraz (TBC), celkový rozbor moči (UPE), biochemický rozbor krve (BX), instrumentální vyšetření (EKG, rentgen hrudníku (RGCT)). Koronarografie s následnou perkutánní koronární intervencí (PCI), EchoCG a stanovení molekulárně genetických markerů byla provedena také ve stadiu 0. V jakékoli fázi za přítomnosti abnormalit srdečního rytmu a vedení bylo provedeno Holterovo elektrokardiografické monitorování (HM-EKG); a u 1. a 2. bodu byl proveden test 6 minut chůze.

Ověření diagnózy AIM bylo provedeno podle kritérií čtvrté univerzální definice infarktu myokardu, která shrnuje názory odborníků Světové federace srdce (WHF), American Heart Association (AHA), American College of Cardiology (ACC) a Evropská kardiologická společnost (EOC, ESC) (2018). Do disertační práce byli zahrnuti pacienti, kteří splnili kritéria pro akutní IM 1. typu, která zahrnovala zvýšené hladiny srdečního troponinu nad 99. percentil horní referenční hodnoty, v kombinaci s alespoň jedním dalším znakem: 1) charakteristickým klinickým obrazem akutní ischemie myokardu ; 2) nové změny na EKG svědčící pro ischemii; 3) patologická Q-vlna na EKG; 4) zobrazovací nálezy potvrzující nové oblasti ischemie myokardu; a 5) přítomnost arteriální trombózy související s infarktem (ICA) na CAG. Ověření diagnózy akutního a chronického srdečního selhání (OSF, CHF) bylo provedeno na základě klinických doporučení Evropské kardiologické společnosti (EOC, ESC) (2016, 2021), kombinovaných doporučení Společnosti specialistů na srdeční selhání ( SHF), Ruská kardiologická společnost (RSC) a Ruská vědecká lékařská společnost lékařů (RSMOT) (2018). Byla použita klasifikace CHF podle stádií onemocnění (Strazhesko-Vasilenko, 1935) a ejekční frakce levé komory (LVEF), dále byla použita klasifikace srdečního selhání New York Heart Association (NYHA, 1964). závažnost příznaků. Použili jsme Killipovu klasifikaci akutního srdečního selhání.

Instrumentální vyšetřovací metody EKG bylo zaznamenáváno ve 12 svodech (6 standardních a 6 hrudních svodech) pomocí „Megacart-400“ (Siemens) v prvních minutách přijetí do nemocnice, poté jednou denně až do vytvoření subakutní periody STEMI a poté jednou za tři dny. Echokardiografie byla provedena při příjmu do nemocnice, 30. den od rozvoje IM a o rok později na přístroji Phillips ie33 (Philips Ultrasound, USA) ze standardní polohy na levé straně pacienta pomocí 2. -4 MHz ultrazvukový maticový převodník. Technika byla provedena v M- a B-módu, pulzní vlně, kontinuální vlnové dopplerovské metodě, barevném dopplerovském mapování, tkáňovém dopplerovském a barevném dopplerovském M-módu (Color M-mode). Byly stanoveny následující parametry: PV - ejekční frakce (Simpson, 1989. ), FV - koncový diastolický objem, CSV - koncový systolický objem, ESR - koncová systolická velikost, CDD - koncová diastolická velikost, FDi - koncový diastolický index, CSI - koncový systolický index, DLA - střední tlak v plicnici, FDD - koncový diastolický tlak , SW - tepový objem, MM - hmotnost myokardu, IMM - hmotnostní index myokardu, LP - levá síň, RAP - pravá síň, RV - pravá komora, VIR - izovolumická relaxační doba, E - časná diastolická rychlost plnění LK, A - levá komora rychlost pozdního diastolického plnění, E/A - poměr časného a pozdního přenosu přenosu, DT - čas časného zpomalení diastolického plnění, AT - čas zrychlení časného diastolického plnění, ET - ejekční perioda, Em - časně diastolický pohyb myokardu, Am - rychlost pozdního diastolického pohybu myokardu, Em/Am - poměr rychlostí časného a pozdního diastolického pohybu myokardu, E/e' - poměr průtoku krve E-vlnou na mitrální chlopni k E'-vlně (poměr časného pohybu prstence mitrální chlopně ), průtok krve plicní žílou S, průtok krve plicní žílou D, dE a dA - parame délky trvání časného diastolického plnění, IVCT - izovolumický čas kontrakce RV, Sfcmc - rychlost fibrózního prstence mitrální chlopně, VpvA - maximální diastolická retrográdní rychlost toku, SRMP - časná mitrální rychlost toku, diastolická tuhost, Tei index - součet izovolumetrické kontrakce a izovolumetrické relaxační časy dělené komorovou ejekční dobou, Em/SRMP - poměr časné diastolické transkuspidální rychlosti toku k rychlosti jeho šíření. Ejekční frakce levé komory (LVEF) byla vypočtena pomocí vzorce: LVEF = (QDO - QSO/QDO) 100 % (podle Simpsonovy metody). Přítomnost a stupeň dyskineze nekrózních zón a změn jizev, aneuryzmat, lézí papilárních svalů a zón ruptury myokardu byly také stanoveny standardní technikou, ve dvourozměrném a jednorozměrném režimu a v pulzním a kontinuálním Dopplerově Echo-CG režimech . Selektivní CAG byla provedena během prvních 24 hodin po přijetí pacienta do nemocnice na angiografickém přístroji INNOVA 3100 (USA) s přístupem přes radiální tepnu pomocí standardních Judkinsových levých (Jl 4,0) a Judkinsových pravých (Jl 4,0) katétrů s použitím X -paprskové kontrastní látky (ultravist, Gadovist). Transiluminální balónková angioplastika se stentováním symptomatické tepny byla provedena při diagnóze hemodynamicky významné stenózy přesahující 65 % technikou přímého stentování.

Příprava preparátů DNA Extrakce DNA z krve byla provedena fenol-chloroformovou extrakcí. Pět až šest objemů pufru A (10 mMTris-HCl, pH=7,5; 10 mM NaCl; 3 mM MgCl2) bylo přidáno k 1 objemu vzorku krve a sraženiny byly rozetřeny v homogenizátoru. Po centrifugaci při 2500 g po dobu 15 minut byly sraženiny třikrát promyty pufrem A a resuspendovány v 1 ml pufru B (10 mM EDTA; 100 mM NaCl; 50 mM Tris HCl, pH = 8,5). Po přidání SDS do 0,5 % a proteinázy E na 200 ug/ml byla směs inkubována 12 hodin při 56 °C. Deproteinizace byla provedena postupně směsí fenol-chloroform (1:1), vodou nasyceným fenolem, směsí fenol-chloroform (1:1) a chloroformem. DNA byla precipitována přidáním roztoku NaCl k 1 M a 1 V isopropylalkoholu. Poté se roztok chladil po dobu 1 hodiny při -20 °C. Sraženina získaná odstředěním na Eppendorfově mikrocentrifuze při 12 000 g po dobu 15 minut byla třikrát promyta 75% ethanolem a následně odstředěna po dobu 5 minut. 12000g a po vysušení při 56 °C rozpuštěné v deinanilizované vodě na koncentraci DNA 0,5 µg/μl. Genotypizace polymorfismů byla provedena pomocí real-time PCR podle protokolu výrobce (TaqMan probes, Thermo Fisher Scientific, USA) dne nástroj StepOnePlus. Byly vybrány na základě výsledků mezinárodních celogenomových asociačních studií (GWAS), které potvrdily asociaci těchto SNP s koronárním srdečním onemocněním (CHD), rozvojem srdečního selhání.

Statistické metody zpracování materiálu Vliv klinických, demografických, funkčních, biochemických, markerů ne a léčebných metod na rozvoj akutního, nemocničního a vzdáleného postinfarktového chronického srdečního selhání byl hodnocen poměrem šancí.

Statistická analýza molekulárně genetických dat byla provedena pomocí softwarového balíku SPSS 22.0. prvním krokem bylo stanovení četností genotypů a alel studovaného CHF u pacientů s AKS se zvýšenými kardiospecifickými markery a ve srovnávací skupině, kde byly kardiospecifické markery v normálních mezích; poté jsme hodnotili shodu četností genotypů s Hardy-Weinbergovou rovnováhou v kontrolní skupině (chí-kvadrát kritérium). Porovnání úrovně kvantitativních indexů u nositelů různých genotypů bylo provedeno po kontrole normality distribuce těchto znaků Kolmogorov-Smirnov testem. Pokud znaky splňovaly kritéria normálního rozdělení, byla použita jednofaktorová analýza rozptylu. Významnost rozdílů mezi dvěma genotypovými třídami byla navíc kontrolována pomocí t-testu pro dva nezávislé vzorky. Významnost rozdílů mezi dvěma genotypovými třídami byla navíc testována Mann-Whitney testem pro dva nezávislé vzorky, pokud zkoumaný znak nesplňoval kritéria normální distribuce, bylo provedeno srovnání úrovně tohoto znaku mezi nositeli různých genotypů. pomocí Kruskal-Wallisova testu. Asociace SNP s rizikovými faktory souvisejícími s kategorickými proměnnými byla testována pomocí konjugačních tabulek pomocí Pearsonova chí-kvadrát testu. V případě čtyřpolních tabulek jsme porovnávali vzorky podle genotypu a četnosti alel pomocí Fisherova exaktního oboustranného kritéria. Riziko výsledku onemocnění/rizikový faktor pro konkrétní alelu nebo genotyp byl vypočten jako poměr šancí.

K vývoji matematických modelů pro predikci rizika postinfarktového KVO byly použity metody korelační, faktorové a regresní analýzy. První dvě skupiny metod byly použity k identifikaci významných nezávislých proměnných (atributů), které dobře korelují s pravděpodobností nepříznivého výsledku, ale slabě korelují mezi sebou (aby se vyloučila multikolinearita modelu). Pro výběr struktury regresního modelu a odhad jeho koeficientů byly použity metody regresní analýzy. K testování přiměřenosti sestrojeného modelu byly použity dva koeficienty, které mají jednoduchou interpretaci:

• koeficient citlivosti;
• koeficient specifičnosti;
• koeficient přesnosti.