Poszukiwanie metod przewidywania rozwoju niewydolności serca po zawale mięśnia sercowego (PHFMI)

Pacjenci zostali zrekrutowani na podstawie regionalnego centrum naczyniowego (RVC) 1. oddziału kardiologii dla pacjentów z zawałem mięśnia sercowego Państwowego Budżetowego Zakładu Zdrowia Nowosybirskiego Obwodu „Miejski Szpital Kliniczny” (SBUZ NSO GKB) nr 1 w Nowosybirsku. Zgodnie z projektem w badaniu były trzy punkty: punkt zerowy – pierwszy dzień hospitalizacji pacjenta w szpitalu; pierwszy punkt - dzień 30 rozwoju MI; punkt drugi - 12 miesięcy od czasu opracowania AMI. Na wszystkich etapach badania wykonano badania przewidziane standardem opieki nad chorym z ostrym zawałem serca, wytycznymi klinicznymi oraz protokołem badań rozprawy: stan kliniczny chorego (ocena dolegliwości, badanie obiektywne), badania laboratoryjne (morfologia krwi (TBC), analiza moczu całkowitego (UPE), biochemiczna analiza krwi (BX), badania instrumentalne (EKG, RTG klatki piersiowej (RGCT)). W stadium 0 wykonano również koronarografię, a następnie przezskórną interwencję wieńcową (PCI), echokardiografię i oznaczenie molekularnych markerów genetycznych. W każdym stadium, w którym występowały zaburzenia rytmu serca i przewodzenia, wykonywano monitorowanie elektrokardiograficzne metodą Holtera (HM-EKG); aw 1. i 2. punkcie przeprowadzono 6-minutowy test marszu.

Weryfikacja rozpoznania AMI została przeprowadzona zgodnie z kryteriami czwartej uniwersalnej definicji zawału mięśnia sercowego, która podsumowuje opinię ekspertów World Heart Federation (WHF), American Heart Association (AHA), American College of Cardiology (ACC) oraz Europejskiego Towarzystwa Kardiologicznego (EOC, ESC) (2018). W pracy doktorskiej uwzględniono pacjentów spełniających kryteria ostrego MI typu 1, które obejmowały podwyższone stężenie troponin sercowych powyżej 99 percentyla górnej wartości referencyjnej, w połączeniu z co najmniej jedną dodatkową cechą: 1) charakterystycznym obrazem klinicznym ostrego niedokrwienia mięśnia sercowego ; 2) nowe zmiany w EKG sugerujące niedokrwienie; 3) patologiczny załamek Q w EKG; 4) wyniki badań obrazowych potwierdzające nowe obszary niedokrwienia mięśnia sercowego; oraz 5) obecność zakrzepicy tętnicy związanej z zawałem (ICA) w CAG. Weryfikacji rozpoznania ostrej i przewlekłej niewydolności serca (OSF, CHF) dokonano na podstawie zaleceń klinicznych Europejskiego Towarzystwa Kardiologicznego (EOC, ESC) (2016, 2021), połączonych zaleceń Towarzystwa Specjalistów ds. Niewydolności Serca ( SHF), Rosyjskie Towarzystwo Kardiologiczne (RSC) i Rosyjskie Towarzystwo Naukowo-Medyczne Lekarzy (RSMOT) (2018). Zastosowano klasyfikację CHF według stopnia zaawansowania choroby (Strażesko-Wasilenko, 1935) i frakcji wyrzutowej lewej komory (LVEF), a także klasyfikację niewydolności serca Nowojorskiego Towarzystwa Kardiologicznego (NYHA, 1964) do oceny nasilenie objawów. Zastosowaliśmy klasyfikację ostrej niewydolności serca według Killipa.

Instrumentalnymi metodami badania EKG rejestrowano w 12 odprowadzeniach (6 standardowych i 6 odprowadzeń piersiowych) za pomocą „Megacart-400” (Siemens) w pierwszych minutach przyjęcia do szpitala, następnie raz dziennie, aż do powstania podostrego okresu STEMI, a następnie raz na dobę. trzy dni. Echokardiografię wykonano przy przyjęciu do szpitala, w 30. dobie od wystąpienia zawału serca, a rok później aparatem Phillips ie33 (Philips Ultrasound, USA) z pozycji standardowej, po lewej stronie chorego, za pomocą 2 Matrycowy przetwornik ultradźwiękowy -4 MHz. Technikę wykonano w trybach M i B, impulsowo-falowym, ciągłym Dopplerze, kolorowym mapowaniu Dopplera, tkankowym Dopplerze i kolorowym Dopplerze w trybie M (Color M-mode). Wyznaczono następujące parametry: PV – frakcja wyrzutowa (Simpson, 1989. ), FV – objętość końcoworozkurczowa, CSV – objętość końcowosystoliczna, ESR – wielkość końcowoskurczowa, CDD – wielkość końcoworozkurczowa, FDi – wskaźnik końcoworozkurczowy, CSI – wskaźnik końcowosystoliczny, DLA – średnie ciśnienie w tętnicy płucnej, FDD – ciśnienie końcoworozkurczowe , SW – objętość wyrzutowa, MM – masa mięśnia sercowego, IMM – wskaźnik masy mięśnia sercowego, LP – lewy przedsionek, RAP – prawy przedsionek, RV – prawa komora, VIR – czas relaksacji izowolumatycznej, E – szybkość napełniania wczesnorozkurczowego LV, A – lewa komora szybkość napełniania późnorozkurczowego, E/A - stosunek przepływu wczesno-późnego rozkurczowego, DT - czas spowolnienia napełniania wczesnorozkurczowego, AT - czas przyspieszenia napełniania wczesnorozkurczowego, ET - okres wyrzutu, Em - szybkość wczesnorozkurczowego mięśnia sercowego, Am - prędkość ruchu późnorozkurczowego mięśnia sercowego, Em/Am - stosunek prędkości ruchu mięśnia sercowego wczesnego i późnego rozkurczowego, E/e' - stosunek przepływu krwi załamkiem E na zastawce mitralnej do załamka E' (stosunek ruchu pierścienia zastawki wczesnorozkurczowej ), przepływ krwi w żyle płucnej S, przepływ w żyle płucnej D, dE i dA - parametr czas trwania napełniania wczesnorozkurczowego, IVCT – czas izowolumetryczny skurczu RV, Sfcmc – prędkość pierścienia włóknistego zastawki mitralnej, VpvA – maksymalna prędkość rozkurczowego przepływu wstecznego, SRMP – prędkość wczesnego przepływu mitralnego, sztywność rozkurczowa, wskaźnik Tei – suma skurczu izowolumetrycznego i izowolumetryczne czasy relaksacji podzielone przez czas wyrzutu komór, Em/SRMP - stosunek prędkości wczesnorozkurczowego przepływu przezzakłowego do szybkości jego rozprzestrzeniania się. Frakcję wyrzutową lewej komory (LVEF) obliczono ze wzoru: LVEF = (QDO - QSO/QDO) 100% (wg metody Simpsona). Obecność i stopień dyskinezy strefy martwicy i zmian bliznowatych, tętniaka, uszkodzeń mięśnia brodawkowatego i stref pęknięcia mięśnia sercowego określano również standardową techniką, w trybach dwuwymiarowym i jednowymiarowym oraz w trybach pulsacyjnego i ciągłego fali Dopplera Echo-CG . Selektywną CAG wykonano w ciągu pierwszych 24 godzin po przyjęciu chorego do szpitala na aparacie angiograficznym INNOVA 3100 (USA) z dostępem przez tętnicę promieniową za pomocą standardowych cewników Judkinsa lewego (Jl 4,0) i Judkinsa prawego (Jl 4,0), z użyciem X środki kontrastowe promieniowania (ultravist, Gadovist). Transiluminalną angioplastykę balonową ze stentowaniem objawowej tętnicy wykonywano w przypadku stwierdzenia istotnego hemodynamicznie zwężenia przekraczającego 65% techniką stentowania bezpośredniego.

Przygotowanie preparatów DNA Ekstrakcję DNA z krwi przeprowadzono metodą ekstrakcji fenolowo-chloroformowej. Pięć do sześciu objętości buforu A (10 mMTris-HCl, pH=7,5; 10 mM NaCl; 3 mM MgCl2) dodawano do 1 objętości próbki krwi i skrzepy rozcierano w homogenizatorze. Po odwirowaniu przy 2500 g przez 15 min osad przemyto trzykrotnie buforem A i ponownie zawieszono w 1 ml buforu B (10 mM EDTA; 100 mM NaCl; 50 mM Tris HCl, pH=8,5). Po dodaniu SDS do 0,5% i proteinazy E do 200 μg/ml, mieszaninę inkubowano przez 12 godzin w temperaturze 56°C. Odbiałczenie przeprowadzono sekwencyjnie za pomocą mieszaniny fenolu i chloroformu (1:1), fenolu nasyconego wodą, mieszaniny fenolu i chloroformu (1:1) i chloroformu. DNA wytrącono przez dodanie roztworu NaCl do 1 M i 1 V alkoholu izopropylowego. Następnie roztwór schładzano przez 1 godzinę w temperaturze -20°C. Osad otrzymany przez odwirowanie na mikrowirówce Eppendorfa przy 12000 g przez 15 min przemyto trzykrotnie 75% etanolem, a następnie odwirowano przez 5 min. 12000 g i po wysuszeniu w 56 °C rozpuszczono w deinanizowanej wodzie do stężenia DNA 0,5 µg/µl. Genotypowanie polimorfizmów przeprowadzono metodą PCR w czasie rzeczywistym zgodnie z protokołem producenta (sondy TaqMan, Thermo Fisher Scientific, USA) na instrument StepOnePlus. Zostały one wybrane zgodnie z wynikami międzynarodowych badań asocjacyjnych całego genomu (GWAS), które potwierdziły związek tych SNP z chorobą niedokrwienną serca (CHD), rozwojem niewydolności serca.

Statystyczne metody obróbki materiału Wpływ klinicznych, demograficznych, czynnościowych, biochemicznych, markerowych i metod leczenia na rozwój ostrej, szpitalnej i odległej pozawałowej przewlekłej niewydolności serca oceniono metodą ilorazu szans.

Analizę statystyczną danych genetyki molekularnej przeprowadzono przy użyciu pakietu oprogramowania SPSS 22.0. pierwszym krokiem było określenie częstości genotypów i alleli badanej CHF u pacjentów z OZW z podwyższonymi markerami kardiospecyficznymi oraz w grupie porównawczej, w której markery kardiospecyficzne mieściły się w granicach normy; następnie oceniliśmy zgodność częstości genotypów z równowagą Hardy'ego-Weinberga w grupie kontrolnej (kryterium chi-kwadrat). Porównanie poziomu wskaźników ilościowych u nosicieli różnych genotypów przeprowadzono po sprawdzeniu normalności rozkładu tych cech testem Kołmogorowa-Smirnowa. Jeśli cechy spełniały kryteria rozkładu normalnego, stosowano jednoczynnikową analizę wariancji. Istotność różnic między dwiema klasami genotypowymi sprawdzono dodatkowo za pomocą testu t dla dwóch niezależnych próbek. Istotność różnic między dwiema klasami genotypowymi badano dodatkowo testem Manna-Whitneya dla dwóch niezależnych prób, jeśli badana cecha nie spełniała kryteriów rozkładu normalnego, dokonywano porównania poziomu tej cechy wśród nosicieli różnych genotypów za pomocą testu Kruskala-Wallisa. Powiązanie SNP z czynnikami ryzyka związanymi ze zmiennymi kategorycznymi przetestowano za pomocą tabel koniugacji przy użyciu testu chi-kwadrat Pearsona. W przypadku tabel czteropolowych porównaliśmy próbki według genotypu i częstości alleli, stosując dokładne dwustronne kryterium Fishera. Ryzyko wystąpienia choroby/czynnik ryzyka dla określonego allelu lub genotypu obliczono jako iloraz szans.

Metody korelacji, analizy czynnikowej i regresji wykorzystano do opracowania modeli matematycznych do przewidywania ryzyka CVD poza zawałem. Pierwsze dwie grupy metod posłużyły do ​​identyfikacji istotnych zmiennych niezależnych (atrybutów), które dobrze korelują z prawdopodobieństwem wystąpienia niekorzystnego wyniku, ale słabo korelują ze sobą (aby wykluczyć współliniowość modelu). Metody analizy regresji posłużyły do ​​wyboru struktury modelu regresji oraz oszacowania jego współczynników. Do testowania adekwatności skonstruowanego modelu wykorzystano dwa współczynniki, które mają prostą interpretację:

• współczynnik czułości;
• współczynnik specyficzności;
• współczynnik dokładności.