Detekce abnormálních populací respiračních buněk u pacientů se screeningem rakoviny plic pomocí testu CyPath Lung Assay

Existuje mnoho příjemců Ministerstva obrany (DoD) zapsaných do různých programů screeningu rakoviny plic v celém DoD. Toto je prospektivní observační studie cytologie sputa pomocí průtokové cytometrie k analýze vzorků sputa odebraných od pacientů podstupujících každoroční screening rakoviny plic. Primárním cílem této studie je analyzovat buněčné profily vzorků sputa odebraných pomocí zařízení na podporu dýchacích cest Acapella® u pacientů s vyšším rizikem rakoviny plic. Cílovou populací jsou pacienti s vysokým rizikem rozvoje rakoviny plic ve věku 50–80 let s významnou kuřáckou anamnézou.

Vzorek sputa bude pacientovi odebírán po dobu tří dnů doma pomocí zařízení na podporu dýchacích cest Acapella® (Smiths Medical). Zařízení Acapella je neinvazivní zařízení na ochranu dýchacích cest, které pomáhá při kašli a pročišťuje hlen dýchacích cest u pacientů s bronchiektáziemi a jinými podobnými poruchami. Budou zařazeni mužští a ženský účastníci, kteří jsou v aktivní armádě a kteří jsou vystaveni vysokému riziku rakoviny plic a podstupují každoroční nízkodávkové CT (LDCT) hrudníku za účelem posouzení nových uzlin. Mezi osoby s vysokým rizikem rakoviny plic patří účastníci, kteří jsou ve věku 50–80 let, kouřili ekvivalent jedné krabičky cigaret denně po dobu 30 a více let a nepřestali kouřit v posledních 15 letech. Pacienti budou vybíráni na základě přítomnosti nebo nepřítomnosti nových CT nálezů; polovina kohorty nebude mít žádné nové CT nálezy a druhá polovina kohorty bude mít nové změny na CT svědčící pro možnou malignitu.

Účastníci, kteří podepíší informovaný souhlas a splní kritéria pro zařazení/vyloučení, budou zařazeni do výzkumné studie. Vzorek sputa bude účastníkem odebírán doma po dobu tří (3) dnů (1 vzorek/den) pomocí zařízení na podporu dýchacích cest Acapella© v souladu s pokyny k zařízení. Subjekty shromáždí své 3 vzorky sputa do jednoho odběrového pohárku a vrátí pohár na místo odběru na plicní klinice Brooke Army Medical Center do 2 týdnů po dokončení jejich plánovaného LDCT. Účastníci použijí Acapella® k uvolnění hlenu a pomohou při odběru vzorku sputa. Koordinátor studie poučí účastníka návštěvy 1 o použití Acapella® v souladu s pokyny pro zařízení. Po použití acapella® bude účastník instruován, aby počkal pět minut, než se shromáždí hlen v zadní části hrdla, a poté začal funět, aby vypudil sputum. Účastník pak bude instruován, aby plival sputum, aniž by si škrábal hrdlo, kašláním do nádobky na odběr vzorku. Účastníci by měli obdržet sběrný kelímek, zařízení Acapella® a pokyny, které si odnesou domů. Účastníci by měli doma po dobu tří dnů shromáždit všechny tři vzorky do jednoho sběrného pohárku. Po třetím odběru sputa doma pomocí Acapella® účastník vrátí kombinovaný vzorek sputa v jednom odběrovém kelímku na místo odběru.

Po přijetí na místo odběru budou vzorky sputa zchlazeny a pokud možno ještě tentýž den s chladným obalem odeslány do laboratoře bioAffinity (BA) ke zpracování pomocí testu CyPath Lung Assay. Získávání dat o buňkách ve vzorcích sputa provedou výzkumníci BA pomocí průtokového cytometru Navios ve společnosti Precision Pathology Services (PPS).

Vzorky sputa budou odebírány do sterilních odběrových nádobek bez konzervačních látek a uchovávány v chladničce (2-8 °C) až do odeslání. Pacienti budou uchovávat své vzorky v chladničce až do doručení na plicní kliniku. Vzorky budou až do odeslání uchovávány v chladničce na plicní klinice. V laboratořích BA bude vzorek zpracován, označen protilátkami a barvivy pro identifikaci buněčných populací a poté budou získána data a analyzována průtokovou cytometrií. Zpracování vzorků bude provedeno pod bezpečnostním krytem. Příprava vzorku sputa pro analýzu průtokovou cytometrií sestává z chemické disociace sputa za vzniku jednoho vzorku buněčné suspenze, který je značen fluorescenčně značenými protilátkami, které rozlišují populace leukocytů, jako jsou granulocyty, alveolární makrofágy a T a B lymfocyty. Protilátky také specificky barví nezánětlivé typy buněk, jako jsou dlaždicové epiteliální buňky ve sputu. Vzorek sputa je značen fluorescenčním porfyrinem meso-tetra-(4-karboxyfenyl) (TCPP), který se přednostně váže na rakovinné buňky a buňky související s rakovinou ve sputu. K odstranění mrtvých buněk z analýzy, včetně kontaminujících buněk dlaždicového epitelu (buňky na tvářích), se používá barvení životaschopnosti. Strategie hradlování také vylučuje dublety a trosky z analýzy. Přítomnost alveolárních makrofágů potvrzuje, že vzorek pochází z dýchacích cest.

Vzorky odebrané v místě odběru nebudou označeny jinou identifikací subjektu než jedinečně přidělenými čísly účastníků studie. Osoba odpovědná za přístup ke vzorkům nebude stejná osoba provádějící kterýkoli z testů. V důsledku toho budou výzkumníci BA zaslepeni, pokud jde o identitu účastníků.

Výzkumníci zaslepení identitou účastníka budou provádět experimenty, které porovnávají charakteristiky vzorků. Zjištění z tohoto výzkumu nebudou poskytnuta poskytovatelům k diagnostice malignity u účastníků ani nebudou využita při následných rozhodnutích o léčbě.

Pokud je odběr vzorku nedostatečný, bude pacientům poskytnuta jedna dodatečná odběrová souprava pro opětovné odeslání vzorku sputa.

Pro každého pacienta budou shromážděny následující klinické údaje.

1. Demografické údaje (věk, pohlaví, výška, váha)
2. Lékařská a chirurgická anamnéza včetně plicních onemocnění.
3. Užívání léků
4. Historie kouření
5. Výsledky nejnovějšího nízkodávkového CT (LDCT) pro přítomnost/nepřítomnost nových nálezů.