<p>Svalový zobrazovací projekt využívající anatomopatologii a tomografii s plným polem s optickou koherencí</p> (PIMANT)

Úvod Myositida představuje skupinu zánětlivých onemocnění postihujících kosterní svaly, charakterizovanou zánětlivou infiltrací svalové tkáně. Tento stav může mít různé etiologie, jako jsou infekce, autoimunitní onemocnění (např. dermatomyositida nebo polymyositida) nebo léky vyvolaná onemocnění. Časná diagnostika a přesné posouzení svalového zánětu jsou zásadní pro terapeutické řízení těchto pacientů.

Konvenční analytické techniky, jako je histopatologie, umožňují vizualizaci a analýzu svalových lézí a zánětu pomocí barvení histologických řezů. Tato metoda však vyžaduje několik týdnů práce, než lze získat výsledek. Optická koherenční tomografie v plném poli (OCT), neinvazivní zobrazovací technika, by mohla nabídnout významné výhody z hlediska rychlosti vyšetření a rozlišení svalových struktur, zejména pro vizualizaci zánětlivé infiltrace.

Tento výzkumný projekt navrhuje porovnat konvenční histopatologii a optickou koherenční tomografii v plném poli pro analýzu svalových biopsií od zdravých jedinců i pacientů s podezřením na myositidu.

Hlavním cílem této prospektivní a srovnávací studie bude nejprve stanovit referenční standard analýzou kontrolních biopsií oběma metodami a poté obdobně vyhodnotit zánět svalů zjištěný u potvrzených případů myositidy. Budou posouzeny výhody a omezení jednotlivých technik při detekci této patologie.

Cíle výzkumu

1. Analyzovat prostorové rozlišení obou metod pro vizualizaci histopatologických detailů na úrovni svalových vláken, pojivové tkáně a krevních cév.
2. Porovnat schopnost konvenční histopatologie a optické koherenční tomografie v plném poli (OCT) detekovat svalový zánět u svalových biopsií zdravých jedinců a pacientů s myositidou.
3. Vyhodnotit diagnostickou přesnost obou technik při identifikaci abnormalit souvisejících se zánětem, jako je infiltrace zánětlivými buňkami (lymfocyty, makrofágy), degradace svalových vláken a fibróza.
4. Porovnat dobu akvizice a snadnost použití každé metody pro analýzu svalové tkáně v klinickém prostředí.

Hypotézy Optická koherenční tomografie v plném poli umožní vizualizaci zánětlivé infiltrace a svalových abnormalit v reálném čase s mikroskopickým rozlišením, neinvazivním, rychlým a dynamickým způsobem.

Tyto výsledky by mohly velmi rychle doplnit výsledky získané anatomo-patologií, jejímž cílem je popsat klasické histopatologické aspekty myositidy, jako je svalová nekróza, zánětlivá infiltrace a fibróza.

Metodologie

1. Výběr vzorků

   • Skupiny pacientů:

   • Skupina 1 (zdraví pacienti): Svalové biopsie od přibližně deseti zdravých dospělých pacientů bez anamnézy svalových, neurodegenerativních nebo zánětlivých onemocnění, podstupujících ortopedickou operaci. Věkový rozsah by měl být variabilní (18–90 let), aby byl reprezentativní pro populaci a zohlednil přirozenou atrofii související s věkem.
   • Skupina 2 (pacienti s podezřením na myositidu): Svalové biopsie od dospělých pacientů s klinickými příznaky odpovídajícími myositidě (svalová únava, bolest, svalová slabost) a klinickým podezřením potvrzeným jinými diagnostickými testy (např. sérologie, EMG, klinické vyšetření).

   Zdravá svalová tkáň bude získána z resekce nutné při ortopedické operaci. Tento chirurgický odpad nepředstavuje další vzorky.

   Biopsie pro podezření na myositidu budou prováděny jako součást diagnostického procesu a nevyžadují žádný další odběr.

   Informační list bude pacientovi poskytnut a chirurg získá jeho souhlas před zákrokem. Všichni pacienti musí být plnoletí, přidruženi nebo kryti systémem sociálního zabezpečení a nesmí podléhat žádnému opatrovnictví nebo ochranným opatřením. Těhotné ženy a dospělí neschopní vyjádřit souhlas nemohou být do výzkumného protokolu zařazeni.

2. Konvenční anatomo-patologická analýza

   • Vzorky budou zmrazeny v isopentanu, skladovány při -80 °C a poté transportovány na suchém ledu na Oddělení anatomo-patologie Hospices Civils de Lyon pro značení řezů.
   • Histologické barvení zdravých tkání: Na kontrolních biopsiích budou provedena tři standardní barvení (hematoxylin a eosin (H&E), Gomoriho barvení, typizace vláken) pro získání strukturálních a metabolických údajů.
   • Histologické barvení v případech podezření na myositidu: Kromě tří standardních barvení budou provedena také barvení na zánětlivé markery, jmenovitě hlavní histokompatibilní komplex (HLA I, HLA DR), komplement (C5b9), autofagie (p62) a diferenciační antigeny (CD56, CD31).

3. Analýza optickou koherenční tomografií v plném poli (OCT)

   • Technologie OCT v plném poli umožňuje zobrazování s mikrometrovým rozlišením bez nutnosti předchozí přípravy vzorku. OCT bude použita k zobrazení vzorků svalové tkáně v reálném čase, a to jak strukturálně (FF-OCT), tak dynamicky (DCI). Bude získána série řezů o tloušťce 1 µm. Snímky budou poté převedeny algoritmem, který reprodukuje barvení hematoxylinem a eosinem.
   • OCT snímky by mohly umožnit vizualizaci struktury svalových vláken, okolní pojivové tkáně a oblastí zánětlivé infiltrace.
4. Porovnání metod Kvalitativní analýza: Snímky získané OCT budou vizuálně porovnány se snímky získanými konvenční histologií po skenování sklíček. Toto srovnání provedou specializovaní anatomo-patologové, aby zhodnotili schopnost každé metody detekovat svalové abnormality a zánět. Může být použit algoritmus umělé inteligence pro usnadnění srovnání.
5. Očekávané výsledky Výsledky nám umožní zhodnotit klinickou hodnotu OCT jako alternativní nebo doplňkové zobrazovací metody ke konvenční histopatologii. Pokud se OCT ukáže jako účinná pro detekci svalového zánětu, mohla by se stát cenným nástrojem pro ultrarychlou diagnostiku.