Muskelafbildningsprojekt ved brug af ANatomopatologi og Fuldfelt Optisk Kohærens Tomografi (PIMANT)

Introduktion Myositis er en gruppe inflammatoriske sygdomme, der påvirker skeletmuskulatur, karakteriseret ved inflammatorisk infiltration af muskelvæv. Denne tilstand kan have forskellige ætiologier, såsom infektioner, autoimmune sygdomme (som dermatomyositis eller polymyositis) eller lægemiddelinducerede sygdomme. Tidlig diagnose og præcis vurdering af muskelinflammation er afgørende for den terapeutiske behandling af disse patienter.

Konventionelle analytiske teknikker, såsom histopatologi, muliggør visualisering og analyse af muskellæsioner og inflammation ved hjælp af farvning på histologiske snit. Denne metode kræver dog flere ugers arbejde, før et resultat kan opnås. Feltoptisk kohærenstomografi (OCT), en ikke-invasiv billeddannelsesteknik, kunne tilbyde betydelige fordele med hensyn til undersøgelseshastighed og opløsning af muskelstrukturer, især til visualisering af inflammatorisk infiltration.

Dette forskningsprojekt foreslår at sammenligne konventionel histopatologi og feltoptisk kohærenstomografi til analyse af muskelbiopsier fra både raske individer og patienter med mistanke om myositis.

Hovedformålet med denne prospektive og sammenlignende undersøgelse vil være først at etablere en referencestandard ved at analysere kontrolbiopsier ved hjælp af begge metoder, og derefter tilsvarende evaluere den muskelinflammation, der påvises i bekræftede tilfælde af myositis. De respektive fordele og begrænsninger ved hver teknik vil blive vurderet i påvisningen af denne patologi.

Forskningsmål

1. At analysere den rumlige opløsning af begge metoder til visualisering af histopatologiske detaljer på niveau med muskelfibre, bindevæv og blodkar.
2. At sammenligne evnen hos konventionel histopatologi og feltoptisk kohærenstomografi (OCT) til at detektere muskelinflammation i muskelbiopsier fra raske individer og patienter med myositis.
3. At evaluere den diagnostiske nøjagtighed af begge teknikker til at identificere inflammationsrelaterede abnormiteter, såsom infiltration af inflammatoriske celler (lymfocytter, makrofager), muskelfibernedbrydning og fibrose.
4. At sammenligne anskaffelsestid og brugervenlighed for hver metode til analyse af muskelvæv i en klinisk sammenhæng.

Hypoteser Feltoptisk kohærenstomografi vil muliggøre real-time visualisering af inflammatorisk infiltration og muskelabnormiteter med mikroskopisk opløsning på en ikke-invasiv, hurtig og dynamisk måde.

Disse resultater kunne meget hurtigt supplere dem, der opnås ved anatomo-patologi, som sigter mod at beskrive de klassiske histopatologiske aspekter af myositis, såsom muskelnekrose, inflammatorisk infiltration og fibrose.

Metodologi

1. Prøveudvælgelse

   • Patientgrupper:

   • Gruppe 1 (raske patienter): Muskelbiopsier fra omkring ti raske voksne patienter uden historie med muskulære, neurodegenerative eller inflammatoriske sygdomme, som gennemgår ortopædisk kirurgi. Aldersgruppen bør være variabel (18-90 år) for at være repræsentativ for befolkningen og tage højde for naturlig aldersrelateret atrofi.
   • Gruppe 2 (patienter med mistanke om myositis): Muskelbiopsier fra voksne patienter med kliniske symptomer forenelige med myositis (muskeltræthed, smerte, muskelsvaghed) og klinisk mistanke bekræftet af andre diagnostiske tests (f.eks. serologi, EMG, klinisk undersøgelse).

   Rask muskelvæv vil blive opnået fra en resektion nødvendig under ortopædisk kirurgi. Dette kirurgiske affald udgør ikke yderligere prøver.

   Biopsier ved mistanke om myositis vil blive udført som en del af den diagnostiske proces og kræver ingen yderligere prøvetagning.

   En informationsseddel vil blive givet til patienten, og kirurgen vil indhente deres samtykke før proceduren. Alle patienter skal være myndige, tilsluttet eller dækket af socialsikringssystemet og ikke underlagt nogen værgemål eller beskyttelsesforanstaltninger. Gravide kvinder og voksne, der ikke er i stand til at give deres samtykke, kan ikke inkluderes i forskningsprotokollen.

2. Konventionel anatomo-patologisk analyse

   • Prøverne vil blive frosset i isopentan, opbevaret ved -80°C og derefter transporteret på tøris til Anatomopatologisk Afdeling ved Hospices Civils de Lyon til snitmærkning.
   • Histologisk farvning af raske væv: Tre standardfarvninger vil blive udført på kontrolbiopsier (hæmatoxylin og eosin (H&E), Gomori-farvning, fibertyping) for at indsamle strukturelle og metabolske data.
   • Histologisk farvning ved mistanke om myositis: De tre standardfarvninger vil også blive udført, samt farvninger for inflammatoriske markører, nemlig major histocompatibility complex (HLA I, HLA DR), komplement (C5b9), autofagi (p62) og cluster of differentiation (CD56, CD31).

3. Analyse af feltoptisk kohærenstomografi (OCT)

   • Helikts-OCT teknologi muliggør billeddannelse med mikrometeropløsning uden behov for forudgående prøveforberedelse. OCT vil blive brugt til at afbilde muskelvævsprøver i realtid, både strukturelt (FF-OCT) og dynamisk (DCI). En serie af 1 µm tykke snit vil blive erhvervet. Billederne vil derefter blive konverteret af en algoritme til at gengive hæmatoxylin og eosin farvning.
   • OCT-billeder kan muliggøre visualisering af muskelfiberstruktur, omgivende bindevæv og områder med inflammatorisk infiltration.
4. Sammenligning af metoder Kvalitativ analyse: Billeder opnået ved OCT vil blive visuelt sammenlignet med billeder opnået ved konventionel histologi efter scanning af objektglassene. Denne sammenligning vil blive udført af specialiserede anatomo-patologer for at evaluere hver metodes evne til at detektere muskelabnormiteter og inflammation. En kunstig intelligens-algoritme kan bruges til at lette sammenligningen.
5. Forventede resultater Resultaterne vil give os mulighed for at evaluere den kliniske værdi af OCT som et alternativt eller komplementært billeddannelsesværktøj til konventionel histopatologi. Hvis OCT viser sig effektiv til at detektere muskelinflammation, kan det blive et værdifuldt værktøj til ultrahurtig diagnose.