Progetto di Imaging Muscolare tramite Anatomopatologia e Tomografia Ottica a Campo Pieno (PIMANT)

Introduzione La miosite è un gruppo di malattie infiammatorie che colpiscono i muscoli scheletrici, caratterizzate da infiltrazione infiammatoria del tessuto muscolare. Questa condizione può avere varie eziologie, come infezioni, malattie autoimmuni (come la dermatomiosite o la polimiosite), o malattie indotte da farmaci. La diagnosi precoce e una valutazione accurata dell'infiammazione muscolare sono essenziali per la gestione terapeutica di questi pazienti.

Le tecniche analitiche convenzionali, come l'istopatologia, permettono la visualizzazione e l'analisi delle lesioni muscolari e dell'infiammazione utilizzando colorazioni su sezioni istologiche. Tuttavia, questo metodo richiede diverse settimane di lavoro prima di ottenere un risultato. La tomografia a coerenza ottica in campo completo (OCT), una tecnica di imaging non invasiva, potrebbe offrire vantaggi significativi in termini di velocità d'esame e risoluzione delle strutture muscolari, in particolare per la visualizzazione dell'infiltrazione infiammatoria.

Questo progetto di ricerca si propone di confrontare l'istopatologia convenzionale e la tomografia a coerenza ottica in campo completo per l'analisi di biopsie muscolari di individui sani e di pazienti con sospetta miosite.

L'obiettivo principale di questo studio prospettico e comparativo sarà innanzitutto stabilire uno standard di riferimento analizzando biopsie di controllo con entrambi i metodi, e successivamente valutare in modo simile l'infiammazione muscolare rilevata in casi confermati di miosite. I rispettivi vantaggi e limiti di ciascuna tecnica saranno valutati nella rilevazione di questa patologia.

Obiettivi della Ricerca

1. Analizzare la risoluzione spaziale di entrambi i metodi per la visualizzazione dei dettagli istopatologici a livello delle fibre muscolari, del tessuto connettivo e dei vasi sanguigni.
2. Confrontare la capacità dell'istopatologia convenzionale e della tomografia a coerenza ottica in campo completo (OCT) di rilevare l'infiammazione muscolare in biopsie muscolari di individui sani e pazienti con miosite.
3. Valutare l'accuratezza diagnostica di entrambe le tecniche nell'identificare anomalie legate all'infiammazione, come infiltrazione di cellule infiammatorie (linfociti, macrofagi), degradazione delle fibre muscolari e fibrosi.
4. Confrontare il tempo di acquisizione e la facilità d'uso di ciascun metodo per analizzare il tessuto muscolare in ambito clinico.

Ipotesi La tomografia a coerenza ottica in campo completo permetterà la visualizzazione in tempo reale dell'infiltrazione infiammatoria e delle anomalie muscolari con risoluzione microscopica, in modo non invasivo, rapido e dinamico.

Questi risultati potrebbero integrare molto rapidamente quelli ottenuti dall'anatomopatologia che mira a descrivere gli aspetti istopatologici classici della miosite, come necrosi muscolare, infiltrazione infiammatoria e fibrosi.

Metodologia

1. Selezione dei Campioni

   • Gruppi di Pazienti:

   • Gruppo 1 (pazienti sani): Biopsie muscolari da circa dieci pazienti adulti sani senza storia di malattie muscolari, neurodegenerative o infiammatorie, sottoposti a chirurgia ortopedica. La fascia d'età deve essere variabile (18-90 anni) per essere rappresentativa della popolazione e per tenere conto dell'atrofia legata all'età.
   • Gruppo 2 (pazienti con sospetta miosite): Biopsie muscolari da pazienti adulti con sintomi clinici compatibili con miosite (affaticamento muscolare, dolore, debolezza muscolare) e sospetto clinico confermato da altri esami diagnostici (es. sierologia, EMG, esame clinico).

   Il tessuto muscolare sano sarà ottenuto da una resezione necessaria durante l'intervento ortopedico. Questo scarto chirurgico non costituisce campioni aggiuntivi.

   Le biopsie per sospetta miosite saranno eseguite come parte del processo diagnostico e non richiedono alcun prelievo aggiuntivo.

   Un foglio informativo sarà consegnato al paziente, e il chirurgo otterrà il suo consenso prima della procedura. Tutti i pazienti devono essere maggiorenni, affiliati o coperti dal sistema di sicurezza sociale, e non soggetti a nessuna tutela legale o misura protettiva. Le donne incinte e gli adulti incapaci di esprimere il consenso non possono essere inclusi nel protocollo di ricerca.

2. Analisi Anatomopatologica Convenzionale

   • I campioni saranno congelati in isopentano, conservati a -80°C, e poi trasportati su ghiaccio secco al Dipartimento di Anatomopatologia degli Hospices Civils de Lyon per la marcatura delle sezioni.
   • Colorazioni istologiche dei tessuti sani: Tre colorazioni standard saranno eseguite sulle biopsie di controllo (ematossilina e eosina (H&E), colorazione di Gomori, tipizzazione delle fibre) per raccogliere dati strutturali e metabolici.
   • Colorazioni istologiche in caso di sospetta miosite: Le tre colorazioni standard saranno eseguite, così come le colorazioni per marcatori infiammatori, ovvero il complesso maggiore di istocompatibilità (HLA I, HLA DR), il complemento (C5b9), l'autofagia (p62), e i cluster di differenziazione (CD56, CD31).

3. Analisi con Tomografia a Coerenza Ottica in campo completo (OCT)

   • La tecnologia OCT in campo completo permette l'imaging con risoluzione micrometrica senza la necessità di preparazione preliminare del campione. L'OCT sarà utilizzata per imaging dei campioni di tessuto muscolare in tempo reale, sia strutturalmente (FF-OCT) che dinamicamente (DCI). Verrà acquisita una serie di fette da 1 µm. Le immagini saranno poi convertite da un algoritmo per riprodurre la colorazione ematossilina e eosina.
   • Le immagini OCT potrebbero permettere la visualizzazione della struttura delle fibre muscolari, del tessuto connettivo circostante e delle aree di infiltrazione infiammatoria.
4. Confronto dei metodi Analisi qualitativa: Le immagini ottenute con OCT saranno confrontate visivamente con quelle ottenute con istologia convenzionale dopo scansione dei vetrini. Questo confronto sarà condotto da anatomopatologi specializzati per valutare la capacità di ciascun metodo di rilevare anomalie muscolari e infiammazione. Un algoritmo di intelligenza artificiale potrà essere utilizzato per facilitare il confronto.
5. Risultati Attesi I risultati permetteranno di valutare il valore clinico dell'OCT come metodo di imaging alternativo o complementare all'istopatologia convenzionale. Se l'OCT si dimostrerà efficace per rilevare l'infiammazione muscolare, potrebbe diventare uno strumento prezioso per una diagnosi ultra-rapida.