Projeto de Imagem Muscular Usando Anatomopatologia e Tomografia de Coerência Óptica de Campo Completo (PIMANT)

Introdução A miosite representa um grupo de doenças inflamatórias que afetam os músculos esqueléticos, caracterizadas por infiltração inflamatória do tecido muscular. Esta condição pode ter várias etiologias, como infeções, doenças autoimunes (como dermatomiosite ou polimiosite) ou doenças induzidas por fármacos. O diagnóstico precoce e a avaliação precisa da inflamação muscular são essenciais para a gestão terapêutica destes doentes.

As técnicas analíticas convencionais, como a histopatologia, permitem a visualização e análise das lesões musculares e inflamação através de colorações em secções histológicas. No entanto, este método requer várias semanas de trabalho até se obter um resultado. A tomografia de coerência ótica de campo total (OCT), uma técnica de imagem não invasiva, pode oferecer vantagens significativas em termos de rapidez de exame e resolução das estruturas musculares, particularmente para visualizar a infiltração inflamatória.

Este projeto de investigação propõe comparar a histopatologia convencional e a tomografia de coerência ótica de campo total para a análise de biópsias musculares de indivíduos saudáveis e de doentes com suspeita de miosite.

O objetivo principal deste estudo prospetivo e comparativo será primeiro estabelecer um padrão de referência através da análise de biópsias de controlo usando ambos os métodos, e depois avaliar de forma semelhante a inflamação muscular detetada em casos confirmados de miosite. As respetivas vantagens e limitações de cada técnica serão avaliadas na deteção desta patologia.

Objetivos de Investigação

1. Analisar a resolução espacial de ambos os métodos para visualizar detalhes histopatológicos ao nível das fibras musculares, tecido conjuntivo e vasos sanguíneos.
2. Comparar a capacidade da histopatologia convencional e da tomografia de coerência ótica de campo total (OCT) para detetar inflamação muscular em biópsias musculares de indivíduos saudáveis e de doentes com miosite.
3. Avaliar a precisão diagnóstica de ambas as técnicas na identificação de anomalias relacionadas com a inflamação, como infiltração de células inflamatórias (linfócitos, macrófagos), degradação das fibras musculares e fibrose.
4. Comparar o tempo de aquisição e a facilidade de uso de cada método para analisar tecido muscular num contexto clínico.

Hipóteses A tomografia de coerência ótica de campo total permitirá a visualização em tempo real da infiltração inflamatória e das anomalias musculares com resolução microscópica, de forma não invasiva, rápida e dinâmica.

Estes resultados poderão muito rapidamente complementar os obtidos pela anatopatologia que visa descrever os aspetos histopatológicos clássicos da miosite, como necrose muscular, infiltração inflamatória e fibrose.

Metodologia

1. Seleção da Amostra

   • Grupos de Doentes:

   • Grupo 1 (doentes saudáveis): Biópsias musculares de aproximadamente dez doentes adultos saudáveis sem historial de doença muscular, neurodegenerativa ou inflamatória, submetidos a cirurgia ortopédica. A faixa etária deve ser variável (18-90 anos) para ser representativa da população e ter em conta a atrofia natural relacionada com a idade.
   • Grupo 2 (doentes com suspeita de miosite): Biópsias musculares de doentes adultos que apresentam sintomas clínicos consistentes com miosite (fadiga muscular, dor, fraqueza muscular) e suspeita clínica confirmada por outros testes de diagnóstico (por exemplo, serologia, EMG, exame clínico).

   O tecido muscular saudável será obtido a partir de uma resseção necessária durante a cirurgia ortopédica. Este desperdício cirúrgico não constitui amostras adicionais.

   As biópsias para suspeita de miosite serão realizadas no âmbito do processo de diagnóstico e não requerem qualquer amostragem adicional.

   Uma folha de informação será entregue ao doente, e o cirurgião obterá o seu consentimento antes do procedimento. Todos os doentes devem ser maiores de idade, filiados ou abrangidos pelo sistema de segurança social, e não estar sujeitos a qualquer tutela legal ou medidas de proteção. Mulheres grávidas e adultos incapazes de expressar o seu consentimento não podem ser incluídos no protocolo de investigação.

2. Análise Anatomopatológica Convencional

   • As amostras serão congeladas em isopentano, armazenadas a -80°C e depois transportadas em gelo seco para o Departamento de Anatomopatologia dos Hospices Civils de Lyon para marcação das secções.
   • Coloração histológica de tecidos saudáveis: Três colorações padrão serão realizadas nas biópsias de controlo (hematoxilina e eosina (H&E), coloração de Gomori, tipificação de fibras) para recolher dados estruturais e metabólicos.
   • Coloração histológica em casos de suspeita de miosite: As três colorações padrão também serão realizadas, bem como colorações para marcadores inflamatórios, nomeadamente o complexo principal de histocompatibilidade (HLA I, HLA DR), complemento (C5b9), autofagia (p62) e clusters de diferenciação (CD56, CD31).

3. Análise por tomografia de coerência ótica de campo total (OCT)

   • A tecnologia OCT de campo total permite a imagem com resolução micrométrica sem necessidade de preparação prévia da amostra. A OCT será utilizada para imagear amostras de tecido muscular em tempo real, tanto estruturalmente (FF-OCT) como dinamicamente (DCI). Será adquirida uma série de fatias de 1 µm. As imagens serão convertidas por um algoritmo para reproduzir a coloração de hematoxilina e eosina.
   • As imagens OCT podem permitir a visualização da estrutura das fibras musculares, tecido conjuntivo circundante e áreas de infiltração inflamatória.
4. Comparação dos métodos Análise qualitativa: As imagens obtidas por OCT serão comparadas visualmente com as imagens obtidas por histologia convencional após digitalização das lâminas. Esta comparação será conduzida por anatomopatologistas especializados para avaliar a capacidade de cada método para detetar anomalias musculares e inflamação. Poderá ser utilizado um algoritmo de inteligência artificial para facilitar a comparação.
5. Resultados Esperados Os resultados permitirão avaliar o valor clínico da OCT como método de imagem alternativo ou complementar à histopatologia convencional. Se a OCT se mostrar eficaz na deteção da inflamação muscular, pode tornar-se uma ferramenta valiosa para o diagnóstico ultrarrápido.