Proyecto de Imagen Muscular Usando Anatomopatología y Tomografía de Coherencia Óptica de Campo Completo (PIMANT)

Introducción La miositis representa un grupo de enfermedades inflamatorias que afectan los músculos esqueléticos, caracterizadas por la infiltración inflamatoria del tejido muscular. Esta afección puede tener diversas etiologías, como infecciones, enfermedades autoinmunes (como dermatomiositis o polimiositis) o enfermedades inducidas por fármacos. El diagnóstico temprano y la evaluación precisa de la inflamación muscular son esenciales para el manejo terapéutico de estos pacientes.

Las técnicas analíticas convencionales, como la histopatología, permiten visualizar y analizar las lesiones musculares y la inflamación mediante tinciones en secciones histológicas. Sin embargo, este método requiere varias semanas de trabajo antes de obtener un resultado. La tomografía de coherencia óptica de campo completo (OCT), una técnica de imagen no invasiva, podría ofrecer ventajas significativas en términos de rapidez de examen y resolución de las estructuras musculares, particularmente para visualizar la infiltración inflamatoria.

Este proyecto de investigación propone comparar la histopatología convencional y la tomografía de coherencia óptica de campo completo para el análisis de biopsias musculares tanto de individuos sanos como de pacientes con sospecha de miositis.

El objetivo principal de este estudio prospectivo y comparativo será primero establecer un estándar de referencia analizando biopsias de control mediante ambos métodos, y luego evaluar de manera similar la inflamación muscular detectada en casos confirmados de miositis. Se evaluarán las respectivas ventajas y limitaciones de cada técnica en la detección de esta patología.

Objetivos de la Investigación

1. Analizar la resolución espacial de ambos métodos para visualizar detalles histopatológicos a nivel de fibras musculares, tejido conectivo y vasos sanguíneos.
2. Comparar la capacidad de la histopatología convencional y la tomografía de coherencia óptica de campo completo (OCT) para detectar inflamación muscular en biopsias musculares de individuos sanos y pacientes con miositis.
3. Evaluar la precisión diagnóstica de ambas técnicas en la identificación de anomalías relacionadas con la inflamación, como infiltración de células inflamatorias (linfocitos, macrófagos), degradación de fibras musculares y fibrosis.
4. Comparar el tiempo de adquisición y la facilidad de uso de cada método para analizar tejido muscular en un entorno clínico.

Hipótesis La tomografía de coherencia óptica de campo completo permitirá la visualización en tiempo real de la infiltración inflamatoria y las anomalías musculares con resolución microscópica, de manera no invasiva, rápida y dinámica.

Estos resultados podrían complementar muy rápidamente los obtenidos por anatomopatología, cuyo objetivo es describir los aspectos histopatológicos clásicos de la miositis, como la necrosis muscular, la infiltración inflamatoria y la fibrosis.

Metodología

1. Selección de Muestras

   • Grupos de Pacientes:

   • Grupo 1 (pacientes sanos): Biopsias musculares de aproximadamente diez pacientes adultos sanos sin antecedentes de enfermedad muscular, neurodegenerativa o inflamatoria, sometidos a cirugía ortopédica. El rango de edad debe ser variable (18-90 años) para ser representativo de la población y tener en cuenta la atrofia natural relacionada con la edad.
   • Grupo 2 (pacientes con sospecha de miositis): Biopsias musculares de pacientes adultos que presentan síntomas clínicos compatibles con miositis (fatiga muscular, dolor, debilidad muscular) y sospecha clínica confirmada por otras pruebas diagnósticas (por ejemplo, serología, EMG, examen clínico).

   El tejido muscular sano se obtendrá de una resección necesaria durante la cirugía ortopédica. Este desecho quirúrgico no constituye muestras adicionales.

   Las biopsias por sospecha de miositis se realizarán como parte del proceso diagnóstico y no requieren ninguna muestra adicional.

   Se entregará una hoja informativa al paciente, y el cirujano obtendrá su consentimiento antes del procedimiento. Todos los pacientes deben ser mayores de edad, afiliados o cubiertos por el sistema de seguridad social, y no estar sujetos a ninguna tutela legal o medidas de protección. Las mujeres embarazadas y los adultos incapaces de expresar su consentimiento no pueden ser incluidos en el protocolo de investigación.

2. Análisis Anatomopatológico Convencional

   • Las muestras se congelarán en isopentano, se almacenarán a -80°C y luego se transportarán en hielo seco al Departamento de Anatomopatología de los Hospices Civils de Lyon para el etiquetado de las secciones.
   • Tinción histológica de tejidos sanos: Se realizarán tres tinciones estándar en las biopsias de control (hematoxilina y eosina (H&E), tinción de Gomori, tipificación de fibras) para recopilar datos estructurales y metabólicos.
   • Tinción histológica en casos de sospecha de miositis: También se realizarán las tres tinciones estándar, así como tinciones para marcadores inflamatorios, a saber, el complejo mayor de histocompatibilidad (HLA I, HLA DR), complemento (C5b9), autofagia (p62) y grupos de diferenciación (CD56, CD31).

3. Análisis por tomografía de coherencia óptica de campo completo (OCT)

   • La tecnología OCT de campo completo permite obtener imágenes con resolución micrométrica sin necesidad de preparación previa de la muestra. La OCT se utilizará para obtener imágenes de muestras de tejido muscular en tiempo real, tanto estructuralmente (FF-OCT) como dinámicamente (DCI). Se adquirirá una serie de cortes de 1 µm. Luego, las imágenes se convertirán mediante un algoritmo para reproducir la tinción de hematoxilina y eosina.
   • Las imágenes de OCT podrían permitir la visualización de la estructura de las fibras musculares, el tejido conectivo circundante y las áreas de infiltración inflamatoria.
4. Comparación de métodos Análisis cualitativo: Las imágenes obtenidas por OCT se compararán visualmente con las imágenes obtenidas por histología convencional después de escanear los portaobjetos. Esta comparación será realizada por patólogos anatómicos especializados para evaluar la capacidad de cada método para detectar anomalías musculares e inflamación. Se podrá utilizar un algoritmo de inteligencia artificial para facilitar la comparación.
5. Resultados esperados Los resultados nos permitirán evaluar el valor clínico de la OCT como método de imagen alternativo o complementario a la histopatología convencional. Si la OCT demuestra ser eficaz para detectar la inflamación muscular, podría convertirse en una herramienta valiosa para el diagnóstico ultrarrápido.