Præ-endoskopi serologisk testning for cøliaki; en ny tilgang ved brug af hurtig antistoftestning

Cøliaki er den mest almindelige kroniske inflammatoriske tarmsygdom, som læger støder på. Internationalt er prævalensen estimeret ved serologisk screening hos raske frivillige mellem 0,5-1,0%. Historisk har patienter med cøliaki hos voksne klaget over symptomer, der tyder på dårlig absorption, diarré, vægttab eller anæmi. Denne præsentationsmåde beskrives nu som den klassiske (typiske) form. Manglende genkendelse af denne sygdom kan skyldes den snigende karakter af dens præsentation. Personer med udiagnosticeret cøliaki kan have adskillige hospitalsindlæggelser før diagnosen.

Selvom præsentationen af ​​patienter med cøliaki kan være protean, har serologiske markører givet en billig og ikke-invasiv metode, hvormed klinikere i både primær og sekundær pleje i første omgang kan genkende patienter, der kan have cøliaki. Formålet med denne undersøgelse er at vurdere den kliniske anvendelighed af den transglutaminase-baserede fuldblods-hurtigtest i forhold til nuværende serologiske tests og guldstandarden for duodenal biopsi.

Metoder:

Studiedesign og deltagergruppe 1 var en multicenter retrospektiv analyse af alle patienter med anæmi, der deltog i en gastroskopi med duodenal biopsi på fire britiske hospitaler (Addenbrooke's, Bradford, Hull og Whipps Cross) over en 12 måneders periode fra 2012 til 2014. Tilgængeligheden af ​​cøliakiserologi før gastroskopi blev gennemgået.

Gruppe 2 var en prospektiv undersøgelse, der sammenlignede Simtomax følsomhed med konventionel serologi i en jernmangel kohorte. Vi rekrutterede prospektivt 133 på hinanden følgende patienter (aldersinterval: 18-89 år, median 53) med jernmangel med eller uden anæmi, der deltog i en enkelt cøliakiforskningsendoskopiliste på det tertiære henvisningscenter Royal Hallamshire Hospital mellem 2013 og 2015. Alle rekrutterede patienter fik samtykke til undersøgelsen forud for gastroskopien. Patienterne gennemførte sideløbende point-of-care-testen, Simtomax, konventionel cøliakiserologi (IgA-TTG, IgA-EMA) og totale IgA-niveauer på endoskopienheden. Alle patienter fik derefter en gastroskopi med kvadrantisk duodenal biopsi fra den anden del af duodenum og mindst én duodenal bulb biopsi. Patienter blev udelukket fra undersøgelsen, hvis de var kendt for at have cøliaki eller var på en glutenfri diæt. Patienter med koagulopati, aktiv gastrointestinal blødning eller et mistænkt karcinom observeret under undersøgelsen blev også udelukket. Klinisk information om patienterne var tilgængelig for endoskopisten, men endoskopisten var blindet for resultaterne af Simtomax-testen.

Gruppe 3 var en retrospektiv histologisk analyse af patienter, der i 2013-2014 deltog i en separat ikke-coeliac-specifik jernmangelanæmiklinik på Northern General Hospital. Vi gennemgik deres tolvfingertarmshistologi og hospitalssagsnotater for at bestemme udbyttet af andre årsager end cøliaki i forbindelse med jernmangelanæmi.

Point-of-care test, Simtomax:

Simtomax er en point-of-care test for cøliaki fremstillet af Augurix Diagnostics, Schweiz. Det detekterer både IgA- og IgG-antistoffer mod DGP, såvel som det totale IgA-niveau. Analysen er baseret på lateral flow-immunokromatografi under anvendelse af kolloide guld-antihumane antistoffer som signaldetektor. Der kræves en prøve på 25 μl kapillært veneblod, som kan opnås ved hjælp af en simpel fingerstiksteknik. Analysen kan også udføres ved hjælp af en plasmaprøve enten i ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) eller heparin samt en separeret serumprøve, selvom der kræves et mindre prøvevolumen på 20 μl. Blodprøven påføres derefter testanordningen, efterfulgt af påføring af 5 dråber af den medfølgende bufferopløsning. Resultatet kan aflæses efter 10 minutter. Positive resultater er angivet ved tilstedeværelsen af ​​en solid rød testlinje for IgA- og/eller IgG-DGP-positivitet. En anden enkelt rød linje indikerer tilstedeværelsen af ​​IgA. En indbygget rød kontrollinje sikrer en korrekt fungerende test.

Serologi:

Total IgA blev målt på et Behring BN2 nefelometer. IgA-TTG-antistoffer blev evalueret under anvendelse af enzym-koblede immunosorbent assay-sæt (Aesku Diagnostics, Wendelsheim, Tyskland). En IgA-TTG titer på > 15 U/ml før 20/5/2014, et nyt cut-off niveau på >9 U/ml fra 20/5-11/12/2014 og derefter >7 U/ml fra 12/ 12/2014 og fremefter, blev betragtet som positive i henhold til producentens vejledning. IgA-EMA blev påvist ved immunofluorescens på primater-esophagussnit (bindingssted, Birmingham, UK).

Biopsier og histologi

I alt blev der taget mindst fem biopsier fra tolvfingertarmen, herunder mindst én fra tolvfingertarmen, med hver biopsi fikseret i formalin på tidspunktet for gastroskopien. Prøver blev derefter behandlet, orienteret og indlejret i paraffinvoks af patologisk afdeling. Standard 3 µm tykke snit på tre niveauer blev farvet med hæmatoxylin og eosin og rapporteret rutinemæssigt af gastrointestinale histopatologer uden kendskab til Simtomax-resultaterne. Villøs atrofi blev klassificeret i henhold til de modificerede Marsh-kriterier.

Diagnose af cøliaki:

Tilstedeværelsen af ​​villøs atrofi (Marsh 3a-3c) på histologi med en positiv IgA-EMA eller IgA-TTG var påkrævet til diagnosticering af cøliaki. I tilfælde af seronegativ villøs atrofi blev human leukocytantigen (HLA) genotypning udført med en negativ HLA DQ2 eller DQ8 fænotype brugt til at udelukke cøliaki. Understøttende oplysninger såsom familiehistorie og respons på en glutenfri diæt blev også taget i betragtning.