Preendoskopické sérologické vyšetření na celiakii; nový přístup využívající rychlé testování protilátek

Celiakie je nejčastějším chronickým zánětlivým onemocněním střev, se kterým se lékaři setkávají. Mezinárodně je prevalence odhadovaná sérologickým screeningem u zdravých dobrovolníků mezi 0,5-1,0 %. Historicky si pacienti s dospělou celiakií stěžovali na symptomy naznačující malabsorpci, průjem, úbytek hmotnosti nebo anémii. Tento způsob prezentace je nyní popisován jako klasická (typická) forma. Nerozpoznání této nemoci může být způsobeno zákeřnou povahou její prezentace. Jedinci s nediagnostikovanou celiakií mohou před diagnózou absolvovat četné hospitalizace.

Ačkoli prezentace pacientů s celiakií může být protea, sérologické markery poskytují levnou a neinvazivní metodu, pomocí které mohou lékaři v primární i sekundární péči zpočátku rozpoznat pacienty, kteří mohou mít celiakii. Cílem této studie je posoudit klinickou užitečnost rychlého testu založeného na transglutamináze plné krve oproti současným sérologickým testům a zlatému standardu duodenální biopsie.

Metody:

Návrh studie a účastníci Skupina 1 byla multicentrická retrospektivní analýza všech pacientů s anémií, kteří se zúčastnili gastroskopie s duodenální biopsií ve čtyřech britských nemocnicích (Addenbrooke's, Bradford, Hull a Whipps Cross) během 12měsíčního období od roku 2012 do roku 2014. Byla přezkoumána dostupnost sérologie celiakie před gastroskopií.

Skupina 2 byla prospektivní studií porovnávající citlivost Simtomaxu s konvenční sérologií v kohortě s nedostatkem železa. Prospektivně jsme přijali 133 po sobě jdoucích pacientů (věkové rozmezí: 18–89 let, medián 53) s nedostatkem železa s anémií nebo bez ní, kteří se v letech 2013 až 2015 zúčastnili jednoho seznamu výzkumných endoskopií celiakie v terciárním referenčním centru Royal Hallamshire Hospital. Všichni vybraní pacienti byli schváleni pro studii před gastroskopií. Pacienti současně podstoupili na endoskopické jednotce bodový test Simtomax, konvenční sérologii celiakie (IgA-TTG, IgA-EMA) a hladinu celkového IgA. U všech pacientů byla následně provedena gastroskopie s kvadrantickou biopsií duodena z druhé části duodena a minimálně jedna biopsie bulbu duodena. Pacienti byli ze studie vyloučeni, pokud bylo známo, že mají celiakii nebo drželi bezlepkovou dietu. Vyloučeni byli také pacienti s koagulopatií, aktivním gastrointestinálním krvácením nebo suspektním karcinomem pozorovaným během vyšetření. Endoskopista měl k dispozici klinické informace o pacientech, avšak endoskopista byl zaslepený k výsledkům testu Simtomax.

Skupina 3 byla retrospektivní histologická analýza pacientů navštěvujících v letech 2013-2014 samostatnou kliniku neceliakální specifické anémie z nedostatku železa v Northern General Hospital. Přezkoumali jsme jejich duodenální histologii a poznámky k nemocničním případům, abychom určili výnos jiných alternativních příčin než celiakie v souvislosti s anémií z nedostatku železa.

Test v místě péče, Simtomax:

Simtomax je bodový test na celiakii vyráběný společností Augurix Diagnostics, Švýcarsko. Detekuje jak IgA, tak IgG protilátky proti DGP, stejně jako celkovou hladinu IgA. Stanovení je založeno na laterální průtokové imunochromatografii využívající jako detektor signálu koloidní zlaté antihumánní protilátky. Vyžaduje se vzorek 25 μl kapilární žilní krve, kterou lze získat jednoduchou technikou píchnutí do prstu. Test lze také provést pomocí vzorku plazmy buď v kyselině ethylendiamintetraoctové (EDTA) nebo heparinu, stejně jako oddělený vzorek séra, i když je vyžadován menší objem vzorku 20 μl. Vzorek krve je poté aplikován na testovací zařízení a následně aplikováno 5 kapek dodaného tlumivého roztoku. Výsledek lze odečíst po 10 minutách. Pozitivní výsledky jsou indikovány přítomností plné červené testovací linie na pozitivitu IgA a/nebo IgG-DGP. Druhá červená čára indikuje přítomnost IgA. Zabudovaná červená kontrolní linka zajišťuje správně fungující test.

sérologie:

Celkový IgA byl měřen na Behring BN2 nefelometru. Protilátky IgA-TTG byly hodnoceny pomocí souprav pro imunosorbentní testy s enzymatickou vazbou (Aesku Diagnostics, Wendelsheim, Německo). Titr IgA-TTG > 15 U/ml před 20. 5. 2014, nová hraniční hladina > 9 U/ml od 20. 5. do 11. 12. 2014 a poté > 7 U/ml od 12. 12/2014 a dále, byly podle pokynů výrobce považovány za pozitivní. IgA-EMA byl detekován imunofluorescencí na řezech jícnu primátů (Binding Site, Birmingham, UK).

Biopsie a histologie

Celkem bylo odebráno alespoň pět biopsií z duodena, včetně alespoň jedné z bulbu duodena, přičemž každá biopsie byla v době gastroskopie fixována ve formalínu. Vzorky pak patologické oddělení zpracovalo, zorientovalo a zalilo do parafínového vosku. Standardní 3 µm silné řezy na třech úrovních byly obarveny hematoxylinem a eosinem a rutinně hlášeny gastrointestinálními histopatology bez znalosti výsledků Simtomaxu. Atrofie klků byla hodnocena podle modifikovaných Marshových kritérií.

Diagnóza celiakie:

Pro diagnostiku celiakie byla nutná přítomnost vilózní atrofie (Marsh 3a-3c) na histologii s pozitivní IgA-EMA nebo IgA-TTG. V případech séronegativní atrofie klků byla provedena genotypizace lidského leukocytárního antigenu (HLA), přičemž k vyloučení celiakie byl použit negativní fenotyp HLA DQ2 nebo DQ8. Zohledněny byly také podpůrné informace, jako je rodinná anamnéza a reakce na bezlepkovou dietu.