Test sierologici pre-endoscopici per la malattia celiaca; un nuovo approccio utilizzando il test rapido degli anticorpi

La celiachia è la condizione infiammatoria cronica intestinale più comune riscontrata dai medici. A livello internazionale la prevalenza stimata dallo screening sierologico nei volontari sani è compresa tra lo 0,5 e l'1,0%. Storicamente, i pazienti con celiachia adulta lamentavano sintomi indicativi di malassorbimento, diarrea, perdita di peso o anemia. Questo modo di presentazione è ora descritto come la forma classica (tipica). Il mancato riconoscimento di questa malattia può essere dovuto alla natura insidiosa della sua presentazione. Gli individui con malattia celiaca non diagnosticata possono avere numerose presenze ospedaliere, prima della diagnosi.

Sebbene la presentazione dei pazienti con malattia celiaca possa essere proteiforme, i marcatori sierologici hanno fornito un metodo economico e non invasivo mediante il quale i medici delle cure primarie e secondarie possono inizialmente riconoscere i pazienti che potrebbero avere la malattia celiaca. Lo scopo di questo studio è valutare l'utilità clinica del test rapido basato sulla transglutaminasi del sangue intero rispetto agli attuali test sierologici e al gold standard della biopsia duodenale.

Metodi:

Il disegno dello studio e il gruppo di partecipanti 1 era un'analisi retrospettiva multicentrica di tutti i pazienti con anemia sottoposti a gastroscopia con biopsia duodenale in quattro ospedali del Regno Unito (Addenbrooke's, Bradford, Hull e Whipps Cross) per un periodo di 12 mesi compreso tra il 2012 e il 2014. È stata esaminata la disponibilità della sierologia celiaca prima della gastroscopia.

Il gruppo 2 era uno studio prospettico che confrontava la sensibilità di Simtomax alla sierologia convenzionale in una coorte con carenza di ferro. Abbiamo reclutato in modo prospettico 133 pazienti consecutivi (fascia di età: 18-89 anni, mediana 53) con carenza di ferro con o senza anemia che hanno partecipato a un singolo elenco di endoscopia di ricerca sulla celiachia presso il centro di riferimento terziario Royal Hallamshire Hospital tra il 2013 e il 2015. Tutti i pazienti reclutati sono stati acconsentiti allo studio prima della gastroscopia. I pazienti sono stati sottoposti contemporaneamente al test point-of-care, Simtomax, sierologia celiaca convenzionale (IgA-TTG, IgA-EMA) e livelli totali di IgA presso l'unità di endoscopia. Tutti i pazienti sono stati quindi sottoposti a gastroscopia con biopsia duodenale quadrangolare della seconda parte del duodeno e almeno una biopsia del bulbo duodenale. I pazienti sono stati esclusi dallo studio se erano noti per avere la malattia celiaca o se seguivano una dieta priva di glutine. Sono stati esclusi anche i pazienti con coagulopatia, sanguinamento gastrointestinale attivo o sospetto carcinoma osservato durante l'esame. Le informazioni cliniche dei pazienti erano a disposizione dell'endoscopista, tuttavia l'endoscopista era all'oscuro dei risultati del test Simtomax.

Il gruppo 3 era un'analisi istologica retrospettiva di pazienti che frequentavano una clinica separata per l'anemia da carenza di ferro specifica non celiaca presso il Northern General Hospital nel 2013-2014. Abbiamo esaminato la loro istologia duodenale e le note del caso ospedaliero per determinare la resa di cause alternative diverse dalla celiachia nel contesto dell'anemia da carenza di ferro.

Test point-of-care, Simtomax:

Simtomax è un test point-of-care per la celiachia prodotto da Augurix Diagnostics, Svizzera. Rileva sia gli anticorpi IgA che IgG contro DGP, nonché il livello totale di IgA. Il test si basa sull'immunocromatografia a flusso laterale utilizzando anticorpi antiumani oro colloidale come rilevatore di segnale. È necessario un campione di 25 μl di sangue venoso capillare che può essere ottenuto attraverso una semplice tecnica di puntura del dito. Il test può anche essere eseguito utilizzando un campione di plasma in acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) o eparina, nonché un campione di siero separato, sebbene sia richiesto un volume di campione inferiore di 20 μl. Il campione di sangue viene quindi applicato al dispositivo di test, seguito dall'applicazione di 5 gocce della soluzione tampone fornita. Il risultato può essere letto dopo 10 minuti. I risultati positivi sono indicati dalla presenza di una linea di test rossa continua per positività IgA e/o IgG-DGP. Una seconda singola linea rossa indica la presenza di IgA. Una linea di controllo rossa incorporata garantisce il corretto funzionamento del test.

sierologia:

Le IgA totali sono state misurate su un nefelometro Behring BN2. Gli anticorpi IgA-TTG sono stati valutati utilizzando kit di analisi dell'immunosorbente legato all'enzima (Aesku Diagnostics, Wendelsheim, Germania). Un titolo IgA-TTG > 15 U/ml prima del 20/5/2014, un nuovo livello di cut-off >9 U/ml dal 20/5 all'11/12/2014, quindi >7 U/ml dal 12/12/2014. 12/2014 in poi, sono stati considerati positivi secondo le indicazioni del produttore. L'IgA-EMA è stata rilevata mediante immunofluorescenza su sezioni di esofago di primati (Binding Site, Birmingham, Regno Unito).

Biopsie e istologia

In totale, sono state prelevate almeno cinque biopsie dal duodeno, di cui almeno una dal bulbo duodenale, con ciascuna biopsia fissata in formalina al momento della gastroscopia. I campioni sono stati quindi elaborati, orientati e incorporati nella cera di paraffina dal dipartimento di patologia. Le sezioni standard di 3 µm di spessore a tre livelli sono state colorate con ematossilina ed eosina e riportate di routine da istopatologi gastrointestinali all'insaputa dei risultati di Simtomax. L'atrofia dei villi è stata classificata secondo i criteri Marsh modificati.

Diagnosi di celiachia:

La presenza di atrofia dei villi (Marsh 3a-3c) all'istologia con positività per IgA-EMA o IgA-TTG era necessaria per la diagnosi di malattia celiaca. Nei casi di atrofia villosa sieronegativa, è stata eseguita la genotipizzazione dell'antigene leucocitario umano (HLA), con un fenotipo HLA DQ2 o DQ8 negativo utilizzato per escludere la celiachia. Sono state prese in considerazione anche informazioni di supporto come la storia familiare e la risposta a una dieta priva di glutine.