Serologische Tests vor der Endoskopie auf Zöliakie; ein neuartiger Ansatz mit schnellen Antikörpertests

Zöliakie ist die häufigste chronisch entzündliche Darmerkrankung, mit der Ärzte konfrontiert werden. International liegt die durch serologisches Screening geschätzte Prävalenz bei gesunden Probanden zwischen 0,5 und 1,0 %. In der Vergangenheit klagten Patienten mit Zöliakie im Erwachsenenalter über Symptome, die auf eine schlechte Resorption, Durchfall, Gewichtsverlust oder Anämie hindeuteten. Diese Art der Darstellung wird heute als klassische (typische) Form bezeichnet. Dass diese Krankheit nicht erkannt wird, kann an der heimtückischen Natur ihres Erscheinungsbildes liegen. Personen mit nicht diagnostizierter Zöliakie müssen vor der Diagnose möglicherweise zahlreiche Krankenhausaufenthalte absolvieren.

Obwohl das Erscheinungsbild von Patienten mit Zöliakie vielfältig sein kann, bieten serologische Marker eine kostengünstige und nicht-invasive Methode, mit der Ärzte sowohl in der Primär- als auch in der Sekundärversorgung zunächst Patienten erkennen können, die möglicherweise an Zöliakie leiden. Ziel dieser Studie ist es, den klinischen Nutzen des Vollblut-Transglutaminase-basierten Schnelltests im Vergleich zu aktuellen serologischen Tests und dem Goldstandard der Zwölffingerdarmbiopsie zu bewerten.

Methoden:

Studiendesign und Teilnehmergruppe 1 war eine multizentrische retrospektive Analyse aller Patienten mit Anämie, die über einen Zeitraum von 12 Monaten von 2012 bis 2014 an einer Gastroskopie mit Zwölffingerdarmbiopsie in vier britischen Krankenhäusern (Addenbrooke's, Bradford, Hull und Whipps Cross) teilnahmen. Die Verfügbarkeit einer Zöliakie-Serologie vor der Magenspiegelung wurde überprüft.

Gruppe 2 war eine prospektive Studie, in der die Empfindlichkeiten von Simtomax mit der konventionellen Serologie in einer Kohorte mit Eisenmangel verglichen wurden. Wir haben prospektiv 133 aufeinanderfolgende Patienten (Altersspanne: 18–89 Jahre, Median 53) mit Eisenmangel mit oder ohne Anämie rekrutiert, die zwischen 2013 und 2015 an einer einzigen Endoskopieliste zur Zöliakie-Forschung im tertiären Überweisungszentrum Royal Hallamshire Hospital teilnahmen. Alle rekrutierten Patienten wurden vor der Magenspiegelung in die Studie eingewilligt. Die Patienten führten gleichzeitig den Point-of-Care-Test, Simtomax, konventionelle Zöliakie-Serologie (IgA-TTG, IgA-EMA) und Gesamt-IgA-Werte in der Endoskopieeinheit durch. Bei allen Patienten wurde dann eine Magenspiegelung mit quadrantischer Zwölffingerdarmbiopsie aus dem zweiten Teil des Zwölffingerdarms und mindestens einer Zwölffingerdarmbiopsie durchgeführt. Patienten wurden von der Studie ausgeschlossen, wenn bei ihnen Zöliakie bekannt war oder sie sich glutenfrei ernährten. Patienten mit einer Koagulopathie, einer aktiven gastrointestinalen Blutung oder einem bei der Untersuchung beobachteten Verdacht auf ein Karzinom wurden ebenfalls ausgeschlossen. Klinische Informationen der Patienten standen dem Endoskopiker zur Verfügung, der Endoskopiker war jedoch blind für die Ergebnisse des Simtomax-Tests.

Gruppe 3 war eine retrospektive histologische Analyse von Patienten, die 2013–2014 eine separate Klinik für nicht-zöliakiespezifische Eisenmangelanämie am Northern General Hospital besuchten. Wir überprüften ihre Zwölffingerdarmhistologie und Krankenhausfallnotizen, um die Häufigkeit anderer alternativer Ursachen als Zöliakie im Zusammenhang mit Eisenmangelanämie zu ermitteln.

Point-of-Care-Test, Simtomax:

Simtomax ist ein Point-of-Care-Test für Zöliakie, der von Augurix Diagnostics, Schweiz, hergestellt wird. Es erkennt sowohl IgA- als auch IgG-Antikörper gegen DGP sowie den Gesamt-IgA-Spiegel. Der Assay basiert auf der Lateral-Flow-Immunchromatographie unter Verwendung kolloidaler Gold-Antihuman-Antikörper als Signaldetektor. Es wird eine Probe von 25 μl kapillarvenösem Blut benötigt, die durch eine einfache Fingerstichtechnik gewonnen werden kann. Der Test kann auch mit einer Plasmaprobe entweder in Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) oder Heparin sowie einer abgetrennten Serumprobe durchgeführt werden, obwohl ein kleineres Probenvolumen von 20 μl erforderlich ist. Anschließend wird die Blutprobe auf das Testgerät aufgetragen und anschließend 5 Tropfen der mitgelieferten Pufferlösung aufgetragen. Das Ergebnis kann nach 10 Minuten abgelesen werden. Positive Ergebnisse werden durch das Vorhandensein einer durchgezogenen roten Testlinie für IgA- und/oder IgG-DGP-Positivität angezeigt. Eine zweite einzelne rote Linie zeigt das Vorhandensein von IgA an. Eine eingebaute rote Kontrollleitung sorgt für einen korrekt funktionierenden Test.

Serologie:

Das Gesamt-IgA wurde mit einem Behring BN2-Nephelometer gemessen. IgA-TTG-Antikörper wurden mithilfe von Enzyme-Linked-Immunosorbent-Assay-Kits (Aesku Diagnostics, Wendelsheim, Deutschland) bewertet. Ein IgA-TTG-Titer von > 15 U/ml vor dem 20.05.2014, ein neuer Grenzwert von >9 U/ml vom 20.05.-11.12.2014 und dann >7 U/ml ab dem 12.12.2014. 12/2014 wurden laut Herstellerangaben als positiv bewertet. IgA-EMA wurde durch Immunfluoreszenz an Primaten-Ösophagusschnitten nachgewiesen (Binding Site, Birmingham, UK).

Biopsien und Histologie

Insgesamt wurden mindestens fünf Biopsien aus dem Zwölffingerdarm entnommen, darunter mindestens eine aus dem Bulbus duodeni, wobei jede Biopsie zum Zeitpunkt der Magenspiegelung in Formalin fixiert wurde. Anschließend wurden die Proben von der Pathologieabteilung bearbeitet, ausgerichtet und in Paraffinwachs eingebettet. Standardschnitte mit einer Dicke von 3 µm auf drei Ebenen wurden mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt und routinemäßig von gastrointestinalen Histopathologen ohne Kenntnis der Simtomax-Ergebnisse berichtet. Die Zottenatrophie wurde nach den modifizierten Marsh-Kriterien bewertet.

Diagnose einer Zöliakie:

Für die Diagnose einer Zöliakie war das Vorhandensein einer Zottenatrophie (Marsh 3a-3c) in der Histologie mit einem positiven IgA-EMA oder IgA-TTG erforderlich. Bei seronegativer Zottenatrophie wurde eine Genotypisierung des humanen Leukozytenantigens (HLA) durchgeführt, wobei ein negativer HLA-DQ2- oder DQ8-Phänotyp zum Ausschluss einer Zöliakie herangezogen wurde. Unterstützende Informationen wie Familienanamnese und Reaktion auf eine glutenfreie Diät wurden ebenfalls berücksichtigt.