Teste Sorológico Pré-endoscopia para Doença Celíaca; uma nova abordagem usando testes rápidos de anticorpos

A doença celíaca é a condição intestinal inflamatória crônica mais comum encontrada pelos médicos. Internacionalmente, a prevalência estimada por triagem sorológica em voluntários saudáveis ​​está entre 0,5-1,0%. Historicamente, pacientes com doença celíaca adulta queixavam-se de sintomas sugestivos de má absorção, diarreia, perda de peso ou anemia. Esta forma de apresentação é agora descrita como a forma clássica (típica). O não reconhecimento dessa doença pode ser devido à natureza insidiosa de sua apresentação. Indivíduos com doença celíaca não diagnosticada podem ter vários atendimentos hospitalares, antes do diagnóstico.

Embora a apresentação de pacientes com doença celíaca possa ser multifacetada, os marcadores sorológicos forneceram um método barato e não invasivo pelo qual os médicos da atenção primária e secundária podem inicialmente reconhecer pacientes que podem ter doença celíaca. O objetivo deste estudo é avaliar a utilidade clínica do teste rápido baseado em transglutaminase de sangue total em relação aos testes sorológicos atuais e ao padrão-ouro da biópsia duodenal.

Métodos:

Desenho do estudo e participantes O Grupo 1 foi uma análise retrospectiva multicêntrica de todos os pacientes com anemia atendidos por gastroscopia com biópsia duodenal em quatro hospitais do Reino Unido (Addenbrooke's, Bradford, Hull e Whipps Cross) durante um período de 12 meses, de 2012 a 2014. A disponibilidade de sorologia celíaca antes da gastroscopia foi revisada.

O Grupo 2 foi um estudo prospectivo comparando as sensibilidades de Simtomax à sorologia convencional em uma coorte com deficiência de ferro. Recrutamos prospectivamente 133 pacientes consecutivos (faixa etária: 18-89 anos, mediana 53) com deficiência de ferro com ou sem anemia que frequentavam uma única lista de endoscopia para pesquisa de doença celíaca no centro de referência terciário Royal Hallamshire Hospital entre 2013 e 2015. Todos os pacientes recrutados foram consentidos para o estudo antes da gastroscopia. Os pacientes realizaram simultaneamente o teste no local de atendimento, Simtomax, sorologia celíaca convencional (IgA-TTG, IgA-EMA) e níveis totais de IgA na unidade de endoscopia. Todos os pacientes tiveram então uma gastroscopia com biópsia duodenal quadrântica da segunda parte do duodeno e pelo menos uma biópsia do bulbo duodenal. Os pacientes foram excluídos do estudo se soubessem que tinham doença celíaca ou estavam em uma dieta sem glúten. Pacientes com coagulopatia, sangramento gastrointestinal ativo ou suspeita de carcinoma observado durante o exame também foram excluídos. As informações clínicas dos pacientes estavam disponíveis para o endoscopista, porém o endoscopista desconhecia os resultados do teste Simtomax.

O Grupo 3 foi uma análise histológica retrospectiva de pacientes atendidos em uma clínica separada de anemia por deficiência de ferro específica não celíaca no Hospital Geral do Norte em 2013-2014. Revisamos sua histologia duodenal e notas de casos hospitalares para determinar o rendimento de causas alternativas além da doença celíaca no contexto da anemia por deficiência de ferro.

Teste no local de atendimento, Simtomax:

Simtomax é um teste de ponto de atendimento para doença celíaca fabricado pela Augurix Diagnostics, Suíça. Ele detecta anticorpos IgA e IgG para DGP, bem como o nível total de IgA. O ensaio é baseado na imunocromatografia de fluxo lateral usando anticorpos anti-humanos de ouro coloidal como um detector de sinal. É necessária uma amostra de 25 μl de sangue venoso capilar que pode ser obtido através de uma técnica simples de picada no dedo. O ensaio também pode ser realizado usando uma amostra de plasma em ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou heparina, bem como uma amostra de soro separada, embora seja necessário um volume de amostra menor de 20 μl. A amostra de sangue é então aplicada ao dispositivo de teste, seguida da aplicação de 5 gotas da solução tampão fornecida. O resultado pode ser lido após 10 minutos. Os resultados positivos são indicados pela presença de uma linha de teste vermelha sólida para positividade de IgA e/ou IgG-DGP. Uma segunda linha vermelha única indica a presença de IgA. Uma linha de controle vermelha embutida garante um teste de funcionamento correto.

Sorologia:

A IgA total foi medida em um nefelômetro Behring BN2. Os anticorpos IgA-TTG foram avaliados usando kits de ensaio imunoenzimático (Aesku Diagnostics, Wendelsheim, Alemanha). Um título de IgA-TTG de > 15 U/ml antes de 20/05/2014, um novo nível de corte de >9 U/ml de 20/5-11/12/2014 e então >7 U/ml de 12/ 12/2014 em diante, foram considerados positivos conforme orientação do fabricante. IgA-EMA foi detectado por imunofluorescência em seções de esôfago de primatas (Binding Site, Birmingham, Reino Unido).

Biópsias e histologia

No total, foram retiradas pelo menos cinco biópsias do duodeno, incluindo pelo menos uma do bulbo duodenal, com cada biópsia fixada em formol no momento da gastroscopia. Os espécimes foram então processados, orientados e incluídos em parafina pelo departamento de patologia. Seções padrão de 3 µm de espessura em três níveis foram coradas com hematoxilina e eosina e relatadas rotineiramente por histopatologistas gastrointestinais sem conhecimento dos resultados do Simtomax. A atrofia vilosa foi graduada de acordo com os critérios modificados de Marsh.

Diagnóstico da doença celíaca:

A presença de atrofia das vilosidades (Marsh 3a-3c) na histologia com IgA-EMA ou IgA-TTG positivo foi necessária para o diagnóstico de doença celíaca. Nos casos de atrofia vilosa soronegativa, foi realizada a genotipagem do antígeno leucocitário humano (HLA), com fenótipo HLA DQ2 ou DQ8 negativo, usado para descartar a doença celíaca. Informações de apoio, como histórico familiar e resposta a uma dieta sem glúten, também foram levadas em consideração.