Pre-endoscopie Serologische tests voor coeliakie; een nieuwe aanpak met behulp van snelle antilichaamtesten

Coeliakie is de meest voorkomende chronische inflammatoire darmaandoening waarmee artsen worden geconfronteerd. Internationaal wordt de prevalentie geschat door serologische screening bij gezonde vrijwilligers tussen de 0,5-1,0%. Historisch gezien klaagden patiënten met volwassen coeliakie over symptomen die wijzen op malabsorptie, diarree, gewichtsverlies of bloedarmoede. Deze manier van presenteren wordt nu omschreven als de klassieke (typische) vorm. Het niet herkennen van deze ziekte kan te wijten zijn aan de verraderlijke aard van de presentatie. Personen met niet-gediagnosticeerde coeliakie kunnen voorafgaand aan de diagnose talloze ziekenhuisbezoeken hebben.

Hoewel de presentatie van patiënten met coeliakie proteïsch kan zijn, hebben serologische markers gezorgd voor een goedkope en niet-invasieve methode waarmee clinici in zowel de eerste als de tweede lijn in eerste instantie patiënten kunnen herkennen die mogelijk coeliakie hebben. Het doel van deze studie is om de klinische bruikbaarheid van de op volbloedtransglutaminase gebaseerde sneltest te beoordelen in vergelijking met de huidige serologische tests en de gouden standaard van duodenale biopsie.

methoden:

Studieopzet en deelnemers Groep 1 was een multicenter retrospectieve analyse van alle patiënten met bloedarmoede die een gastroscopie met duodenale biopsie bijwoonden in vier Britse ziekenhuizen (Addenbrooke's, Bradford, Hull en Whipps Cross) gedurende een periode van 12 maanden variërend van 2012 tot 2014. De beschikbaarheid van coeliakie-serologie voorafgaand aan gastroscopie werd beoordeeld.

Groep 2 was een prospectieve studie waarin de gevoeligheden van Simtomax werden vergeleken met conventionele serologie in een cohort met ijzertekort. We rekruteerden prospectief 133 opeenvolgende patiënten (leeftijdscategorie: 18-89 jaar, mediaan 53) met ijzertekort met of zonder anemie die tussen 2013 en 2015 deelnamen aan een enkele endoscopielijst voor onderzoek naar coeliakie in het tertiaire verwijzingscentrum Royal Hallamshire Hospital. Alle gerekruteerde patiënten kregen voorafgaand aan de gastroscopie toestemming voor het onderzoek. De patiënten ondergingen tegelijkertijd de point-of-care-test, Simtomax, conventionele coeliakie-serologie (IgA-TTG, IgA-EMA) en totale IgA-waarden op de endoscopie-eenheid. Alle patiënten ondergingen toen een gastroscopie met kwadratische duodenumbiopsie van het tweede deel van de twaalfvingerige darm en ten minste één duodenumbolbiopsie. Patiënten werden uitgesloten van het onderzoek als bekend was dat ze coeliakie hadden of een glutenvrij dieet volgden. Patiënten met coagulopathie, actieve gastro-intestinale bloedingen of een vermoedelijk carcinoom dat tijdens het onderzoek werd waargenomen, werden ook uitgesloten. Klinische informatie van de patiënten was beschikbaar voor de endoscopist, maar de endoscopist was niet op de hoogte van de resultaten van de Simtomax-test.

Groep 3 was een retrospectieve histologische analyse van patiënten die in 2013-2014 een afzonderlijke kliniek voor niet-coeliakiespecifieke bloedarmoede door ijzertekort bijwoonden in het Northern General Hospital. We hebben hun histologie van de twaalfvingerige darm en aantekeningen in het ziekenhuis beoordeeld om de opbrengst van andere oorzaken dan coeliakie te bepalen in de context van bloedarmoede door ijzertekort.

Point-of-care-test, Simtomax:

Simtomax is een point-of-care-test voor coeliakie, vervaardigd door Augurix Diagnostics, Zwitserland. Het detecteert zowel IgA- als IgG-antilichamen tegen DGP, evenals het totale IgA-niveau. De assay is gebaseerd op laterale flow-immunochromatografie met behulp van colloïdaal goud antihumane antilichamen als signaaldetector. Er is een monster van 25 μl capillair veneus bloed nodig dat kan worden verkregen door middel van een eenvoudige vingerpriktechniek. De assay kan ook worden uitgevoerd met een plasmamonster in ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) of heparine, evenals een gescheiden serummonster, hoewel een kleiner monstervolume van 20 μl vereist is. Het bloedmonster wordt vervolgens op het testapparaat aangebracht, gevolgd door het aanbrengen van 5 druppels van de meegeleverde bufferoplossing. Het resultaat is na 10 minuten af ​​te lezen. Positieve resultaten worden aangegeven door de aanwezigheid van een ononderbroken rode testlijn voor IgA- en/of IgG-DGP-positiviteit. Een tweede enkele rode lijn geeft de aanwezigheid van IgA aan. Een ingebouwde rode controlelijn zorgt voor een correct functionerende test.

Serologie:

Totaal IgA werd gemeten op een Behring BN2 nefelometer. IgA-TTG-antilichamen werden geëvalueerd met behulp van enzymgekoppelde immunosorbent-assaykits (Aesku Diagnostics, Wendelsheim, Duitsland). Een IgA-TTG-titer van > 15 E/ml vóór 20/5/2014, een nieuwe afkapwaarde van >9 E/ml van 20/5-11/12/2014, en vervolgens >7 E/ml vanaf 12/ Vanaf 12/2014 werden ze als positief beschouwd volgens de richtlijnen van de fabrikant. IgA-EMA werd gedetecteerd door immunofluorescentie op slokdarmsecties van primaten (Binding Site, Birmingham, VK).

Biopsieën en histologie

In totaal werden ten minste vijf biopten uit de twaalfvingerige darm genomen, waaronder ten minste één uit de bulbus duodeni, waarbij elke biopsie tijdens de gastroscopie in formaline werd gefixeerd. Vervolgens werden de preparaten door de afdeling pathologie bewerkt, georiënteerd en ingebed in paraffinewas. Standaardcoupes van 3 µm dik op drie niveaus werden gekleurd met hematoxyline en eosine en routinematig gerapporteerd door gastro-intestinale histopathologen zonder kennis van de Simtomax-resultaten. Villous-atrofie werd beoordeeld volgens de gewijzigde Marsh-criteria.

Diagnose van coeliakie:

De aanwezigheid van villeuze atrofie (Marsh 3a-3c) op histologie met een positieve IgA-EMA of IgA-TTG was vereist voor de diagnose van coeliakie. In gevallen van seronegatieve villeuze atrofie werd genotypering van humaan leukocytenantigeen (HLA) uitgevoerd, waarbij een negatief HLA DQ2- of DQ8-fenotype werd gebruikt om coeliakie uit te sluiten. Ondersteunende informatie zoals familiegeschiedenis en reactie op een glutenvrij dieet werden ook in aanmerking genomen.