Olfaktiv diskriminerende evne hos hunde, når de konfronteres med anfald og prøver uden anfald // Identifikation af potentielle biomarkører for epilepsi i sved hos mennesker.

Til denne forskning vil der blive indsamlet tre forskellige typer prøver

1. anfaldsprøver fra patienter: (S+)
2. ikke-anfaldsprøver fra patienter: (S-)
3. prøver fra raske mennesker (H)
4. positive kontrolprøver bestående af en standard kemisk blanding (C+) (Kun for del IV)
5. negative kontrolprøver med gaze udsat for det miljø, hvor prøverne fra patienter og raske mennesker er taget). (C-) (Kun for del IV)

2.1 Indsamling af type a og b prøver (fra patienter)

Svedprøver vil blive indsamlet fra epilepsipatienter indlagt til kliniske formål i de 4 EEG-enheder på UZ. På optagelsestidspunktet vil de blive spurgt, om de accepterer at samarbejde med undersøgelsen og med at deres prøver tages. Patienternes pleje er ansvaret for personalet på Gent Universitetshospital. Forskeren fra denne undersøgelse vil være til stede for at indsamle prøver i samråd med plejepersonalet.

Samling af prøver

Alt opsamlingsmateriale vil blive behandlet med HPLC-grade methanol og derefter opvarmet til 110 grader i en ovn. Det behandlede materiale opbevares i 40 ml hætteglas indtil opsamlingstidspunktet.

A. Planlagte prøver:

Fire gange om dagen på faste tidspunkter (9:30, 11:30, 13:30, 15:30) vil en forsker bede de frivillige om at vaske deres hænder med ikke-duftende sæbe og derefter placere en steril bomuldsgaze i deres ikke-dominerende håndflade. De vil blive bedt om at lukke næven og beholde gazen i 10 minutter. Efter 10 minutter vil gazen blive hentet af forskeren. Efter senere analyse af EEG-aflæsningerne vil prøverne blive markeret som S+, hvis et anfald skete i løbet af disse 10 minutter, eller S-, hvis der ikke opstod et anfald. Prøver indsamlet 24 timer før og efter et anfald vil ikke blive brugt til yderligere analyse.

B. Spontane prøver

Da patienten vil være under kontinuerlig overvågning, vil svedprøver også blive indsamlet under og/eller lige efter et anfald, hvis den frivillige ikke holder en gaze på det tidspunkt. Svedprøverne vil blive indsamlet af forskeren ved at påføre en steril gaze på patientens hænder, enten under eller umiddelbart efter et anfald i 10 minutter. Prøverne vil blive markeret som S+ efter bekræftelse med EEG-aflæsningen.

2.2 Indsamling af type c prøver (fra raske mennesker)

For at sikre, at miljølugt ikke er en forstyrrelse, vil der også blive indsamlet prøver fra raske frivillige på samme sted, som hvor prøver fra patienter indsamles. Kun svedprøver vil blive indsamlet fra raske frivillige. Disse prøver identificeres som sunde prøver (H). Prøverne fra raske mennesker vil blive forsøgt matchet med prøverne fra patienter baseret på alder, køn og etnicitet. De raske frivillige vil blive rekrutteret blandt kolleger fra afdelingen og UZ-personale.

De raske prøver vil blive indsamlet på samme etage på Gent Universitetshospital og så tæt som muligt på hvor patienterne bor.

2.3 Prøvebehandling.

Gaze, der indeholder svedprøverne, skæres i 4 stykker. To stykker vil blive opbevaret i hætteglas, det ene frosset til -20 °C og det andet opbevaret ved stuetemperatur, disse prøver vil blive sendt til Florida International University. De resterende to stykker, vil blive sendt til Medical Detection Dogs, vil blive opbevaret i sterile Falcon-rør og frosset ved -20 °C.

2.4 Medicinsk påvisning Hunde prøveanalyse

To hunde, der tilhører MDD, vil blive bedt om at skelne mellem anfaldsprøver og ikke-anfaldsprøver fra patienter. De vil også blive bedt om at skelne mellem anfaldsprøver, prøver uden anfald og raske prøver. Hundene vil bruge en 8-arms karrusel. Syv prøver vil blive placeret i en arm hver, og en arm forbliver tom.

For det første skal hunde trænes til at genkende den hypotetiske lugt, der er forbundet med epilepsi. Før forsøget er der derfor behov for 30 anfaldsprøver fra forskellige patienter og 120 ikke-anfaldsprøver og raske prøver til træning af hundene

Dernæst vil 24 anfaldsprøver fra forskellige patienter og 144 ikke-anfaldsprøver og raske prøver blive brugt i et dobbeltblindet forsøg (24 paneler med 1 anfaldsprøve og 6 ikke-anfaldsprøver eller raske prøver). Prøvestørrelsesberegningen er baseret på antagelsen om en succesrate på 40 % sammenlignet med et teoretisk forhold på 14,3 %. En effektanalyse indikerer, at en prøvestørrelse på 24 testpaneler er stor nok til at nå en effekt på 80 % med et alfa-niveau på 0,05 (tosidet).

2.5. Kemisk analyse

Anfaldsprøver, prøver uden anfald, raske prøver og de positive og negative kontroller vil blive sendt til Florida International University til SPME GC-MS-analyse.

Hver måned, så længe undersøgelsen varer, vil der blive afsendt 3 S+, 15 S-, 5 H, 1 C+ og 1 C-prøve. Analyse af VOC-profilen vil gøre det muligt at identificere potentielle molekyler, der er specifikke for prøverne forbundet med anfald.