Capacidade discriminativa olfativa de cães quando confrontados com amostras convulsivas e não convulsivas // Identificação de potenciais biomarcadores para epilepsia no suor humano.

Para esta pesquisa, três tipos diferentes de amostras serão coletadas

1. amostras de convulsões de pacientes: (S+)
2. amostras sem convulsões de pacientes: (S-)
3. amostras de pessoas saudáveis ​​(H)
4. amostras de controle positivo consistindo de uma mistura química padrão (C+) (somente para a parte IV)
5. amostras de controle negativo com gaze expostas ao ambiente em que são coletadas as amostras de pacientes e pessoas saudáveis). (C-) (Apenas para a parte IV)

2.1 Coleta de amostras do tipo aeb (de pacientes)

Serão recolhidas amostras de suor de doentes com epilepsia internados para fins clínicos nas 4 unidades de EEG da UZ. No momento da admissão, será questionado se concorda em colaborar com o estudo e com a coleta de suas amostras. O cuidado dos pacientes é de responsabilidade da equipe do Hospital Universitário de Ghent. A pesquisadora deste estudo estará presente para coleta de amostras em consulta com a equipe de enfermagem.

Coleta de amostras

Todo o material de coleta será tratado com metanol grau HPLC e, em seguida, aquecido a 110 graus em um forno. O material tratado será mantido em frascos de vidro de 40 ml até o momento da coleta.

A. Amostras planejadas:

Quatro vezes ao dia em horários fixos (9:30, 11:30, 13:30, 15:30), um pesquisador solicitará aos voluntários que lavem as mãos com sabonete sem perfume e, em seguida, coloque uma gaze de algodão estéril no palma da mão não dominante. Eles serão solicitados a fechar o punho e manter a gaze por 10 minutos. Após 10 minutos, a gaze será retirada pelo pesquisador. Depois de analisar posteriormente as leituras do EEG, as amostras serão marcadas como S+ se ocorreu uma convulsão durante esses 10 minutos, ou S- se não ocorreu nenhuma convulsão. As amostras coletadas 24 horas antes e depois de uma convulsão não serão usadas para análise posterior.

B. Amostras espontâneas

Como o paciente estará sob monitoramento contínuo, também serão coletadas amostras de suor durante e/ou logo após a ocorrência de uma convulsão, caso o voluntário não esteja segurando uma gaze naquele momento. As amostras de suor serão coletadas pelo pesquisador através da aplicação de gaze estéril nas mãos do paciente, durante ou imediatamente após uma convulsão durante 10 minutos. As amostras serão marcadas como S+ após a confirmação com a leitura do EEG.

2.2 Coleta de amostras do tipo c (de pessoas saudáveis)

A fim de garantir que o odor ambiental não seja um fator de confusão, também serão coletadas amostras de voluntários saudáveis ​​no mesmo local onde as amostras de pacientes são coletadas. Apenas amostras de suor serão coletadas de voluntários saudáveis. Essas amostras são identificadas como amostras saudáveis ​​(H). Serão feitas tentativas de combinar as amostras de pessoas saudáveis ​​com as de pacientes com base na idade, sexo e etnia. Os voluntários saudáveis ​​serão recrutados entre colegas do departamento e funcionários da UZ.

As amostras saudáveis ​​serão coletadas no mesmo andar do Hospital Universitário de Ghent e o mais próximo possível de onde os pacientes residem.

2.3 Processamento de amostras.

As gazes contendo as amostras de suor serão cortadas em 4 pedaços. Duas peças serão armazenadas em frascos de vidro, uma congelada a -20 °C e a outra armazenada em temperatura ambiente, essas amostras serão enviadas para a Florida International University. As duas peças restantes serão enviadas para a Medical Detection Dogs, armazenadas em tubos Falcon estéreis e congeladas a -20 °C.

2.4 Análise de amostras de cães de detecção médica

Dois cães pertencentes ao MDD serão solicitados a discriminar entre amostras de pacientes com convulsões e sem convulsões. Eles também serão solicitados a discriminar entre amostras de convulsões, amostras sem convulsões e amostras saudáveis. Os cães usarão um carrossel de 8 braços. Sete amostras serão colocadas em um braço cada e um braço permanecerá vazio.

Primeiro, os cães devem ser treinados para reconhecer o odor hipotético associado à epilepsia. Consequentemente, antes do julgamento, são necessárias 30 amostras de convulsões de diferentes pacientes e 120 amostras saudáveis ​​e sem convulsões para o treinamento dos cães

Em seguida, 24 amostras de convulsões de diferentes pacientes e 144 amostras não convulsivas e saudáveis ​​serão usadas em um estudo duplo-cego (24 painéis com 1 amostra de convulsão e 6 amostras não convulsivas ou saudáveis). O cálculo do tamanho da amostra é baseado na suposição de uma taxa de sucesso de 40% a ser comparada com uma proporção teórica de 14,3%. Uma análise de poder indica que um tamanho de amostra de 24 painéis de teste é grande o suficiente para atingir um poder de 80% com um nível alfa de 0,05 (bilateral).

2.5. Análises químicas

Amostras de convulsão, amostras sem convulsão, amostras saudáveis ​​e os controles positivo e negativo serão enviados para a Florida International University para análise SPME GC-MS.

Todos os meses, enquanto durar o estudo, serão enviadas amostras de 3 S+, 15 S-, 5 H, 1 C+ e 1 C-. A análise do perfil de VOC permitirá identificar potenciais moléculas específicas para as amostras associadas a convulsões.