Geruchsunterscheidungsfähigkeit von Hunden bei Anfalls- und Nicht-Anfallsproben // Identifizierung potenzieller Biomarker für Epilepsie im menschlichen Schweiß.

Für diese Forschung werden drei verschiedene Arten von Proben gesammelt

1. Anfallsproben von Patienten: (S+)
2. Nicht-Anfallsproben von Patienten: (S-)
3. Proben von Gesunden (H)
4. positive Kontrollproben bestehend aus einem Standardchemikalienmix (C+) (nur für Teil IV)
5. negative Kontrollproben mit Gaze, die der Umgebung ausgesetzt sind, in der die Proben von Patienten und gesunden Menschen entnommen werden). (C-) (Nur für Teil IV)

2.1 Probenentnahme Typ a und b (von Patienten)

An den 4 EEG-Stationen des UZ werden Schweißproben von klinisch aufgenommenen Epilepsiepatienten entnommen. Bei der Aufnahme werden sie gefragt, ob sie einer Mitarbeit an der Studie und der Entnahme ihrer Proben zustimmen. Die Patientenversorgung liegt in der Verantwortung des Personals des Universitätskrankenhauses Gent. Der Forscher dieser Studie wird anwesend sein, um in Absprache mit dem Pflegepersonal Proben zu entnehmen.

Beispielsammlung

Das gesamte Sammelmaterial wird mit Methanol in HPLC-Qualität behandelt und dann in einem Ofen auf 110 Grad erhitzt. Das behandelte Material wird bis zur Entnahmezeit in 40-ml-Glasfläschchen aufbewahrt.

A. Geplante Proben:

Viermal täglich zu festgelegten Zeitpunkten (9:30, 11:30, 13:30, 15:30) bittet ein Forscher die Freiwilligen, ihre Hände mit nicht parfümierter Seife zu waschen und dann einen sterilen Baumwollgaze in die Haut zu legen Handfläche ihrer nicht dominanten Hand. Sie werden gebeten, die Faust zu schließen und die Gaze 10 Minuten lang zu halten. Nach 10 Minuten wird die Gaze vom Forscher zurückgeholt. Nach einer späteren Analyse der EEG-Messwerte werden die Proben mit S+ markiert, wenn während dieser 10 Minuten ein Anfall aufgetreten ist, oder mit S-, wenn kein Anfall aufgetreten ist. Proben, die 24 Stunden vor und nach einem Anfall entnommen wurden, werden nicht für weitere Analysen verwendet.

B. spontane Proben

Da der Patient unter kontinuierlicher Überwachung steht, werden Schweißproben auch während und/oder direkt nach einem Anfall entnommen, wenn der Freiwillige zu diesem Zeitpunkt keinen Verbandmull hält. Die Schweißproben werden vom Forscher gesammelt, indem er eine sterile Gaze auf die Hände des Patienten aufträgt, entweder während oder unmittelbar nach einem Anfall für 10 Minuten. Die Proben werden nach Bestätigung mit dem EEG-Messwert als S+ markiert.

2.2 Gewinnung von Typ-C-Proben (von Gesunden)

Um sicherzustellen, dass der Umgebungsgeruch kein Störfaktor ist, werden auch Proben von gesunden Freiwilligen am selben Ort gesammelt, an dem Proben von Patienten gesammelt werden. Es werden nur Schweißproben von gesunden Freiwilligen gesammelt. Diese Proben werden als gesunde Proben (H) gekennzeichnet. Es wird versucht, die Proben von gesunden Menschen mit denen von Patienten nach Alter, Geschlecht und ethnischer Zugehörigkeit abzugleichen. Die gesunden Probanden werden aus Kollegen der Abteilung und UZ-Mitarbeitern rekrutiert.

Die gesunden Proben werden auf derselben Etage des Universitätskrankenhauses Gent und so nah wie möglich am Wohnort der Patienten entnommen.

2.3 Probenverarbeitung.

Die Gaze mit den Schweißproben wird in 4 Teile geschnitten. Zwei Stücke werden in Glasfläschchen gelagert, eines auf -20 °C eingefroren und das andere bei Raumtemperatur gelagert. Diese Proben werden an die Florida International University geschickt. Die verbleibenden zwei Teile werden an Medical Detection Dogs verschickt, in sterilen Falcon-Röhrchen gelagert und bei -20 °C eingefroren.

2.4 Probenanalyse von medizinischen Spürhunden

Zwei Hunde, die zu MDD gehören, werden gebeten, zwischen Proben von Patienten mit Anfällen und Nicht-Anfällen zu unterscheiden. Sie werden auch gebeten, zwischen Anfallsproben, Nicht-Anfallsproben und gesunden Proben zu unterscheiden. Die Hunde werden ein Karussell mit 8 Armen benutzen. Sieben Proben werden jeweils in einen Arm gegeben und ein Arm bleibt leer.

Erstens müssen Hunde darauf trainiert werden, den hypothetischen Geruch zu erkennen, der mit Epilepsie verbunden ist. Folglich werden vor dem Versuch 30 Anfallsproben von verschiedenen Patienten und 120 Nicht-Anfallsproben und gesunde Proben für das Training der Hunde benötigt

Als nächstes werden 24 Anfallsproben von verschiedenen Patienten und 144 Proben ohne Anfälle und gesunde Proben in einer doppelblinden Studie verwendet (24 Panels mit 1 Probe mit Anfall und 6 Proben ohne Anfälle oder gesunde Proben). Die Berechnung des Stichprobenumfangs basiert auf der Annahme einer Erfolgsquote von 40 % im Vergleich zu einer theoretischen Quote von 14,3 %. Eine Power-Analyse zeigt, dass eine Stichprobengröße von 24 Testpanels groß genug ist, um eine Power von 80 % mit einem Alpha-Level von 0,05 (zweiseitig) zu erreichen.

2.5. Chemische Analyse

Anfallsproben, Nicht-Anfallsproben, gesunde Proben und die Positiv- und Negativkontrollen werden zur SPME GC-MS-Analyse an die Florida International University geschickt.

Während der Dauer der Studie werden jeden Monat 3 S+, 15 S-, 5 H, 1 C+ und 1 C- Muster versandt. Die Analyse des VOC-Profils ermöglicht die Identifizierung potenzieller Moleküle, die für die mit Anfällen verbundenen Proben spezifisch sind.