Węchowa zdolność dyskryminacyjna psów w konfrontacji z próbkami napadowymi i nienapadowymi // Identyfikacja potencjalnych biomarkerów padaczki w ludzkim pocie.

Do tego badania zostaną pobrane trzy różne rodzaje próbek

1. próbki napadów od pacjentów: (S+)
2. próbki bez napadów padaczkowych od pacjentów: (S-)
3. próbki od osób zdrowych (H)
4. próbki kontroli pozytywnej składające się ze standardowej mieszanki chemicznej (C+) (tylko dla części IV)
5. próbki kontroli ujemnej z gazą eksponowaną na środowisko, w którym pobierane są próbki od pacjentów i osób zdrowych). (C-) (tylko dla części IV)

2.1 Pobieranie próbek typu aib (od pacjentów)

Próbki potu będą pobierane od pacjentów z padaczką przyjmowanych w celach klinicznych w 4 pracowniach EEG UZ. W momencie przyjęcia zostaną zapytani, czy zgadzają się na współpracę przy badaniu i pobraniu próbek. Za opiekę nad pacjentami odpowiada personel Szpitala Uniwersyteckiego w Gandawie. Badacz biorący udział w tym badaniu będzie obecny w celu pobrania próbek w porozumieniu z personelem pielęgniarskim.

Kolekcja próbek

Cały zebrany materiał zostanie potraktowany metanolem do HPLC, a następnie podgrzany do 110 stopni w piecu. Traktowany materiał będzie przechowywany w szklanych fiolkach o pojemności 40 ml do czasu pobrania.

A. Planowane próbki:

Cztery razy dziennie o ustalonych porach (9:30, 11:30, 13:30, 15:30) badacz prosi ochotników o umycie rąk bezzapachowym mydłem, a następnie umieszcza sterylną bawełnianą gazę w dłoni swojej niedominującej dłoni. Zostaną poproszeni o zaciśnięcie pięści i trzymanie gazy przez 10 minut. Po 10 minutach badacz zabiera gazę. Po późniejszej analizie odczytów EEG próbki zostaną oznaczone jako S+, jeśli napad wystąpił w ciągu tych 10 minut, lub S-, jeśli nie wystąpił napad. Próbki pobrane 24 godziny przed i po napadzie nie będą wykorzystywane do dalszych analiz.

B. Próbki spontaniczne

Ponieważ pacjent będzie pod stałą obserwacją, próbki potu będą również pobierane w trakcie i/lub zaraz po wystąpieniu napadu, jeśli ochotnik nie będzie trzymał w tym czasie gazy. Próbki potu zostaną pobrane przez badacza poprzez nałożenie sterylnej gazy na ręce pacjenta, w trakcie lub bezpośrednio po napadzie przez 10 minut. Próbki zostaną oznaczone jako S+ po potwierdzeniu odczytem EEG.

2.2 Pobieranie próbek typu c (od osób zdrowych)

Aby upewnić się, że zapach otoczenia nie będzie przeszkadzał, próbki będą pobierane również od zdrowych ochotników w tym samym miejscu, w którym pobierane są próbki od pacjentów. Tylko próbki potu zostaną pobrane od zdrowych ochotników. Te próbki są identyfikowane jako próbki zdrowe (H). Podejmowane będą próby kojarzenia próbek od osób zdrowych z próbkami od pacjentów pod względem wieku, płci i pochodzenia etnicznego. Zdrowi ochotnicy będą rekrutowani spośród kolegów z oddziału i pracowników UZ.

Zdrowe próbki zostaną pobrane na tym samym piętrze Szpitala Uniwersyteckiego w Gandawie i jak najbliżej miejsca zamieszkania pacjentów.

2.3 Przetwarzanie próbek.

Gazy zawierające próbki potu zostaną pocięte na 4 części. Dwie próbki będą przechowywane w szklanych fiolkach, jedna zamrożona do -20°C, a druga w temperaturze pokojowej. Próbki te zostaną wysłane do Florida International University. Pozostałe dwie części zostaną wysłane do Medical Detection Dogs, będą przechowywane w sterylnych probówkach Falcon i zamrożone w temperaturze -20°C.

2.4 Analiza próbek psów do wykrywania medycznego

Dwa psy należące do MDD zostaną poproszone o rozróżnienie próbek pochodzących od pacjentów z napadami padaczkowymi i bez napadów padaczkowych. Zostaną również poproszeni o rozróżnienie między próbkami z napadami, próbkami bez napadów i próbkami zdrowymi. Psy będą korzystać z 8-ramiennej karuzeli. W każdym ramieniu zostanie umieszczonych siedem próbek, a jedno ramię pozostanie puste.

Po pierwsze, psy muszą być szkolone w rozpoznawaniu hipotetycznego zapachu, który jest związany z padaczką. W związku z tym przed badaniem do szkolenia psów potrzebnych jest 30 próbek napadów padaczkowych od różnych pacjentów oraz 120 próbek zdrowych i zdrowych.

Następnie 24 próbki napadowe od różnych pacjentów i 144 próbki nienapadowe i zdrowe zostaną użyte w podwójnie ślepej próbie (24 panele z 1 próbką napadową i 6 próbkami nienapadowymi lub zdrowymi). Obliczenia wielkości próby opierają się na założeniu, że wskaźnik sukcesu wynosi 40%, który należy porównać z teoretycznym współczynnikiem wynoszącym 14,3%. Analiza mocy wskazuje, że wielkość próby 24 paneli testowych jest wystarczająco duża, aby osiągnąć moc 80% przy poziomie alfa 0,05 (dwustronny).

2.5. Analiza chemiczna

Próbki z napadem, próbki bez napadu, próbki zdrowe oraz kontrole dodatnie i ujemne zostaną przesłane do Florida International University w celu analizy SPME GC-MS.

Co miesiąc, tak długo jak trwa badanie, wysyłane będą 3 próbki S+, 15 S-, 5 H, 1 C+ i 1 C-. Analiza profilu LZO pozwoli zidentyfikować potencjalne cząsteczki specyficzne dla próbek związanych z napadami.