Habilidad discriminatoria olfativa de los perros cuando se enfrentan a muestras convulsivas y no convulsivas // Identificación de biomarcadores potenciales para la epilepsia en el sudor humano.

Para esta investigación se recogerán tres tipos diferentes de muestras

1. muestras de convulsiones de pacientes: (S+)
2. muestras no convulsivas de pacientes: (S-)
3. muestras de personas sanas (H)
4. muestras de control positivo que consisten en una mezcla química estándar (C+) (solo para la parte IV)
5. muestras de control negativo con gasas expuestas al ambiente en el que se toman las muestras de pacientes y personas sanas). (C-) (Solo para la parte IV)

2.1 Recolección de muestras tipo a y b (de pacientes)

Se recogerán muestras de sudor de pacientes con epilepsia ingresados ​​con fines clínicos en las 4 unidades de EEG de la UZ. En el momento del ingreso se les preguntará si aceptan colaborar con el estudio y con la toma de muestras. El cuidado de los pacientes es responsabilidad del personal del Hospital Universitario de Gante. El investigador de este estudio estará presente para recolectar muestras en consulta con el personal de enfermería.

Coleccion de muestra

Todo el material de recolección se tratará con metanol de grado HPLC y luego se calentará a 110 grados en un horno. El material tratado se mantendrá en viales de vidrio de 40 ml hasta el momento de la recogida.

A. Muestras planificadas:

Cuatro veces al día en puntos de tiempo fijos (9:30, 11:30, 13:30, 15:30), un investigador pedirá a los voluntarios que se laven las manos con jabón sin perfume y luego coloque una gasa de algodón estéril en el palma de su mano no dominante. Se les pedirá que cierren el puño y mantengan la gasa durante 10 minutos. Después de 10 minutos, el investigador recuperará la gasa. Después de analizar posteriormente las lecturas del EEG, las muestras se marcarán como S+ si ocurrió una convulsión durante esos 10 minutos, o S- si no ocurrió ninguna convulsión. Las muestras recolectadas 24 horas antes y después de una incautación no se utilizarán para análisis posteriores.

B. Muestras espontáneas

Como el paciente estará bajo control continuo, también se recolectarán muestras de sudor durante y/o justo después de que ocurra una convulsión si el voluntario no está sosteniendo una gasa en ese momento. Las muestras de sudor serán recolectadas por el investigador aplicando una gasa estéril en las manos del paciente, ya sea durante o inmediatamente después de una convulsión durante 10 minutos. Las muestras se marcarán como S+ después de confirmar con la lectura de EEG.

2.2 Recogida de muestras tipo c (de personas sanas)

Para garantizar que el olor ambiental no sea un factor de confusión, también se recolectarán muestras de voluntarios sanos en el mismo lugar donde se recolectan las muestras de los pacientes. Solo se recolectarán muestras de sudor de voluntarios sanos. Estas muestras se identifican como muestras sanas (H). Se intentará hacer coincidir las muestras de personas sanas con las de los pacientes en función de la edad, el género y el origen étnico. Los voluntarios sanos se reclutarán entre colegas del departamento y el personal de UZ.

Las muestras sanas se recogerán en el mismo piso del Hospital Universitario de Gante y lo más cerca posible de donde residen los pacientes.

2.3 Procesamiento de muestras.

Las gasas que contienen las muestras de sudor se cortarán en 4 piezas. Se almacenarán dos piezas en viales de vidrio, una congelada a -20 °C y la otra almacenada a temperatura ambiente, estas muestras se enviarán a la Universidad Internacional de Florida. Las dos piezas restantes se enviarán a perros de detección médica, se almacenarán en tubos Falcon estériles y se congelarán a -20 °C.

2.4 Análisis de muestras de perros de detección médica

Se pedirá a dos perros pertenecientes a MDD que discriminen entre muestras convulsivas y no convulsivas de pacientes. También se les pedirá que discriminen entre muestras convulsivas, muestras sin convulsiones y muestras sanas. Los perros utilizarán un carrusel de 8 brazos. Se colocarán siete muestras en un brazo cada una y un brazo permanecerá vacío.

Primero, los perros deben estar entrenados para reconocer el olor hipotético asociado con la epilepsia. En consecuencia, antes del ensayo, se necesitan 30 muestras convulsivas de diferentes pacientes y 120 muestras sanas y sin convulsiones para el entrenamiento de los perros.

A continuación, se utilizarán 24 muestras convulsivas de diferentes pacientes y 144 muestras sanas y sin convulsiones en un ensayo doble ciego (24 paneles con 1 muestra convulsiva y 6 muestras sanas o sin convulsiones). El cálculo del tamaño de la muestra se basa en la suposición de una tasa de éxito del 40 % que se compara con una tasa teórica del 14,3 %. Un análisis de potencia indica que un tamaño de muestra de 24 paneles de prueba es lo suficientemente grande como para alcanzar una potencia del 80 % con un nivel alfa de 0,05 (bilateral).

2.5. Análisis químico

Las muestras convulsivas, las muestras sin convulsiones, las muestras sanas y los controles positivo y negativo se enviarán a la Universidad Internacional de Florida para su análisis GC-MS SPME.

Cada mes, mientras dure el estudio, se enviarán 3 muestras S+, 15 S-, 5 H, 1 C+ y 1 C-. El análisis del perfil de COV permitirá identificar moléculas potenciales específicas de las muestras asociadas con las incautaciones.