Capacità discriminativa olfattiva dei cani quando confrontati con campioni di convulsioni e non convulsioni // Identificazione di potenziali biomarcatori per l'epilessia nel sudore umano.

Per questa ricerca verranno raccolti tre diversi tipi di campioni

1. campioni di crisi da pazienti: (S+)
2. campioni non epilettici da pazienti: (S-)
3. campioni da persone sane (H)
4. campioni di controllo positivi costituiti da una miscela chimica standard (C+) (solo per la parte IV)
5. campioni di controllo negativi con garza esposti all'ambiente in cui vengono prelevati i campioni da pazienti e persone sane). (C-) (Solo per la parte IV)

2.1 Raccolta di campioni di tipo a e b (da pazienti)

Campioni di sudore saranno raccolti da pazienti con epilessia ricoverati per scopi clinici nelle 4 unità EEG dell'UZ. Al momento del ricovero, verrà chiesto loro se acconsentono a collaborare allo studio e al prelievo dei loro campioni. La cura dei pazienti è responsabilità del personale dell'ospedale universitario di Ghent. Il ricercatore di questo studio sarà presente per raccogliere campioni in consultazione con il personale infermieristico.

Raccolta campioni

Tutto il materiale di raccolta sarà trattato con metanolo di grado HPLC e quindi riscaldato a 110 gradi in un forno. Il materiale trattato verrà conservato in flaconi di vetro da 40 ml fino al momento del prelievo.

A. Campioni pianificati:

Quattro volte al giorno a orari prestabiliti (9:30, 11:30, 13:30, 15:30), un ricercatore chiederà ai volontari di lavarsi le mani con sapone non profumato e quindi inserire una garza di cotone sterile nel palmo della loro mano non dominante. Verrà chiesto loro di chiudere il pugno e tenere la garza per 10 minuti. Dopo 10 minuti, la garza verrà recuperata dal ricercatore. Dopo aver successivamente analizzato le letture EEG, i campioni saranno contrassegnati come S+ se si è verificato un attacco durante quei 10 minuti, o S- se non si è verificato alcun attacco. I campioni raccolti 24 ore prima e dopo un sequestro non verranno utilizzati per ulteriori analisi.

B. Campioni spontanei

Poiché il paziente sarà sotto monitoraggio continuo, i campioni di sudore verranno raccolti anche durante e/o subito dopo che si verifica un attacco se il volontario non tiene in mano una garza in quel momento. I campioni di sudore saranno raccolti dal ricercatore applicando una garza sterile alle mani del paziente, durante o immediatamente dopo un attacco per 10 minuti. I campioni saranno contrassegnati come S+ dopo la conferma con la lettura EEG.

2.2 Raccolta di campioni di tipo c (da persone sane)

Al fine di garantire che l'odore ambientale non sia un fattore di confusione, i campioni saranno raccolti anche da volontari sani nello stesso luogo in cui vengono raccolti i campioni dai pazienti. Verranno raccolti solo campioni di sudore da volontari sani. Questi campioni sono identificati come campioni sani (H). Verranno effettuati tentativi di abbinare i campioni di persone sane con quelli di pazienti in base all'età, al sesso e all'etnia. I volontari sani saranno reclutati tra i colleghi del dipartimento e il personale dell'UZ.

I campioni sani saranno raccolti sullo stesso piano dell'ospedale universitario di Ghent e il più vicino possibile a dove risiedono i pazienti.

2.3 Elaborazione del campione.

Le garze contenenti i campioni di sudore verranno tagliate in 4 pezzi. Due pezzi saranno conservati in fiale di vetro, una congelata a -20 °C e l'altra conservata a temperatura ambiente, questi campioni saranno inviati alla Florida International University. I restanti due pezzi, saranno spediti a Medical Detection Dogs, saranno conservati in tubi Falcon sterili e congelati a -20 °C.

2.4 Analisi del campione di cani da rilevamento medico

Verrà chiesto a due cani appartenenti a MDD di discriminare tra campioni convulsivi e non convulsivi dei pazienti. Verrà inoltre chiesto loro di discriminare tra campioni di sequestro, campioni non sequestrati e campioni sani. I cani useranno una giostra a 8 braccia. Sette campioni verranno posizionati in un braccio ciascuno e un braccio rimarrà vuoto.

Innanzitutto, i cani devono essere addestrati a riconoscere l'ipotetico odore associato all'epilessia. Di conseguenza, prima della sperimentazione, sono necessari 30 campioni di crisi di diversi pazienti e 120 campioni non convulsivi e sani per l'addestramento dei cani

Successivamente, 24 campioni di convulsioni di diversi pazienti e 144 campioni non convulsivi e sani verranno utilizzati in uno studio in doppio cieco (24 pannelli con 1 campione di convulsioni e 6 campioni non convulsivi o sani). Il calcolo della dimensione del campione si basa sull'ipotesi di un tasso di successo del 40% da confrontare con un rapporto teorico del 14,3%. Un'analisi della potenza indica che una dimensione del campione di 24 pannelli di test è abbastanza grande da raggiungere una potenza dell'80% con un livello alfa di 0,05 (a due lati).

2.5. Analisi chimica

I campioni convulsivi, i campioni non convulsivi, i campioni sani e i controlli positivi e negativi verranno inviati alla Florida International University per l'analisi GC-MS SPME.

Ogni mese per tutta la durata dello studio, verranno spediti 3 campioni S+, 15 S-, 5 H, 1 C+ e 1 C-. L'analisi del profilo VOC consentirà di identificare potenziali molecole specifiche dei campioni associate ai sequestri.