Čichová diskriminační schopnost psů při konfrontaci se záchvatovými a nezáchvatovými vzorky // Identifikace potenciálních biomarkerů epilepsie v lidském potu.

Pro tento výzkum budou odebrány tři různé typy vzorků

1. vzorky záchvatů od pacientů: (S+)
2. nezáchytové vzorky od pacientů: (S-)
3. vzorky od zdravých lidí (H)
4. pozitivní kontrolní vzorky sestávající ze standardní chemické směsi (C+) (pouze pro část IV)
5. negativní kontrolní vzorky s gázou vystavené prostředí, ve kterém se odebírají vzorky od pacientů a zdravých osob). (C-) (Pouze pro část IV)

2.1 Odběr vzorků typu a a b (od pacientů)

Vzorky potu budou odebírány pacientům s epilepsií přijatým pro klinické účely na 4 EEG jednotkách na UZ. Při přijetí budou dotázáni, zda souhlasí se spoluprací na studii a s odběrem jejich vzorků. Péče o pacienty je v kompetenci personálu Fakultní nemocnice v Gentu. Výzkumník z této studie bude přítomen k odběru vzorků po konzultaci s ošetřujícím personálem.

Kolekce vzorků

Veškerý shromážděný materiál bude ošetřen methanolem HPLC a poté zahřát na 110 stupňů v peci. Ošetřený materiál bude uchováván ve 40 ml skleněných lahvičkách až do doby odběru.

A. Plánované vzorky:

Čtyřikrát denně v pevně stanovených časových bodech (9:30, 11:30, 13:30, 15:30) požádá výzkumník dobrovolníky, aby si umyli ruce neparfémovaným mýdlem a poté do ní vložili sterilní bavlněnou gázu. dlaně jejich nedominantní ruky. Budou požádáni, aby zavřeli pěst a ponechali gázu po dobu 10 minut. Po 10 minutách výzkumník získá gázu. Po pozdější analýze naměřených hodnot EEG budou vzorky označeny jako S+, pokud během těchto 10 minut došlo k záchvatu, nebo S-, pokud k žádnému záchvatu nedošlo. Vzorky odebrané 24 hodin před a po záchvatu nebudou použity pro další analýzu.

B. Spontánní vzorky

Vzhledem k tomu, že pacient bude pod neustálým sledováním, vzorky potu budou odebírány také během záchvatu a/nebo bezprostředně po něm, pokud dobrovolník v tu dobu nedrží gázu. Vzorky potu budou odebírány výzkumným pracovníkem přiložením sterilní gázy na ruce pacienta, buď během záchvatu nebo bezprostředně po něm po dobu 10 minut. Vzorky budou po potvrzení měřením EEG označeny jako S+.

2.2 Odběr vzorků typu c (od zdravých lidí)

Aby se zajistilo, že zápach z okolního prostředí nebude matoucí, budou vzorky odebírány také od zdravých dobrovolníků na stejném místě, kde se odebírají vzorky od pacientů. Od zdravých dobrovolníků budou odebrány pouze vzorky potu. Tyto vzorky jsou identifikovány jako zdravé vzorky (H). Budou provedeny pokusy o spárování vzorků od zdravých lidí s těmi od pacientů na základě věku, pohlaví a etnického původu. Zdraví dobrovolníci se budou rekrutovat z řad kolegů z oddělení a pracovníků UZ.

Zdravé vzorky budou odebírány na stejném patře Fakultní nemocnice v Gentu a co nejblíže místu, kde mají pacienti bydliště.

2.3 Zpracování vzorků.

Gázy obsahující vzorky potu budou rozřezány na 4 kusy. Dva kusy budou uloženy ve skleněných lahvičkách, jedna zmražená na -20 °C a druhá při pokojové teplotě, tyto vzorky budou odeslány na Florida International University. Zbývající dva kusy budou odeslány Medical Detection Dogs, budou uloženy ve sterilních Falconových zkumavkách a zmrazeny na -20 °C.

2.4 Analýza vzorků lékařských detekčních psů

Dva psi, kteří patří k MDD, budou požádáni, aby rozlišovali mezi vzorky od pacientů se záchvaty a bez nich. Budou také požádáni, aby rozlišovali mezi vzorky ze záchvatu, vzorky bez záchvatu a vzorky zdravé. Psi budou využívat 8ramenný kolotoč. Do každého ramene bude umístěno sedm vzorků a jedno rameno zůstane prázdné.

Za prvé, psi musí být vycvičeni, aby rozpoznali hypotetický zápach, který je spojen s epilepsií. V důsledku toho je před zkouškou zapotřebí 30 vzorků ze záchvatů od různých pacientů a 120 vzorků bez záchvatů a zdravých vzorků pro výcvik psů.

Dále bude ve dvojitě zaslepené studii použito 24 vzorků ze záchvatů od různých pacientů a 144 vzorků bez záchvatů a zdravých vzorků (24 panelů s 1 vzorky ze záchvatů a 6 vzorky bez záchvatů nebo zdravých vzorků). Výpočet velikosti vzorku je založen na předpokladu úspěšnosti 40 % ve srovnání s teoretickým poměrem 14,3 %. Analýza výkonu ukazuje, že vzorek o velikosti 24 testovacích panelů je dostatečně velký, aby dosáhl výkonu 80 % s hladinou alfa 0,05 (oboustranný).

2.5. Chemický rozbor

Vzorky ze záchytů, vzorky bez záchytů, zdravé vzorky a pozitivní a negativní kontroly budou zaslány na Florida International University pro analýzu SPME GC-MS.

Každý měsíc po dobu trvání studie budou odeslány 3 vzorky S+, 15 S-, 5 H, 1 C+ a 1 C-. Analýza profilu VOC umožní identifikovat potenciální molekuly specifické pro vzorky spojené se záchvaty.