Trasplante de microbiota fecal y ACHIM para manipular la microbiota intestinal en pacientes con SII

El trasplante fecal (FMT), la infusión de una preparación fecal de un donante sano en el tracto gastrointestinal de otro ser humano, es capaz de alterar el microbioma intestinal del nuevo huésped. Se especula que las heces humanas de un donante sano pueden constituir el "probiótico" ideal, lo que sugiere que el FMT es una opción de tratamiento para afecciones en las que se ha detectado una microbiota alterada, incluido el síndrome del intestino irritable (SII). La microbiota intestinal humana cultivada anaeróbicamente (ACHIM) es una forma alternativa de manipular la microbiota intestinal en lugar de FMT. La suspensión ACHIM es un ecosistema natural de bacterias intestinales normales cultivadas y propagadas regularmente en el laboratorio (in vitro). Después de 20 años de cultivo, ACHIM ha conservado la misma rica biodiversidad que la muestra de heces original, procedente de un donante sano en 1995. ACHIM puede restablecer el equilibrio ecológico del intestino cuando se ha alterado (disbiosis), p. después del tratamiento con antibióticos. ACHIM se ha administrado hasta ahora a más de 400 pacientes (la mayoría de ellos con infección recurrente por Clostridium difficile) sin que se hayan observado efectos secundarios graves. Las pruebas microbiológicas han demostrado que ACHIM es una microbiota funcional bien equilibrada y contiene los principales filos bacterianos Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria y Actinobacteria.

Así, en el presente estudio se pretende comparar la seguridad y eficacia de estos métodos en el alivio de los síntomas en pacientes con SII. Dadas las preocupaciones éticas de los efectos adversos desconocidos y a largo plazo de la terapia FMT, solo se incluirán pacientes con síntomas moderados a graves.

Apuntar:

El objetivo principal de este estudio piloto abierto fue comparar estos dos métodos de manipulación intestinal (FMT y ACHIM) en pacientes con SII.

Los objetivos secundarios fueron los siguientes;

1. Evaluar y comparar la seguridad y eficacia de la suspensión FMT y ACHIM en el alivio de los síntomas en pacientes con SII.
2. Evaluar y comparar el FMT y ACHIM sobre calidad de vida.
3. Comparar la caracterización detallada de la composición de la comunidad microbiana (mediante el perfilado de ARNr 16S) y la determinación de la cinética de los cambios después de FMT y ACHIM frente a placebo.

Diseño del estudio Participantes y tamaño de la muestra En un estudio ciego, se incluirán pacientes que cumplan los criterios de Roma III para SII con síntomas abdominales de moderados a graves. Los pacientes serán aleatorizados en tres grupos para recibir FMT, suspensión ACHIM o placebo (heces propias), y serán seguidos durante 12 semanas con respecto a los parámetros de eficacia y seguridad, así como el análisis de muestras fecales.

Cribado de donantes:

Los donantes de flora fecal son personas sanas que viven en el mismo hogar que los pacientes. Todos los donantes son evaluados antes de la donación por exposición previa a agentes infecciosos contagiosos. El análisis de sangre incluyó pruebas serológicas para hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, VIH, virus de Epstein-Barr y citomegalovirus. Todas las muestras de heces de donantes se cultivan en busca de patógenos bacterianos entéricos y se analizan en busca de virus y parásitos.

Procedimientos del estudio La suspensión de heces frescas de un familiar cercano para FMT o ACHIM se instilará en el duodeno a través de un endoscopio. Esta vía de administración ha sido segura en todos los estudios.

• Protocolo de trasplante de heces: las muestras de heces frescas se obtienen inmediatamente antes del FMT. Se añaden 60 ml de solución salina N al 0,9% estéril a una muestra de heces con un peso de ~30 gy se homogeneiza manualmente. Protegidos de la vista de los pacientes, se instilan 40 ml de suspensión de heces a través del canal de trabajo de un gastroscopio en la parte inferior del duodeno y luego se enjuagan con 60 ml de solución salina N al 0,9% estéril.
• Protocolo de trasplante de ACHIM: La suspensión de ACHIM (ACHIM Biotherapeutics, Suecia) se administra a través del canal de trabajo de un gastroscopio en la parte inferior del duodeno y luego se enjuaga con 60 ml de solución salina N al 0,9% estéril.
• Las muestras de heces se recolectarán dos veces antes del estudio (semana - 4 y -0-1), luego después de la semana 1, 4 y 12 y después de 6 meses. También se recolectarán heces de donantes para FMT. Se toman muestras de heces secas congeladas frescas en todos los puntos de tiempo, se dividen en alícuotas y se almacenan a -80 grados (<24 horas desde la producción hasta la entrega).
• Análisis de ADN microbiano: el análisis de la microbiota se realizó mediante el análisis genético (GA) map™ DysbiosisTest (Genetic Analysis AS, Oslo, Noruega). La prueba GA se basa en técnicas regulares de biología molecular, que comprenden la homogeneización de muestras fecales y la disrupción mecánica de células bacterianas; combinado con lisis celular química; extracción automatizada de ADN genómico bacteriano total utilizando perlas magnéticas; Amplificación del ADN de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del ácido ribonucleico ribosómico (ARNr) 16S que cubre las regiones variables V3-V9; marcaje de sonda por extensión de un solo nucleótido; hibridación con sondas complementarias acopladas a perlas magnéticas; y detección de señales usando el analizador BioCode 1000A 128-Plex (Applied BioCode, Santa Fe Springs, California, EE. UU.). Un índice de disbiosis (DI) superior a 2 (máximo 5) indica una microbiota que difiere del grupo de referencia (DI 1-2: sin disbiosis, DI 3: moderada, DI 4-5: disbiosis grave).
• Muestras de sangre (Hemograma completo, pruebas de función renal y hepática) y análisis de orina.
• Evaluación de síntomas y calidad de vida: los síntomas gastrointestinales, los hábitos intestinales y la calidad de vida se registrarán durante un período de seguimiento de 12 semanas, en el día 0, las semanas 1, 4, 12 y 28 para evaluar los síntomas y la calidad de vida. Se pide a los pacientes que informen de la gravedad de los síntomas del SII global y de cada uno de los síntomas (diarrea, distensión abdominal, flatulencia y dolor) durante la semana anterior, utilizando una escala de cuatro puntos (0 = ninguno, 1 = leve, 2 = moderado, 3 = grave). La Escala de gravedad de los síntomas del SII (IBS-SSS) contiene 5 preguntas que se califican en una escala analógica visual (VAS) de 100 puntos (la gravedad del dolor abdominal, la frecuencia del dolor abdominal, la gravedad de la distensión abdominal, la insatisfacción con los hábitos intestinales, e interferencia con la calidad de vida). El rango de puntaje es de 0 a 500, donde un puntaje más alto indica la peor condición (los puntajes < 175 representan síntomas leves del SII, 175 - 300 representan severidad moderada, > 300 representan SII severo). Se ha demostrado que una disminución de 50 puntos en el IBS-SSS se correlaciona con una mejoría en los síntomas clínicos.

Se utilizará la forma abreviada del índice de dispepsia de Nepean (SF-NDI) para evaluar la calidad de vida.

Análisis estadístico:

El análisis longitudinal de la composición de la microbiota se realizará con ANOVA de medidas repetidas (para diversidad alfa y abundancia bacteriana). Si los datos no son normales, se utilizará la transformación de raíz cuadrada arcoseno o una prueba no paramétrica. Se comparará la microbiota original de heces del donante y del receptor (medidas de diversidad alfa y abundancia de taxones) al inicio y en cada punto temporal de muestreo de heces del receptor mediante métodos no paramétricos o paramétricos.

Consideraciones de seguridad:

Se ha adquirido una larga experiencia durante los últimos años en el Hospital Universitario de Haukeland en la realización de FMT para Cl resistente al tratamiento. enterocolitis difficile y han desarrollado un extenso programa para identificar donantes seguros de heces para FMT. A lo largo de los años, no se han producido efectos secundarios graves. El subconjunto de pacientes con SII que son elegibles para el estudio son típicamente pacientes con una gran carga de síntomas, con pocas alternativas de tratamiento. Por lo tanto, el equilibrio entre las preocupaciones de seguridad y la posibilidad de mejoría de los síntomas se considera positivo y enfatizará la importancia de recopilar datos de seguridad sobre FMT y ACHIM antes de que este tratamiento se use más ampliamente.