Transplante de Microbiota Fecal e ACHIM para Manipulação da Microbiota Intestinal em Pacientes com SII

O transplante fecal (FMT), a infusão de uma preparação fecal de um doador saudável no trato gastrointestinal de outro ser humano, é capaz de alterar o microbioma intestinal do novo hospedeiro. Há especulações de que as fezes humanas de um doador saudável podem constituir o "probiótico" ideal, sugerindo assim o FMT como uma opção de tratamento para condições em que uma microbiota alterada foi detectada, incluindo a síndrome do intestino irritável (SII). A Microbiota Intestinal Humana Cultivada Anaerobicamente (ACHIM) é uma forma alternativa de manipular a microbiota intestinal em vez do FMT. A suspensão ACHIM é um ecossistema natural de bactérias intestinais normais cultivadas e propagadas regularmente em laboratório (in vitro). Após 20 anos de cultivo, o ACHIM manteve a mesma rica biodiversidade da amostra de fezes original, proveniente de um doador saudável em 1995. ACHIM pode restaurar o equilíbrio ecológico do intestino quando ele foi perturbado (disbiose), por ex. após o tratamento antibiótico. Até agora, o ACHIM foi administrado a mais de 400 pacientes (a maioria deles sofrendo de infecção recorrente por Clostridium difficile) sem a observação de efeitos colaterais graves. Testes microbiológicos mostraram que ACHIM é uma microbiota funcional bem equilibrada e contém os principais filos bacterianos Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria e Actinobacteria.

Assim, o presente estudo visa comparar a segurança e a eficácia desses métodos no alívio dos sintomas em pacientes com SII. Dadas as preocupações éticas de efeitos adversos desconhecidos e de longo prazo da terapia com FMT, apenas pacientes com sintomas moderados a graves serão incluídos.

Mirar:

O objetivo principal deste estudo piloto aberto foi comparar esses dois métodos de manipulação intestinal (FMT e ACHIM) em pacientes com SII.

Os objetivos secundários eram os seguintes;

1. Avaliar e comparar a segurança e eficácia da suspensão de FMT e ACHIM no alívio dos sintomas em pacientes com SII.
2. Avaliar e comparar o FMT e o ACHIM na qualidade de vida.
3. Comparar a caracterização detalhada da composição da comunidade microbiana (por meio do perfil de 16S rRNA) e a determinação da cinética das mudanças após FMT e ACHIM vs. placebo.

Desenho do estudo Participantes e tamanho da amostra Em um estudo cego, serão incluídos pacientes que atendem aos critérios de Roma III para SII com sintomas abdominais moderados a graves. Os pacientes serão randomizados em três grupos para receber FMT, suspensão ACHIM ou placebo (próprias fezes) e serão acompanhados por 12 semanas quanto aos parâmetros de eficácia e segurança, bem como análise de amostras fecais.

Triagem de doadores:

Os doadores de flora fecal são indivíduos saudáveis ​​que vivem na mesma casa que os pacientes. Todos os doadores são triados antes da doação para exposição prévia a agentes infecciosos contagiosos. A triagem de sangue incluiu testes sorológicos para hepatite A, hepatite B, hepatite C, HIV, vírus Epstein-Barr e citomegalovírus. Todas as amostras de fezes de doadores são cultivadas para patógenos bacterianos entéricos e triadas para vírus e parasitas.

Procedimentos do estudo A suspensão de fezes frescas de um familiar próximo para FMT ou ACHIM será instilada no duodeno por meio de um endoscópio. Esta via de administração foi segura em todos os estudos.

• Protocolo de transplante de fezes: Amostras de fezes frescas são obtidas imediatamente antes do FMT. 60 ml de N-salina 0,9% estéril são adicionados a uma amostra de fezes com um peso de ~30 g e homogeneizados manualmente. Examinados do ponto de vista dos pacientes, 40 ml de suspensão de fezes são instilados através do canal de trabalho de um gastroscópio na parte inferior do duodeno e, posteriormente, lavados com 60 ml de solução salina N-salina 0,9% estéril.
• Protocolo de transplante ACHIM: A suspensão ACHIM (ACHIM Biotherapeutics, Suécia) é administrada através do canal de trabalho de um gastroscópio na parte inferior do duodeno e, posteriormente, lavada com 60 ml de N-salina 0,9% estéril.
• Amostras de fezes serão coletadas duas vezes antes do estudo (semana - 4 e -0-1), depois das semanas 1, 4 e 12 e após 6 meses. As fezes dos doadores para FMT também serão coletadas. Fezes secas congeladas frescas são amostradas em todos os pontos de tempo, divididas em alíquotas e armazenadas a -80 graus (<24 horas desde a produção até a entrega).
• Análises de DNA microbiano: A análise da microbiota foi realizada usando o Genetic Analysis (GA) map™ DysbiosisTest (Genetic Analysis AS, Oslo, Noruega). O GA-teste é baseado em técnicas regulares de biologia molecular, compreendendo a homogeneização da amostra fecal e a ruptura mecânica das células bacterianas; combinado com lise celular química; extração automatizada total de DNA genômico bacteriano usando esferas magnéticas; 16S ácido ribonucléico ribossômico (rRNA) reação em cadeia da polimerase (PCR) Amplificação do DNA abrangendo as regiões variáveis ​​V3-V9; marcação de sonda por extensão de nucleotídeo único; hibridação com sondas complementares acopladas a esferas magnéticas; e detecção de sinal usando BioCode 1000A 128-Plex Analyzer (Applied BioCode, Santa Fe Springs, Califórnia, EUA). Um Índice de Disbiose (DI) acima de 2 (máximo 5) indica uma microbiota diferente do grupo de referência (DI 1-2: não disbiose, DI 3: moderado, DI 4-5: disbiose grave).
• Amostras de sangue (hemograma completo, testes de função renal e hepática) e análise de urina.
• Avaliação de sintomas e qualidade de vida: Sintomas gastrointestinais, hábitos intestinais e qualidade de vida serão registrados durante um período de acompanhamento de 12 semanas, no dia 0, semanas 1, 4, 12 e 28 para avaliação de sintomas e qualidade de vida. Os pacientes são solicitados a relatar a gravidade dos sintomas globais da SII e cada um dos sintomas (diarréia, inchaço, flatulência e dor) durante a semana anterior, usando uma escala de quatro pontos (0 = nenhum, 1 = leve, 2 = moderado, 3 = grave). A Escala de Gravidade dos Sintomas da SII (IBS-SSS) contém 5 perguntas que são classificadas em uma escala visual analógica (VAS) de 100 pontos (a gravidade da dor abdominal, a frequência da dor abdominal, a gravidade da distensão abdominal, a insatisfação com os hábitos intestinais, e interferência na qualidade de vida). A pontuação varia de 0 a 500, com uma pontuação mais alta indicando a pior condição (pontuações < 175 representam sintomas leves de SII, 175 - 300 representam gravidade moderada, > 300 representam SII grave). Foi demonstrado que uma diminuição de 50 pontos no IBS-SSS se correlaciona com a melhora dos sintomas clínicos.

A forma abreviada do Índice de Dispepsia de Nepean (SF-NDI) será usada para avaliar a qualidade de vida.

Análise estatística:

A análise longitudinal da composição da microbiota será realizada com medidas repetidas ANOVA (para diversidade alfa e abundâncias bacterianas). Se dados não normais, será usada a transformação de raiz quadrada de arco seno ou um teste não paramétrico. A microbiota original das fezes do doador e do receptor será comparada (medidas de diversidade alfa e abundância de táxons) na linha de base e em cada ponto de tempo de amostragem de fezes do receptor usando métodos não paramétricos ou paramétricos.

Considerações de segurança:

Longa experiência foi adquirida durante os últimos anos no Haukeland University Hospital na realização de FMT para Cl resistente ao tratamento. difficile enterocolite e desenvolveram um extenso programa para identificar doadores seguros de fezes para FMT. Ao longo dos anos, nenhum efeito colateral grave ocorreu. O subconjunto de pacientes com SII que são elegíveis para o estudo são tipicamente pacientes com uma forte carga de sintomas, com poucas alternativas de tratamento. Portanto, o equilíbrio entre as preocupações de segurança versus a possibilidade de melhora dos sintomas é considerado positivo e enfatiza a importância de coletar dados de segurança sobre FMT e ACHIM antes que esse tratamento se torne mais amplamente utilizado.