Trapianto di microbiota fecale e ACHIM per la manipolazione del microbiota intestinale nei pazienti con IBS

Il trapianto fecale (FMT), l'infusione di un preparato fecale da un donatore sano nel tratto gastrointestinale di un altro essere umano è in grado di alterare il microbioma intestinale del nuovo ospite. Si ipotizza che le feci umane di un donatore sano possano costituire il "probiotico" ideale, suggerendo così l'FMT come opzione terapeutica per le condizioni in cui è stato rilevato un microbiota alterato, inclusa la sindrome dell'intestino irritabile (IBS). Il microbiota intestinale umano coltivato anaerobicamente (ACHIM) è un modo alternativo per manipolare il microbiota intestinale invece dell'FMT. La sospensione ACHIM è un ecosistema naturale di normali batteri intestinali coltivati ​​e propagati regolarmente in laboratorio (in vitro). Dopo 20 anni di coltivazione, ACHIM ha conservato la stessa ricca biodiversità del campione di feci originale, proveniente da un donatore sano nel 1995. ACHIM può ripristinare l'equilibrio ecologico dell'intestino quando è stato disturbato (disbiosi) ad es. dopo il trattamento antibiotico. ACHIM è stato finora somministrato a oltre 400 pazienti (la maggior parte dei quali affetti da infezioni ricorrenti da Clostridium difficile) senza che si siano osservati effetti collaterali gravi. I test microbiologici hanno dimostrato che ACHIM è un microbiota funzionale ben bilanciato e contiene i principali phyla batterici Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria e Actinobacteria.

Pertanto, nel presente studio si propone di confrontare la sicurezza e l'efficacia di questi metodi nell'alleviare i sintomi nei pazienti con IBS. Date le preoccupazioni etiche degli effetti avversi sconosciuti ea lungo termine della terapia FMT, saranno inclusi solo i pazienti con sintomi da moderati a gravi.

Scopo:

Lo scopo principale di questo studio pilota aperto era confrontare questi due metodi di manipolazione intestinale (FMT e ACHIM) nei pazienti con IBS.

Gli obiettivi secondari erano i seguenti;

1. Valutare e confrontare la sicurezza e l'efficacia della sospensione FMT e ACHIM nell'alleviare i sintomi nei pazienti con IBS.
2. Valutare e confrontare FMT e ACHIM sulla qualità della vita.
3. Confrontare la caratterizzazione dettagliata della composizione della comunità microbica (mediante il profilo dell'rRNA 16S) e la determinazione della cinetica dei cambiamenti in seguito a FMT e ACHIM rispetto al placebo.

Disegno dello studio Partecipanti e dimensione del campione In uno studio in cieco, saranno inclusi i pazienti che soddisfano i criteri di Roma III per IBS con sintomi addominali da moderati a gravi. I pazienti saranno randomizzati in tre gruppi per ricevere FMT, sospensione ACHIM o placebo (feci proprie) e saranno seguiti per 12 settimane per quanto riguarda i parametri di efficacia e sicurezza, nonché l'analisi dei campioni fecali.

Screening dei donatori:

I donatori di flora fecale sono individui sani che vivono nella stessa famiglia dei pazienti. Tutti i donatori vengono sottoposti a screening prima della donazione per la precedente esposizione ad agenti infettivi contagiosi. Lo screening del sangue includeva test sierologici per l'epatite A, l'epatite B, l'epatite C, l'HIV, il virus di Epstein-Barr e il citomegalovirus. Tutti i campioni di feci dei donatori vengono coltivati ​​per patogeni batterici enterici e sottoposti a screening per virus e parassiti.

Procedure dello studio La sospensione di feci fresche da un parente stretto per FMT o ACHIM sarà instillata nel duodeno tramite un endoscopio. Questa via di somministrazione è risultata sicura in tutti gli studi.

• Protocollo di trapianto di feci: i campioni di feci fresche vengono prelevati immediatamente prima dell'FMT. 60 ml di N-salina sterile allo 0,9% vengono aggiunti a un campione di feci con un peso di ~ 30 g e omogeneizzati manualmente. Al riparo dal punto di vista dei pazienti, 40 ml di sospensione fecale vengono instillati attraverso il canale di lavoro di un gastroscopio nella parte inferiore del duodeno e successivamente lavati con 60 ml di N-salina sterile allo 0,9%.
• Protocollo di trapianto ACHIM: la sospensione ACHIM (ACHIM Biotherapeutics, Svezia) viene somministrata attraverso il canale di lavoro di un gastroscopio nella parte inferiore del duodeno e successivamente lavata con 60 ml di N-salina sterile allo 0,9%.
• I campioni di feci verranno raccolti due volte prima dello studio (settimana - 4 e -0-1), quindi dopo la settimana 1, 4 e 12 e dopo 6 mesi. Saranno raccolte anche le feci dei donatori per FMT. Le feci secche fresche congelate vengono campionate in ogni momento, aliquotate e conservate a -80 gradi (<24 ore dalla produzione alla consegna).
• Analisi del DNA microbico: l'analisi del microbiota è stata eseguita utilizzando l'analisi genetica (GA) map™ DysbiosisTest (Analisi genetica AS, Oslo, Norvegia). Il test GA si basa su normali tecniche di biologia molecolare, comprendenti l'omogeneizzazione del campione fecale e la distruzione meccanica delle cellule batteriche; combinato con la lisi cellulare chimica; estrazione automatizzata del DNA genomico batterico totale mediante biglie magnetiche; 16S acido ribonucleico ribosomiale (rRNA) reazione a catena della polimerasi (PCR) amplificazione del DNA che copre le regioni variabili V3-V9; etichettatura della sonda mediante estensione a singolo nucleotide; ibridazione a sonde complementari accoppiate a biglie magnetiche; e rilevamento del segnale utilizzando BioCode 1000A 128-Plex Analyzer (Applied BioCode, Santa Fe Springs, California, USA). Un indice di disbiosi (DI) superiore a 2 (massimo 5) indica un microbiota diverso dal gruppo di riferimento (DI 1-2: non disbiosi, DI 3: moderato, DI 4-5: disbiosi grave).
• Prelievi di sangue (emocromo completo, test di funzionalità renale ed epatica) e analisi delle urine.
• Valutazione dei sintomi e della qualità della vita: i sintomi gastrointestinali, le abitudini intestinali e la qualità della vita saranno registrati durante un periodo di follow-up di 12 settimane, al giorno 0, settimane 1, 4, 12 e 28 per la valutazione dei sintomi e della qualità della vita. Ai pazienti viene chiesto di riportare la gravità dei sintomi globali di IBS e di ciascuno dei sintomi (diarrea, gonfiore, flatulenza e dolore) durante la settimana precedente, utilizzando una scala a quattro punti (0 = nessuno, 1 = lieve, 2 = moderato, 3 = grave). IBS Symptom Severity Scale (IBS-SSS) contiene 5 domande che sono valutate su una scala analogica visiva (VAS) a 100 punti (la gravità del dolore addominale, la frequenza del dolore addominale, la gravità della distensione addominale, l'insoddisfazione per le abitudini intestinali, e interferenza con la qualità della vita). Il punteggio va da 0 a 500, con un punteggio più alto che indica la condizione peggiore (punteggi < 175 rappresentano sintomi IBS lievi, 175 - 300 rappresentano gravità moderata, > 300 rappresentano IBS grave). È stato dimostrato che una diminuzione di 50 punti sull'IBS-SSS è correlata al miglioramento dei sintomi clinici.

Verrà utilizzata una forma abbreviata di Nepean Dispepsia Index (SF-NDI) per valutare la qualità della vita.

Analisi statistiche:

L'analisi longitudinale della composizione del microbiota sarà eseguita con misure ripetute ANOVA (per diversità alfa e abbondanze batteriche). Se i dati non sono normali, verrà utilizzata la trasformazione della radice quadrata dell'arcoseno o un test non parametrico. Verrà confrontato il microbiota delle feci del donatore originale e del ricevente (misure della diversità alfa e dell'abbondanza di taxa) al basale e in ogni momento del campionamento delle feci del ricevente utilizzando metodi non parametrici o parametrici.

Considerazioni sulla sicurezza:

Negli ultimi anni è stata acquisita una lunga esperienza presso l'Haukeland University Hospital nell'esecuzione di FMT per Cl resistente al trattamento. difficile e hanno sviluppato un ampio programma per l'identificazione di donatori sicuri di feci per FMT. Nel corso degli anni non si sono verificati effetti collaterali gravi. Il sottogruppo di pazienti con IBS eleggibili per lo studio sono in genere pazienti con un pesante carico di sintomi, con poche alternative terapeutiche. Pertanto, l'equilibrio tra preoccupazioni per la sicurezza e possibilità di miglioramento dei sintomi è considerato positivo e sottolineerà l'importanza di raccogliere dati sulla sicurezza su FMT e ACHIM prima che questo trattamento diventi più ampiamente utilizzato.