IBS患者の腸内微生物叢を操作するための糞便微生物叢移植とACHIM

糞便移植 (FMT) は、健康なドナーから別の人間の消化管に糞便製剤を注入することで、新しい宿主の腸内微生物叢を変化させることができます。 健康なドナーからの人間の糞便が理想的な「プロバイオティクス」を構成する可能性があるという憶測があり、過敏性腸症候群 (IBS) など、変化した微生物叢が検出された状態の治療オプションとして FMT が示唆されています。 嫌気的に培養されたヒト腸内細菌叢 (ACHIM) は、FMT の代わりに腸内細菌叢を操作する代替方法です。 ACHIM 懸濁液は、実験室 (in vitro) で定期的に培養および増殖された正常な腸内細菌の自然な生態系です。 20 年間の培養後、ACHIM は 1995 年に健康なドナーから採取された元の糞便サンプルと同じ豊かな生物多様性を保持しています。 ACHIM は、腸が乱された場合 (dysbiosis)、腸の生態学的バランスを回復することができます。抗生物質治療後。 ACHIM はこれまで 400 人以上の患者 (そのほとんどはクロストリジウム ディフィシル感染症の再発に苦しんでいます) に投与されており、重大な副作用は観察されていません。 微生物学的検査により、ACHIM はバランスのとれた機能的な微生物叢であり、主要な細菌門 Firmicutes、Bacteroidetes、Proteobacteria、および Actinobacteria が含まれていることが示されています。

したがって、本研究では、IBS 患者の症状緩和におけるこれらの方法の安全性と有効性を比較することを目的としています。 FMT療法の未知の長期的な副作用の倫理的懸念を考慮して、中等度から重度の症状を持つ患者のみが含まれます.

標的：

このオープン パイロット研究の主な目的は、IBS 患者におけるこれら 2 つの腸操作法 (FMT と ACHIM) を比較することでした。

二次的な目的は次のとおりです。

1. IBS 患者の症状緩和における FMT および ACHIM 懸濁液の安全性と有効性を評価および比較すること。
2. 生活の質に関する FMT と ACHIM を評価し、比較すること。
3. 微生物群集組成の詳細な特徴付け (16S rRNA プロファイリングによる) と、FMT および ACHIM 対プラセボ後の変化の動態の決定を比較する。

試験デザイン 参加者およびサンプルサイズ 盲検試験では、中等度から重度の腹部症状を有する IBS の Rome III 基準を満たす患者が含まれます。 患者は、FMT、ACHIM懸濁液、またはプラセボ（自分の糞）のいずれかを投与される3つのグループに無作為に割り付けられ、有効性と安全性のパラメーター、および糞便サンプルの分析に関して12週間追跡されます。

ドナーのスクリーニング:

糞便フローラの提供者は、患者と同じ世帯に住む健康な個人です。 すべてのドナーは、伝染性の感染性病原体への以前の曝露について、寄付の前にスクリーニングされます。 血液のスクリーニングには、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、HIV、エプスタイン-バーウイルス、およびサイトメガロウイルスの血清学的検査が含まれていました。 すべてのドナー糞便サンプルは、腸内細菌病原体について培養され、ウイルスと寄生虫についてスクリーニングされます。

研究手順 FMTまたはACHIMの近親者からの新鮮な糞便の懸濁液は、内視鏡を介して十二指腸に点滴されます。 この投与経路は、すべての研究で安全です。

• 糞便移植プロトコル: FMT の直前に新鮮な便サンプルを採取します。 無菌の 0.9% N-生理食塩水 60 ml を重量約 30 g の便検体に加え、手動でホモジナイズします。 患者の視点からスクリーニングして、40mlの糞便懸濁液を胃カメラの作業チャネルを通して十二指腸の下部に点滴し、その後60mlの滅菌0.9% N-生理食塩水で洗い流す。
• ＡＣＨＩＭ移植プロトコル：ＡＣＨＩＭ懸濁液（ＡＣＨＩＭ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｓｗｅｄｅｎ）を、胃カメラの作業チャネルを通して十二指腸の下部に投与し、その後６０ｍｌの滅菌０．９％Ｎ－生理食塩水で洗い流す。
• 糞便サンプルは、研究前に 2 回 (-4 および -0-1 週)、次に 1、4、および 12 週後、および 6 か月後に収集されます。 FMTのドナー糞も収集されます。 新鮮な凍結乾燥便をすべての時点でサンプリングし、アリコートにして、-80 度で保存します (製造から配送まで 24 時間未満)。
• 微生物ＤＮＡ分析：Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＧＡ）ｍａｐ（商標）ＤｙｓｂｉｏｓｉｓＴｅｓｔ（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＡＳ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）を用いて微生物叢分析を実施した。 GA テストは、通常の分子生物学的手法に基づいており、糞便サンプルの均質化と機械的な細菌細胞の破壊が含まれます。化学細胞溶解と組み合わせる。磁気ビーズを使用した全細菌ゲノム DNA 抽出の自動化。可変領域 V3 ～ V9 をカバーする 16S リボソーム リボ核酸 (rRNA) ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) DNA 増幅。一塩基伸長によるプローブ標識。磁気ビーズに結合した相補的プローブへのハイブリダイゼーション。 BioCode 1000A 128-Plex Analyzer (Applied BioCode、米国カリフォルニア州サンタフェスプリングス) を使用したシグナル検出。 2 (最大 5) を超えるディスバイオシス インデックス (DI) は、参照グループとは異なる微生物叢を示します (DI 1-2: 非ディスバイオシス、DI 3: 中等度、DI 4-5: 重度のディスバイオシス)。
• 血液サンプル（全血球計算、腎臓および肝機能検査）および尿分析。
• 症状および生活の質の評価：症状および生活の質の評価のために、0日目、1週目、4週目、12週目および28週目に、12週間のフォローアップ期間中、胃腸症状、排便習慣および生活の質を記録する。 患者は、4 段階評価 (0 = なし、1 = 軽度、2 = 中等度、 3 = 重度）。 IBS 症状重症度スケール (IBS-SSS) には、100 点のビジュアル アナログ スケール (VAS) (腹痛の重症度、腹痛の頻度、腹部膨満の重症度、排便習慣に対する不満、および生活の質への干渉）。 スコアの範囲は 0 ～ 500 で、スコアが高いほど状態が悪いことを示します (スコア < 175 は軽度の IBS 症状を表し、175 ～ 300 は中程度の重症度を表し、> 300 は重度の IBS を表します)。 IBS-SSS の 50 ポイントの減少は、臨床症状の改善と相関することが示されています。

省略形のネピアン消化不良指数 (SF-NDI) を使用して、生活の質を評価します。

統計分析：

微生物叢組成の縦断的分析は、反復測定ANOVAで実行されます（アルファ多様性と細菌存在量について）。 非正規データの場合、逆正弦平方根変換またはノンパラメトリック検定が使用されます。 元のドナーとレシピエントの糞便微生物叢は、ノンパラメトリックまたはパラメトリック法を使用して、ベースラインおよび各レシピエントの糞便サンプリング時点で比較されます（アルファ多様性と分類群の存在量の測定）。

安全上の考慮事項:

ハウケランド大学病院では、過去数年間、治療抵抗性 Cl の FMT を実施する長い経験が得られました。ディフィシル腸炎の患者であり、FMT のための糞便の安全な提供者を特定するための広範なプログラムを開発しました。 長年にわたり、重大な副作用は発生していません。 この研究に適格なIBS患者のサブセットは、通常、症状の負担が大きく、治療の選択肢がほとんどない患者です。 したがって、安全性に関する懸念と症状改善の可能性とのバランスは良好であると考えられ、この治療法がより広く使用されるようになる前に、FMT および ACHIM に関する安全性データを収集することの重要性が強調されます。