粪便微生物群移植和 ACHIM 用于控制 IBS 患者的肠道微生物群

粪便移植 (FMT)，将健康供体的粪便制剂输注到另一个人的胃肠道中，能够改变新宿主的肠道微生物组。 有人推测，来自健康供体的人类粪便可能构成理想的“益生菌”，因此建议将 FMT 作为治疗已检测到微生物群改变的病症的一种选择，包括肠易激综合征 (IBS)。 厌氧培养的人类肠道微生物群 (ACHIM) 是一种替代 FMT 来操纵肠道微生物群的方法。 ACHIM 悬浮液是在实验室（体外）中定期培养和繁殖的正常肠道细菌的天然生态系统。 经过 20 年的培育，ACHIM 保留了与 1995 年源自健康捐赠者的原始粪便样本一样丰富的生物多样性。 ACHIM 可以在肠道受到干扰（生态失调）时恢复肠道的生态平衡，例如抗生素治疗后。 迄今为止，已有 400 多名患者（其中大多数患有复发性艰难梭菌感染）服用 ACHIM，未观察到任何严重的副作用。 微生物学测试表明，ACHIM 是一种功能均衡的微生物群，包含主要的细菌门厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门和放线菌门。

因此，本研究旨在比较这些方法在缓解 IBS 患者症状方面的安全性和有效性。 考虑到 FMT 治疗未知和长期不良反应的伦理问题，将仅包括具有中度至重度症状的患者。

目的：

这项开放试验研究的主要目的是在 IBS 患者中比较这两种肠道操作方法（FMT 和 ACHIM）。

次要目标如下；

1. 评估和比较 FMT 和 ACHIM 悬浮液在缓解 IBS 患者症状方面的安全性和有效性。
2. 评估和比较 FMT 和 ACHIM 对生活质量的影响。
3. 比较微生物群落组成的详细特征（通过 16S rRNA 分析）和 FMT 和 ACHIM 与安慰剂后变化动力学的测定。

研究设计 参与者和样本量 在一项盲法研究中，将纳入具有中度至重度腹部症状且符合 IBS 罗马 III 标准的患者。 患者将被随机分为三组，分别接受 FMT、ACHIM 悬浮液或安慰剂（自己的粪便），并在疗效和安全性参数以及粪便样本分析方面对他们进行为期 12 周的随访。

捐助者筛选：

粪便菌群的供体是与患者住在同一家庭的健康人。 所有捐献者在捐献之前都经过筛选，以确定是否曾接触过传染性传染原。 血液筛查包括甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、HIV、Epstein-Barr 病毒和巨细胞病毒的血清学检测。 所有供体粪便样本都经过肠道细菌病原体培养，并筛查病毒和寄生虫。

研究程序 用于 FMT 或 ACHIM 的近亲的新鲜粪便悬浮液将通过内窥镜注入十二指肠。 这种给药途径在所有研究中都是安全的。

• 粪便移植方案：在 FMT 之前立即获取新鲜粪便样本。 将 60 毫升无菌 0.9% N-盐水添加到重量约为 30 克的粪便标本中，并手动匀化。 从患者视野筛选，将40ml粪便悬液经胃镜工作通道滴入十二指肠下部，然后用60ml无菌0.9%N-生理盐水冲洗。
• ACHIM 移植方案：ACHIM 悬浮液（ACHIM Biotherapeutics，瑞典）通过胃镜的工作通道进入十二指肠下部，然后用 60 ml 无菌 0.9% N-盐水冲洗。
• 粪便样本将在研究前（第 4 周和 -0-1 周）收集两次，然后在第 1、4 和 12 周后以及 6 个月后收集。 还将收集用于 FMT 的供体粪便。 在所有时间点对新鲜冷冻干燥的粪便进行取样，等分并储存在-80 度（从生产到交付<24 小时）。
• 微生物 DNA 分析：使用 Genetic Analysis (GA) map™ DysbiosisTest (Genetic Analysis AS, Oslo, Norway) 进行微生物群分析。 GA 测试基于常规分子生物学技术，包括粪便样本均质化和机械细菌细胞破碎；结合化学细胞裂解；使用磁珠自动提取总细菌基因组 DNA； 16S 核糖体核糖核酸 (rRNA) 聚合酶链式反应 (PCR) DNA 扩增覆盖可变区 V3-V9；通过单核苷酸延伸进行探针标记；与耦合到磁珠的互补探针杂交；使用 BioCode 1000A 128-Plex Analyzer（Applied BioCode，Santa Fe Springs，California，USA）进行信号检测。 生态失调指数 (DI) 高于 2（最大 5）表示微生物群与参考组不同（DI 1-2：非生态失调，DI 3：中度，DI 4-5：严重生态失调）。
• 血液样本（全血细胞计数、肾脏和肝脏功能测试）和尿液分析。
• 症状和生活质量评估：将在 12 周的随访期间记录胃肠道症状、排便习惯和生活质量，在第 0 天、第 1、4、12 和 28 周进行症状和生活质量评估。 要求患者使用四分制（0 = 无，1 = 轻度，2 = 中度， 3 = 严重）。 IBS症状严重程度量表（IBS-SSS）包含5个问题，采用100分视觉模拟量表（VAS）评分（腹痛的严重程度、腹痛的频率、腹胀的严重程度、对排便习惯的不满、和干扰生活质量）。 分数范围从0到500，分数越高表示病情越差（分数<175代表轻度IBS症状，175-300代表中度，>300代表重度IBS）。 IBS-SSS 降低 50 分已被证明与临床症状的改善相关。

Nepean 消化不良指数 (SF-NDI) 的缩写形式将用于评估生活质量。

统计分析：

微生物群组成的纵向分析将通过重复测量方差分析（用于 alpha 多样性和细菌丰度）进行。 如果是非正态数据，将使用反正弦平方根变换或非参数检验。 将使用非参数或参数方法在基线和每个受体粪便采样时间点比较原始供体和受体粪便微生物群（α 多样性和分类群丰度的测量）。

安全考虑：

在过去的几年里，豪克兰大学医院在对难治性 Cl 进行 FMT 方面积累了丰富的经验。艰难梭菌小肠结肠炎，并制定了一项广泛的计划，以确定用于 FMT 的安全粪便供体。 多年来，没有发生严重的副作用。 符合研究条件的 IBS 患者子集通常是症状负担较重且治疗选择很少的患者。 因此，安全性问题与症状改善可能性之间的平衡被认为是积极的，并且将强调在 FMT 和 ACHIM 的安全性数据被广泛使用之前收集安全性数据的重要性。