Oraalisesti annettujen NAD+ -esiasteiden metabolisen vuodon jäljittäminen

Tausta ja merkitys

1.1 NAD+: n rooli fysiologiassa nikotiinamidia adeniinidinukleotidi (NAD+) on avainkoentsyymi kaikissa elävissä organismeissa, jotka ovat olemassa hapettuneissa (NAD+) ja vähentyneissä (NADH) muodossa. NAD+: n elintärkeän roolinsa lisäksi Redox-reaktioissa ja ATP-muodostumisessa toimii myös yhteisyrityksenä useille signalointientsyymeille, kuten Sirtuins, PARPS ja CD38. Systeeminen NAD+ vajaatoiminta voi aiheuttaa sairauksia, kuten pellagra; Vähentynyt NAD+-saatavuus on osallistunut ikääntymiseen ja ikään liittyviin häiriöihin.

1.2 ORAL NAD+ NAD+ -esiasteiden (esim. NMN, NR, NAM) antaminen voi lisätä NAD+ -tasoja. Vaikka ihmisen tutkimukset ovat osoittaneet, että suun kautta annettava NMN nostaa veren NAD+ -pitoisuuksia, monet sen imeytymisen, aineenvaihdunnan ja yleisen hyötyosuuden näkökohdat ovat edelleen huonosti ymmärrettäviä. Jyrsijöiden tutkimukset viittaavat suun kautta tapahtuvaan NMN: ään laajaan ensimmäisen läpäisyn aineenvaihduntaan suolistossa, osittaisen muuntamisen NAM: ksi ennen systeemisen verenkierron syöttämistä.

1.3 Ikääntyminen ja NAD+ jyrsijämalleissa NAD+ -tasot laskevat usein eläinten vanhetessa. Jotkut todisteet osoittavat, että NAD+ -siirto voi olla kohonnut ikääntyvillä jyrsijöillä, mikä viittaa korkeampaan NAD+ -kulutuksen määrään. Vastaavia merkkiainetutkimuksia ei kuitenkaan ole vielä tehty ihmisillä.

1.4 Ihmisten merkkiainetutkimusten tarve Näitä yhdisteitä tutkitaan ikään liittyvien sairauksien ehkäisemiseksi ja hoitamiseksi. On tarpeen selventää, kuinka ne imeytyvät ja kuinka ne nostavat NAD+: ta eri kudoksissa. Stabiilin isotooppileimattu NMN: n ja NAM: n käyttäminen auttaa kartoittamaan virtauksen suun edeltäjistä vereen, lihakseen, virtsaan ja ulosteeseen ja paljastaa myös, kuinka ikääntyminen vaikuttaa NAD+ -vaihtoon.

2. tavoitteet ja tavoitteet

Tavoite 1: Käytä vakaita isotooppien merkkiaineita ja massaspektrometriaa terveissä nuorissa aikuisissa seurataksesi, kuinka suun kautta annetut NMN: n tai NAM: n metaboloivat, kuinka ne tulevat NAD+ -altaan ja kuinka paljon erittyy tai muunnetaan muihin metaboliiteihin.

Tavoite 2: Vertaa näitä samoja vuoja vanhemmilla aikuisilla (≥65 vuotta). Tutkijat haluavat erityisesti nähdä, muuttaako ikä metabolista reittiä edeltäjästä NAD+: een ja onko vanhemmilla aikuisilla NAD+: n suurempi kulutus (liikevaihto).

3. Opintojen suunnittelu

3.1 Yleiskatsaus yhden keskuksen kokeilu Brighamin ja naisten sairaalassa.

Ryhmät: Kaksi osallistujaryhmää:

Ryhmä A (NMN-ryhmä): 16 osallistujaa (8 18–40-vuotiasta nuorta aikuista; 8 ≥65-vuotiasta vanhempaa aikuista).

Ryhmä B (NAM -ryhmä): 16 osallistujaa (8 nuorta; 8 vanhempi). Jokainen osallistuja vie joko NMN: n tai NAM: n suun kautta 14 päivän ajan. Tutkimuksessa käytetään vakaita isotooppeja (ei-radioaktiivisia) NMN: n tai NAM: n merkitsemiseen seuratakseen, kuinka nämä molekyylit näkyvät NAD+: ssa ja sen alavirran metaboliiteissa.

3.2 Hoitokesto Osallistujat saavat päivittäisiä annoksia osoitetusta hoidostaan ​​(NMN tai NAM) 14 päivän ajan. Yksityiskohtainen näytteenotto päivinä 1 ja 14.

3.3 Annostus NMN: 1000 mg kerran päivässä (neljä 250 mg kapselia). NAM: 370 mg kerran päivässä. Päivinä 1 ja 14 koko suun kautta annettava annos on täysin merkitty vakailla isotoopeilla; Välipäivinä (2-13) tuote on leimaamaton.

3.4 Avainarvioinnit Verivirtautuu useisiin ajankohtiin (esim. Ennakko, 30 min, 1 tunti, 2 tuntia, 4 tuntia, 8 tuntia) päivinä 1 ja 14.

Vastus lateralis -lihasbiopsiat (päivät 1 ja 14, tyypillisesti ~ 6-8 tuntia annoksen jälkeen) määrittääksesi kuinka paljon merkitty esiaste esiintyy lihas NAD+ -altaan.

Ajoitettu virtsan ja jakkaran keräys päivinä 1-2 ja 14-15 nähdäksesi, kuinka esiaste tai NAD+ -metabolitit erittyvät ja karakterisoida suolen mikrobiomia (jotka voivat vaikuttaa NAD+ -esiasteen aineenvaihduntaan ja NMN tai NAM voi vaikuttaa siihen).

4. päätepisteet

Perifeerisen veren NAD+: n ensisijaiset päätetapahtumat (NMN -ryhmän) fraktio, joka sisältää stabiilin isotooppimerkinnän merkinnän

Ensisijaiset päätepisteet (NAM -ryhmälle) perifeerisen veren NAD+: n fraktio, joka sisältää stabiilin isotooppi -merkinnän merkinnän

5. Tutkimusmenettelyjen seulontavaihe (jopa 4 viikkoa ennen päivää 1) sairaushistoria, väestötiedot, laboratoriokokeet (CBC, kemia, A1C), fysikaalinen tutkimus ja EKG, jos ilmoitetaan.

Vahvista kelpoisuus. Interventiovaihe (päivät 1-14)

Päivä 1:

Kerää lähtötason verinäytteet ja lihasbiopsia. Veri vetää useita ajankohtia (esim. Esiannoksen, 30 min, 1 tunti, 2 tuntia, 4 tuntia, 8 tuntia).

Antaa stabiili-isotooppileimattu tuote (NMN tai NAM) ajankohtana 0. Toista veriveto tietyin väliajoin. Kerää virtsa ja jakkara.

Päivä 2:

Lisäveren vetoa. Aloita leimaamattoman opintotuotteen ottaminen päivittäin kotona.

Päivät 3, 5, 8:

Lyhyet vierailut verinäytteistä, elintärkeitä merkkejä, tarttumisen tarkistusta varten.

Päivä 14:

Kerää lähtötason verinäytteet ja lihasbiopsia. Veri vetää useita ajankohtia (esim. Esiannoksen, 30 min, 1 tunti, 2 tuntia, 4 tuntia, 8 tuntia).

Antaa stabiili-isotooppileimattu tuote (NMN tai NAM) aikaan 0. Kerää virtsa ja jakkara.

Päivä 15:

Leimaamaton hoito (NAM tai NMN). Seurantaa veri vetää.

Seurantavaihe:

Päivät 16, 43:

Lopulliset turvallisuuslaboratoriot, tarkista haittavaikutukset, mittaa kaikki merkittyjä/leimaamattomia NAD+ tai metaboliitteja, jotka saattavat viipyä.

6. riskit ja turvallisuus

Huumeiden turvallisuus:

Aikaisemmat vaiheen 1 tutkimukset osoittavat, että 1000 mg NMN jopa kahdesti päivässä on turvallinen ja hyvin siedetty, ilman vakavia lääkkeisiin liittyviä haittavaikutuksia.

NAM tunnustetaan yleisesti turvalliseksi näillä annoksilla. Suuriannoksinen niasiini voi aiheuttaa huuhtelua, GI-häiriöitä tai maksaentsyymikorkeuksia, mutta niitä ei ole nähty NMN: llä tai NAM: lla.

Lihasbiopsia:

Väliaikaisen epämukavuuden, mustelmien tai harvinaisen infektion potentiaali biopsiapaikalla. Ryhmä käyttää paikallispuudutusta ja tavanomaista steriiliä tekniikkaa.

Veriveto:

Yleisiä riskejä ovat ohimenevä kipu tai mustelmat ja harvoin tartunta.

Virtsan ja jakkarakokoelma:

Tärkein riski on haitat ja lievä epämukavuus; Itse kokoelmasta ei ole merkittävää lääketieteellistä riskiä.

Haittatapahtumien raportti:

Protokolla määrittelee säännöllisen seurannan ja raportoinnin. Turvallisuusarviointivaliokunta (SRC) kokoontuu kuuden kuukauden välein.

7. Tilastollinen analyysi

Ensisijaiset analyysit:

Määritä merkitty NAD+ vs. leimaamattoman osuus veressä, PBMC: ssä, lihaksessa, virtsassa ja jakkarassa.

Vertaa nuoria tai vanhempia aikuisia näkemään, muuttaako ikääntyminen NAD+ -esiasteen aineenvaihdunnan reittiä tai suuruutta.

Mallit:

Sekoitettujen mallin toistuvat mitat (MMRM) tai ANCOVA: n kanssa ikä-, sukupuolen ja lähtöarvojen tekijöillä.

Näytteen koko:

16 henkilöä kohden (8 nuorta + 8 vanhempaa NMN-ryhmässä; 8 nuorta + 8 vanhempaa NAM-ryhmässä) perustuu pilottitietoihin ja stabiilien isotooppien jäljittämisen erikoistuneeseen luonteeseen.

8. Opiskelu ja logistiikka

Satunnaistaminen:

1: 1 Suhde NMN: ään vs. NAM, Block-satunnaistettu, osittainen ikäryhmän mukaan.

Sokea:

Protokolla on avoin vertailu kahdesta leimattua esiastetta.

Tiedonhallinta:

Elektroniset CRF: t, RedCap -tietokanta, tutkijoiden todentaminen.

Seuranta:

Sisäinen joukkue plus sponsorin valvonta.

Eettiset näkökohdat:

IRB Painopiste osallistujien turvallisuuden varmistamisessa.

9. merkitys ja mahdollinen vaikutus

Protokolla puuttuu kriittisiin aukkoihin tiedossa, kuten siitä, kuinka suun kautta nauttimista NAD+ -esiasteista (NMN, NAM) tulee NAD+: n ihmisen kudoksissa.

Tulokset ilmoittavat, onko vanhemmilla aikuisilla selvästi korkeampi NAD+ -vaihto ja voivat reagoida eri tavalla NAD+ -aineeseen.

Havainnot voivat muokata NMN/NAM: n kliinisiä annostussuosituksia terapeuttisissa tai ennaltaehkäisevissä olosuhteissa, jotka liittyvät ikääntymiseen ja aineenvaihduntaan.