Śledzenie strumienia metabolicznego podawanych doustnie prekursorów NAD+

Tło i znaczenie

1.1 Rola NAD+w fizjologii nikotynamid adeninę dinukleotyd (NAD+) jest kluczowym koenzymem we wszystkich żywych organizmach, istniejących w tworzeniach utlenionych (NAD+) i zmniejszonym (NADH). Oprócz jego istotnej roli w reakcjach redoks i generowaniu ATP, NAD+ służy również jako substrat dla kilku enzymów sygnałowych, takich jak sirtuiny, PARP i CD38. Systemowy niedobór NAD+ może powodować choroby takie jak Pellagra; Zmniejszona dostępność NAD+ jest zaangażowana w starzenie się i zaburzenia związane z wiekiem.

1.2 Doustne prekursory NAD+ Podawanie prekursorów NAD+ (np. NMN, NR, NAM) może zwiększyć poziomy NAD+. Chociaż badania ludzkie wykazały, że doustne NMN podnosi stężenie NAD+ krwi, wiele aspektów jego absorpcji, metabolizmu i ogólnej biodostępności jest nadal słabo poznanych. Badania gryzoni sugerują, że doustny NMN ulega szeroko zakrojonym metabolizmowi pierwszego przejścia w jelitach, z częściową konwersją do NAM przed wprowadzeniem krążenia ogólnoustrojowego.

1,3 Starzenie się i NAD+ W modelach gryzoni poziomy NAD+ często spadają w miarę starzenia się zwierząt. Niektóre dowody wskazują, że obrót NAD+ może być podwyższony u starzejących się gryzoni, co sugeruje wyższą szybkość zużycia NAD+. Jednak równoważne badania znaczników nie zostały jeszcze przeprowadzone u ludzi.

1.4 Potrzeba ludzkich badań znaczników te związki są badane w celu zapobiegania i leczenia chorób związanych z wiekiem. Konieczne jest wyjaśnienie, w jaki sposób są wchłaniane i jak dokładnie podnoszą NAD+ w różnych tkankach. Używanie stabilnego NMN znakowanego izotopem NMN i NAM pomoże mapować strumień z doustnych prekursorów na krew, mięsień, mocz i stołek, a także ujawni, w jaki sposób starzenie się wpływa na obrót NAD+.

2. Cele i cele

Cel 1: Użyj stabilnych znaczników izotopowych i spektrometrii masowej u zdrowych młodych dorosłych, aby śledzić, w jaki sposób podawane doustnie NMN lub NAM są metabolizowane, w jaki sposób wchodzą one do pul NAD+, a ile wydalane jest lub przekształcane na inne metabolity.

AIM 2: Porównaj te same strumienie u starszych osób dorosłych (≥65 lat). Śledczy konkretnie chcą sprawdzić, czy wiek zmienia trasę metaboliczną z prekursora na NAD+ i czy starsze dorośli wykazują wyższe spożycie (obrót) NAD+.

3. Projekt badania

3.1 Przegląd badania jednoskutowego w Brigham and Women's Hospital.

Grupy: dwie główne grupy uczestników:

Grupa A (grupa NMN): 16 uczestników (8 młodych dorosłych w wieku 18–40; 8 starszych dorosłych w wieku ≥65).

Grupa B (grupa NAM): 16 uczestników (8 młodych; 8 starszych). Każdy uczestnik przyjmuje NMN lub Nam doustnie przez 14 dni. W badaniu wykorzystuje stabilne izotopy (nie radioaktywne) do oznaczania NMN lub NAM w celu śledzenia, w jaki sposób te cząsteczki pojawiają się w NAD+ i jego metabolitach poniżej.

3.2 Uczestnicy czasu trwania leczenia otrzymują codzienne dawki przypisanego leczenia (NMN lub NAM) przez 14 dni. Szczegółowe próbkowanie wykonane w dniach 1 i 14.

3,3 Dawkowanie NMN: 1000 mg raz na dobę (cztery 250 mg kapsułek). NAM: 370 mg raz na dobę. W dniach 1 i 14 cała dawka doustna jest w pełni oznaczona stabilnymi izotopami; W czasach pośrednie (2-13) produkt jest nieznakowany.

3.4 Kluczowe oceny pobierają krew w wielu punktach czasowych (np. Dawka przed dawką, 30 min, 1 godzinę, 2 godziny, 4 godziny, 8 godzin) w dniach 1 i 14.

Biopsje mięśni Vastus lateralis (dni 1 i 14, zazwyczaj ~ 6-8 godzin po dawce) w celu ustalenia, jak bardzo oznaczony prekursor pojawia się w pulach NAD+.

Zbiór moczu i stołka w dniach 1-2 i 14-15, aby zobaczyć, w jaki sposób metabolity prekursorowe lub NAD+ są wydalane i scharakteryzują mikrobiom jelit (który może wpływać na metabolizm NAD+ prekursora i może mieć na to wpływ NMN lub NAM).

4. Punkty końcowe

Pierwotne punkty końcowe (dla grupy NMN) Ułamek krwi obwodowej NAD+ zawierający stabilny znacznik znakowany izotopem

Pierwotne punkty końcowe (dla grupy NAM) Ułamek krwi obwodowej NAD+ zawierający stabilny znacznik znakowany izotopem

5. Procedury badań Faza badań (do 4 tygodni przed 1 dzień) Historia medyczna, dane demograficzne, testy laboratoryjne (CBC, Chemia, A1C), egzamin fizykalny i EKG, jeśli jest to wskazane.

Potwierdź uprawnienia. Faza interwencji (dni 1-14)

Dzień 1:

Zbierz wyjściowe próbki krwi i biopsję mięśni. Krew rysuje w wielu punktach czasowych (np. Dawka przed dawką, 30 min, 1 godzinę, 2 godziny, 4 godziny, 8 godzin).

Podaj produkt znakowany stabilnym izotopem (NMN lub NAM) w czasie 0. Powtórz krew losowania w określonych odstępach czasu. Zbierz mocz i stołek.

Dzień 2:

Dodatkowe losowanie krwi. Zacznij przyjmować nieznakowany produkt do nauki codziennie w domu.

Dni 3, 5, 8:

Krótkie wizyty w zakresie pobierania próbek krwi, objawów życiowych, kontroli przylegania.

Dzień 14:

Zbierz wyjściowe próbki krwi i biopsję mięśni. Krew rysuje w wielu punktach czasowych (np. Dawka przed dawką, 30 min, 1 godzinę, 2 godziny, 4 godziny, 8 godzin).

Podaj produkt znakowany stabilnym izotopem (NMN lub NAM) w czasie 0. Zbierz mocz i stołek.

Dzień 15:

Administracja nieoznaczonego leczenia (NAM lub NMN). Dokładnia dalszej krwi.

Faza kontrolna:

Dni 16, 43:

Ostateczne laboratoria bezpieczeństwa, sprawdź zdarzenia niepożądane, mierzyć dowolne oznaczone/nieznakowane NAD+ lub metabolity, które mogą pozostać.

6. Ryzyko i bezpieczeństwo

Bezpieczeństwo narkotyków:

Poprzednie badania fazy 1 pokazują, że 1000 mg NMN do dwa razy dziennie jest bezpieczny i dobrze tolerowany, bez poważnych zdarzeń niepożądanych związanych z lekami.

NAM jest ogólnie uznawany za bezpieczny w tych dawkach. Nicyna o wysokiej dawce może powodować spłukiwanie, zakłócenia GI lub wysokości enzymu wątroby, ale nie były one zaobserwowane w przypadku NMN lub NAM.

Biopsja mięśni:

Potencjał tymczasowego dyskomfortu, siniaka lub rzadkiej infekcji w miejscu biopsji. Zespół użyje lokalnej znieczulenia i standardowej sterylnej techniki.

Krew rysuje:

Typowe ryzyko obejmuje przejściowy ból lub siniak oraz rzadko infekcję.

Kolekcja moczu i stołka:

Głównym ryzykiem są niedogodności i łagodny dyskomfort; Brak istotnego ryzyka medycznego ze strony samej kolekcji.

Raportowanie zdarzeń niepożądanych:

Protokół określa regularne monitorowanie i raportowanie. Komitet ds. Przeglądu bezpieczeństwa (SRC) spotyka się co sześć miesięcy.

7. Analiza statystyczna

Analizy podstawowe:

Ocenę frakcję znakowanego NAD+ vs. nieznakowanego we krwi, PBMC, mięśniach, moczu i kale.

Porównaj młode i starsze osoby dorosłe, aby zobaczyć, czy starzenie się zmienia trasę lub wielkość metabolizmu prekursora NAD+.

Modele:

Mieszane powtarzane pomiary (MMRM) lub ANCOVA z czynnikami dla wieku, płci i wartości wyjściowych.

Rozmiar próbki:

16 osób na ramię (8 młodych + 8 starszych w grupie NMN; 8 młodych + 8 starszych w grupie NAM) opiera się na danych pilotażowych i wyspecjalizowanym charakterze śledzenia stabilnego izotopu.

8. Prowadzenie i logistyka badań

Randomizacja:

Stosunek 1: 1 do NMN vs. NAM, blokowy, stratyfikowany według grupy wiekowej.

Oślepiający:

Protokół to porównanie otwartych znaków dwóch oznaczonych prekursorów.

Zarządzanie danymi:

Elektroniczne CRF, baza danych Redcap, weryfikacja przez badaczy.

Monitorowanie:

Wewnętrzny zespół plus sponsor nadzór.

Rozważania etyczne:

Zatwierdzenie IRB, świadomowa zgoda na opisanie celów, procedur i ryzyka. Nacisk na zapewnienie bezpieczeństwa uczestników.

9. Znaczenie i potencjalny wpływ

Protokół dotyczy krytycznych luk w wiedzy, takich jak ustnie połknięte prekursory NAD+ (NMN, NAM) stają się NAD+ w ludzkich tkankach.

Wyniki poinformują, czy starsze osoby dorosłe mają wyraźnie wyższy obrót NAD+ i mogą inaczej reagować na powiększenie NAD+.

Wyniki mogą kształtować zalecenia dotyczące dawkowania klinicznego dla NMN/NAM w warunkach terapeutycznych lub zapobiegawczych związanych ze starzeniem się i zdrowiem metabolicznym.