Rastrear o fluxo metabólico de precursores NAD+ administrados por via oral

Antecedentes e significado

1.1 O papel do NAD+na fisiologia da nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+) é uma coenzima chave em todos os organismos vivos, existentes em formas oxidadas (NAD+) e reduzidas (NADH). Além de seu papel vital nas reações redox e na geração de ATP, o NAD+ também serve como um co-substrato para várias enzimas de sinalização, como sirtuínas, PARPs e CD38. A insuficiência sistêmica de NAD+ pode causar doenças como Pellagra; A disponibilidade reduzida de NAD+ tem sido implicada nos distúrbios relacionados à idade e à idade.

1.2 NAD+ precursores orais A administração de precursores NAD+ (por exemplo, NMN, NR, NAM) pode aumentar os níveis de NAD+. Embora a pesquisa humana tenha mostrado que o NMN oral aumenta as concentrações de NAD+ no sangue, muitos aspectos de sua absorção, metabolismo e biodisponibilidade geral ainda são pouco conhecidos. Estudos de roedores sugerem que a NMN oral sofre um extenso metabolismo de primeira passagem no intestino, com conversão parcial em NAM antes de entrar em circulação sistêmica.

1.3 Envelhecimento e NAD+ Em modelos de roedores, os níveis de NAD+ freqüentemente diminuem à medida que os animais envelhecem. Algumas evidências indicam que a rotatividade de NAD+ pode ser elevada em roedores envelhecidos, sugerindo uma taxa mais alta de consumo de NAD+. No entanto, estudos de marcadores equivalentes ainda não foram conduzidos em humanos.

1.4 Necessidade de estudos de marcadores humanos Esses compostos estão sendo investigados para a prevenção e tratamento de doenças relacionadas à idade. É necessário esclarecer como eles são absorvidos e como exatamente elevam o NAD+ em diferentes tecidos. O uso de NMN e NAM marcados com isótopos estáveis ​​ajudará a mapear o fluxo de precursores orais em sangue, músculo, urina e fezes, e também revelará como o envelhecimento influencia a rotatividade de NAD+.

2. Objetivos e objetivos

Objetivo 1: Use traçadores isótopos estáveis ​​e espectrometria de massa em adultos jovens saudáveis ​​para rastrear como o NMN ou o NAM administrado por via oral são metabolizados, como eles entram em pools NAD+ e quanto é excretado ou convertido em outros metabólitos.

Objetivo 2: Compare esses mesmos fluxos em adultos mais velhos (≥65 anos). Os investigadores querem especificamente verificar se a idade altera a rota metabólica do precursor para o NAD+ e se os idosos exibem maior consumo (rotatividade) do NAD+.

3. Projeto do estudo

3.1 Visão geral Trial de centro único no Brigham and Women's Hospital.

Grupos: dois grupos principais de participantes:

Grupo A (Grupo NMN): 16 participantes (8 adultos jovens de 18 a 40 anos; 8 adultos mais velhos ≥65).

Grupo B (Grupo NAM): 16 participantes (8 jovens; 8 idosos). Cada participante leva o NMN ou o NAM oralmente por 14 dias. O estudo utiliza isótopos estáveis ​​(não radioativos) para rotular NMN ou NAM para rastrear como essas moléculas aparecem no NAD+ e seus metabólitos a jusante.

3.2 Os participantes da duração do tratamento recebem doses diárias de tratamento designado (NMN ou NAM) por 14 dias. Amostragem detalhada feita nos dias 1 e 14.

3,3 Dosagem NMN: 1000 mg uma vez ao dia (quatro cápsulas de 250 mg). Nam: 370 mg uma vez ao dia. Nos dias 1 e 14, toda a dose oral é totalmente rotulada com isótopos estáveis; Nos dias intermediários (2-13), o produto não é marcado.

3.4 Avaliações-chave O sangue é utilizado em vários momentos (por exemplo, pré-dose, 30 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas) nos dias 1 e 14.

Biópsias musculares do vastus lateral (dias 1 e 14, tipicamente ~ 6-8 horas após a dose) para determinar quanto precursor rotulado aparece nas piscinas musculares NAD+.

A coleta cronometrada de urina e fezes nos dias 1-2 e 14-15 para ver como o precursor ou os metabólitos NAD+ são excretados e caracterizar o microbioma intestinal (que pode influenciar o metabolismo precursor de NAD+ e pode ser afetado pelo NMN ou NAM).

4 pontos de extremidade

Terminais primários (para o grupo nmn) fração do sangue periférico NAD+ contendo o rastreamento de isótopo estável marcado

Pontos finais primários (para o grupo nam) fração do sangue periférico NAD+ contendo o isótopo estável marcado com rastreamento

5. Fase de triagem de procedimentos de estudo (até 4 semanas antes do dia 1) História médica, demografia, testes de laboratório (CBC, química, A1C), exame físico e ekg, se indicado.

Confirme a elegibilidade. Fase de intervenção (Dias 1-14)

Dia 1:

Colete amostras de sangue basal e biópsia muscular. O sangue é utilizado em vários momentos (por exemplo, pré-dose, 30 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas).

Administre o produto estável-isótopo marcado com isótopo (NMN ou NAM) no tempo 0. Repita o sangue de tração em intervalos especificados. Colete urina e fezes.

Dia 2:

Blood adicional é importante. Comece a tomar o produto de estudo não marcado diariamente em casa.

Dias 3, 5, 8:

Visitas curtas para amostragem de sangue, sinais vitais, verificação de adesão.

Dia 14:

Colete amostras de sangue basal e biópsia muscular. O sangue é utilizado em vários momentos (por exemplo, pré-dose, 30 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas).

Administre produto estável com isótopo (NMN ou NAM) no tempo 0. Colete urina e fezes.

Dia 15:

Administração de tratamento não marcado (NAM ou NMN). O sangue de acompanhamento é dado.

Fase de acompanhamento:

Dias 16, 43:

Laboratórios finais de segurança, verifique se há eventos adversos, meça qualquer NAD+ rotulado/não marcado ou metabólitos que possam demorar.

6. Riscos e segurança

Segurança de medicamentos:

Os ensaios anteriores da Fase 1 mostram 1000 mg de NMN até duas vezes ao dia, é seguro e bem tolerado, sem eventos adversos graves relacionados a medicamentos.

Nam é geralmente reconhecido como seguro nessas doses. A niacina em altas doses pode causar elevações de descarga, distúrbio gastrointestinal ou enzima hepática, mas essas não foram vistas com NMN ou NAM.

Biópsia muscular:

Potencial de desconforto temporário, hematomas ou infecção rara no local da biópsia. A equipe usará uma técnica de anestesia local e estéril padrão.

Blood Draws:

Os riscos comuns incluem dor transitória ou hematomas e raramente a infecção.

Coleção de urina e fezes:

O principal risco é inconveniente e leve desconforto; Nenhum risco médico significativo da própria coleção.

Relatórios de eventos adversos:

O protocolo especifica o monitoramento e os relatórios regulares. Um comitê de revisão de segurança (SRC) se reúne a cada seis meses.

7. Análise Estatística

Análises primárias:

Quantifique a fração de NAD+ marcado vs. não marcado em sangue, PBMCs, músculo, urina e fezes.

Compare jovens versus adultos mais velhos para ver se o envelhecimento muda a rota ou magnitude do metabolismo do precursor NAD+.

Modelos:

Medidas repetidas de modelo misto (MMRM) ou ANCOVA com fatores de idade, sexo e valores de linha de base.

Tamanho da amostra:

16 indivíduos por braço (8 jovens + 8 mais velhos no grupo NMN; 8 jovens + 8 mais antigos no grupo NAM) são baseados em dados piloto e na natureza especializada do rastreamento de isótopos estáveis.

8. Conduta de estudo e logística

Randomização:

1: 1 proporção para nmn vs. nam, aleatomizada em bloco, estratificada por faixa etária.

Cego:

O protocolo é uma comparação aberta de dois precursores rotulados.

Gerenciamento de dados:

CRFs eletrônicos, banco de dados RedCap, verificação dos investigadores.

Monitoramento:

Equipe interna e supervisão patrocinadora.

Considerações éticas:

A aprovação do IRB, o consentimento informado detalhando os objetivos, procedimentos e riscos. Ênfase em garantir a segurança dos participantes.

9. Importância e impacto potencial

O protocolo aborda lacunas críticas em conhecimento, como a maneira como os precursores NAD+ ingeridos por via oral (NMN, NAM) se tornam NAD+ nos tecidos humanos.

Os resultados informarão se os adultos mais velhos têm uma rotatividade de NAD+ distintamente mais alta e poderá responder de maneira diferente ao aumento do NAD+.

Os resultados podem moldar as recomendações de dosagem clínica para NMN/NAM em ambientes terapêuticos ou preventivos relacionados ao envelhecimento e à saúde metabólica.