Marcatori nel condensato del respiro espirato nei pazienti con apnea ostruttiva del sonno (OSA).

Misurazione dell'ossido nitrico espirato e raccolta del condensato del respiro espirato e del sangue periferico. Questo sarà fatto da 2 a 4 volte (al momento del ricovero, la mattina dopo lo studio del sonno, immediatamente dopo la titolazione CPAP, dopo l'uso di CPAP per 3 mesi). Ogni volta eNO verrà misurato per primo, seguito dalla raccolta EBC.

Per i test al mattino, ai pazienti verrà chiesto di posticipare la colazione a dopo il test che durerà meno di mezz'ora.

L'OSA è definita come pazienti con un indice di disturbo respiratorio ≥5/h.

Misurazione dell'ossido nitrico espirato:

L'eNO sarà misurato utilizzando un analizzatore a chemiluminescenza Sievers 280i (Sievers Instruments, Boulder, CO, USA) sensibile all'NO da 1 ppb a 200 ppm e con una risoluzione di 1 ppb e un'accuratezza di 1 ppb progettato per la registrazione online. La misurazione di eNO sarà eseguita secondo gli standard ATS. In breve, i soggetti devono rimanere seduti senza stringinaso durante la procedura, con 2 minuti di riposo tra le misurazioni di eNO. L'eNO sarà misurato online a un flusso espiratorio di 50 ml/sec, uno spazio morto di 10 ml e una durata del plateau di 2 secondi. Vengono eseguite espirazioni ripetute fino a quando tre valori di plateau NO concordano al livello del 10% o due concordano al livello del 5%. Verrà quindi registrato il valore medio di NO.

Raccolta del condensato del respiro espirato:

L'EBC verrà raccolto utilizzando ECoscreen (Jaeger, Germania) secondo le istruzioni del produttore. Dopo essersi sciacquati la bocca, i soggetti reclutati respireranno in modo regolare attraverso un boccaglio collegato attraverso un'unica valvola unidirezionale in un tubo di raccolta raffreddato dove i vapori, gli aerosol e l'umidità nel respiro si condensano lungo le pareti del tubo. La valvola unidirezionale viene quindi utilizzata come stantuffo che raccoglie le goccioline attaccate alla parete interna e trattiene il campione vicino alla parte superiore del tubo. Il dispositivo previene intrinsecamente la contaminazione salivare, come dimostrato dall'assenza di amilasi salivare nell'EBC. In media, questo dispositivo sarà in grado di raccogliere 300 microL al minuto di EBC per un adulto. Ad ogni soggetto verrà chiesto di respirare attraverso il kit di raccolta per 5 minuti, che dovrebbero essere sufficientemente lunghi da produrre 1 ml di condensato per l'analisi dei marcatori infiammatori. L'EBC sarà conservato immediatamente a -70oC fino all'analisi dei marcatori infiammatori.

Misurazione dei livelli di 8 isoprostano, GRO alfa, MCP1, eotassina e MDC nel condensato dell'aria espirata:

L'EBC conservato a -70oC sarà analizzato per le concentrazioni di 8-isoprostano, GROalfa, MCP1, eotassina e MDC in lotti. Useremo micropiastre di polistirene a 96 pozzetti rivestite con anticorpi monoclonali murini contro i livelli umani di 8 isoprostano, GRO alfa, MCP1, eotassina e MDC. I livelli di questi marcatori nell'EBC saranno misurati in duplicato mediante saggio immunoenzimatico a sandwich (R & D Systems, Minneapolis, MN, USA) secondo le istruzioni fornite dal produttore.