新生児の腸内微生物叢の発達に対する分娩中の抗生物質予防（IAP）の効果。 (MICROBIOTA-SO)

出生時、新生児の胃腸 (GI) 管は、母体および環境の細菌によって急速に定着します。最初の定着者は一般に好気性菌と通性嫌気性菌であり、その後に厳密な嫌気性菌が続きます (例: ビフィドバクテリウム属、バクテロイデス属、クロストリジウム属）。 腸内微生物叢の組成は、分娩様式、妊娠期間、母体の腸内および膣内の微生物叢、摂食の種類、出産後の入院、抗生物質やプロバイオティクスの使用など、いくつかの要因の影響を受けます。

正期産児の腸内細菌叢は、経腟分娩で完全母乳で育てられ、理想的には健康であると考えられており、C. difficile と E. coli の数が少なく、Bidifobacteria と Lactobacilli の数が多く、免疫担当細胞を活性化することで宿主の健康にプラスの影響を与えます。消化管では、分泌型 IgA の産生を促進し、好中球の殺菌活性と NK 細胞活性などの細胞性免疫を増加させます。

グループ B 連鎖球菌 (GBS) は、新生児感染症と敗血症の最も重要な原因の 1 つです。 経膣分娩の乳児は、出生過程で母体の膣、子宮頸部または直腸から GBS を獲得する可能性があり、妊婦の約 10 ～ 20% に存在します。 90 年代半ば以降、妊娠後期に GBS ユニバーサル スクリーニングが導入され、結果として GBS 陽性の女性に分娩中の抗生物質予防投与 (IAP) が導入されたため、早期発症 GBS 敗血症の発生率は大幅に減少しました。

最近のデータは、幼い頃に抗生物質を使用すると共生腸内微生物叢が変化し、それによって健康と病気のバランスが損なわれる可能性があることを示唆しています。 乳児の腸の細菌定着に対する IAP の影響は、あまり調査されていません。 さらに、この問題に関する現在入手可能なデータの大部分は、文化に基づく技術を使用して行われた研究に由来しています。しかし、正確な培養ベースの結果は、正しい培地、温度、酸素含有量、増殖時間の選択に影響されます。このため、腸内細菌全体のわずか 10 ～ 50% しか容易に培養できません。 原核生物分類群を区別するための 16S リボソーム細菌 RNA 遺伝子の増幅に基づく分子技術は、腸内微生物叢の研究のために最近開発されたため、標準培養よりも細菌群集のより詳細な特徴付けが可能になりました。

我々は以前、分子技術によって経腟分娩された母乳だけで育てられた正期産児の比較的小さなサンプルでIAPの効果を評価しました。生後7日で、IAPにさらされた乳児とさらされていない乳児の間で、微生物叢の組成にいくつかの違いがありました。

したがって、本論文の目的は、これらの違いをさらに詳細に評価し、最初のサンプルを拡大し、乳児を生後1か月まで追跡することです。 微生物叢の組成に対する摂食の種類の影響も調査されています。

妊娠期間に適した出生時体重を持ち、母親が妊娠 35 ～ 37 週で GBS のスクリーニングを受けた、経膣分娩の健康な正期産児を研究に登録します。

以下の場合、幼児は除外されます。

• 早産または妊娠期間の小/大
• 帝王切開で生まれた
• 母親は出産前の 4 週間に何らかの抗生物質を投与されています。
• 母体の IAP は、GBS 陽性以外の理由で実行されます (つまり、 GBS陰性の女性における膜の長期破裂）;
• 母親のIAPが不十分です。
• 母体の IAP は、エリスロマイシンなどのアンピシリン以外の抗生物質で行われます。
• 乳児に重大な先天奇形がある。
• 乳児が感染症の兆候を示している、および/または出生後に抗生物質治療を受けている。
• -乳児は、研究への参加を禁忌とする深刻な臨床状態を持っています。

乳児は、母親の GBS 状態と IAP に従って 2 つのグループに分けられます。

• IAP グループ: 適切な IAP を受けた GBS 陽性の母親から生まれた乳児。 GBS 予防のための施設内治療プロトコル (CDC ガイドラインに由来) に従って、分娩まで 4 時間ごとに静脈内アンピシリンを投与します (最初の投与量は 2 g、次の投与量はそれぞれ 1 g)。 母親が分娩前にアンピシリンを少なくとも 2 回投与されていれば、IAP は適切であると見なされます。
• 対照群：GBS陰性の母親から生まれた乳児で、出産前/出産時に抗生物質治療を受けていない。

乳児が保育園から退院しようとするとき (生後 48 ～ 72 時間) に、各乳児の親/法定後見人から書面によるインフォームド コンセントを取得します。 妊娠期間、出生時体重、性別、出生後​​ 1' および 5' でのアプガー スコアなどの患者の特徴は、特定の症例報告フォームにまとめられています。

生後 7 日目と 30 日目のフォローアップ訪問中に、各乳児から 2 つの糞便サンプルを収集します。 受診のたびに、体重増加、臨床状態、摂食、および進行中の治療に関する情報 (つまり、 プレバイオティクス、プロバイオティクス、抗生物質の使用）は、乳児の両親から収集されます。

収集後、糞便サンプルを番号付きのスクリューキャップ付き滅菌プラスチック容器に入れ、細菌 DNA 抽出のために処理されるまで、-80 ° C で直ちに凍結します。

微生物学的分析は、ボローニャ大学農学部で行われています。 分析を行う研究者は、乳児のグループ ID (IAP またはコントロール グループ) を知りません。

QIAamp DNA Stool Mini Kit (QIAGEN, West Sussex, UK)を用いた細菌DNA抽出には、200ミリグラムの糞便を使用する。 抽出された DNA は、-80 ° C で保存されます。 抽出された DNA の純度と濃度は、260 nm と 280 nm での吸光度の比を測定することによって決定されます (Infinite® 200 PRO NanoQuant、Tecan、Mannedorf、Switzerland)。

選択した微生物グループ (ラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、バクテロイデス フラギリス) の定量化は、リアルタイム PCR で実行されます。 増幅から得られたデータを変換して、対数コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｇとして表される糞便１グラム当たりの細菌細胞数を得る。

得られたデータは、ＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃバージョン２０．０．０（ＩＢＭ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＩＢＭ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ａｒｍｏｎｋ、ニューヨーク、米国）を使用して分析される。 IAP グループとコントロール グループのベースライン特性は、連続変数の独立サンプル マン-ホイットニー U 検定とカテゴリ変数のカイ 2 乗検定を使用して比較されます。 生後7日目および30日目の糞便細菌数に対するIAPの影響は、独立サンプルのマンホイットニーU検定を使用して評価されます。 階層型重回帰分析を実行して、乳児の授乳の種類を制御した後、糞便細菌数に対する IAP の影響を推定します (2 項カテゴリ変数としてコード化: 完全母乳育児 vs. 人工乳育児)。 p値