Efecto de la profilaxis antibiótica intraparto (IAP) en el desarrollo de la microbiota intestinal neonatal. (MICROBIOTA-SO)

Al nacer, el tracto gastrointestinal (GI) neonatal es rápidamente colonizado por bacterias maternas y ambientales; los primeros colonizadores son generalmente aerobios y anaerobios facultativos, seguidos de anaerobios estrictos (p. Bifidobacterium spp., Bacteroides spp. y Clostridium spp.). La composición de la microbiota intestinal está influenciada por varios factores, como el tipo de parto, la edad gestacional, la microbiota intestinal y vaginal materna, el tipo de alimentación, la hospitalización después del parto y el uso de antibióticos y probióticos.

La microbiota intestinal de los recién nacidos a término, nacidos por vía vaginal y alimentados exclusivamente con leche materna, se considera idealmente saludable, con un bajo recuento de C. difficile y E. coli y un alto número de bidifobacterias y lactobacilos, que influyen positivamente en la salud del huésped al activar las células inmunocompetentes en el tracto GI, promoviendo la producción de IgA secretora y aumentando la actividad bactericida de los neutrófilos y la inmunidad mediada por células, como la actividad de las células NK.

El estreptococo del grupo B (GBS) es una de las causas más importantes de infecciones neonatales y sepsis. Los bebés nacidos por vía vaginal pueden adquirir GBS durante el proceso de nacimiento de la vagina, el cuello uterino o el recto maternos, donde reside en aproximadamente el 10-20% de las mujeres embarazadas. Desde mediados de la década de 1990, la incidencia de sepsis por GBS de aparición temprana se ha reducido significativamente, debido a la introducción de la detección universal de GBS durante la última etapa del embarazo y la consiguiente profilaxis antibiótica intraparto (PAI) en mujeres con GBS positivo.

Datos recientes sugieren que el uso de antibióticos en los primeros años de vida podría alterar la microbiota intestinal comensal, alterando así el equilibrio entre la salud y la enfermedad más adelante en la vida. El efecto de la IAP sobre la colonización bacteriana del intestino del bebé no se ha investigado en gran medida. Además, los datos actualmente disponibles sobre este tema se derivan en gran medida de estudios realizados con técnicas basadas en cultivos; sin embargo, los resultados precisos basados ​​en cultivos están influenciados por la selección de los medios, la temperatura, el contenido de oxígeno y el tiempo de crecimiento correctos y, por esta razón, tan solo entre el 10 y el 50 % de las bacterias intestinales se cultivan fácilmente. Recientemente se han desarrollado técnicas moleculares para el estudio de la microbiota intestinal, basadas en la amplificación del gen del ARN bacteriano ribosomal 16S para diferenciar taxones procarióticos, lo que permite una caracterización más detallada de las comunidades bacterianas que el cultivo estándar.

Previamente evaluamos el efecto de la PAI en una muestra relativamente pequeña de recién nacidos a término alimentados exclusivamente con leche materna y que nacieron por vía vaginal mediante técnicas moleculares; a los 7 días de vida hubo varias diferencias en la composición de la microbiota entre los lactantes expuestos a IAP y los no expuestos.

El objetivo del presente trabajo es, por tanto, evaluar estas diferencias con más detalle, ampliando la muestra inicial y siguiendo a los lactantes hasta el mes de edad. También se exploran las influencias del tipo de alimentación en la composición de la microbiota.

Los recién nacidos a término sanos, nacidos por vía vaginal, con un peso al nacer adecuado para la edad gestacional y cuyas madres habían sido examinadas para GBS a las 35-37 semanas de gestación, se inscriben en el estudio.

Los bebés están excluidos si:

• prematuro o pequeño/grande para la edad gestacional
• nacido por cesarea
• la madre ha recibido algún antibiótico en las 4 semanas previas al parto;
• la IAP materna se realiza por razones distintas a la positividad de GBS (es decir, ruptura prolongada de membranas en mujeres GBS negativas);
• la PIA materna es inadecuada;
• la PIA materna se realiza con antibióticos distintos a la ampicilina, como la eritromicina;
• el bebé tiene malformaciones congénitas importantes;
• el bebé desarrolla signos de infección y/o recibió algún tratamiento antibiótico después del nacimiento;
• el bebé tiene alguna condición clínica grave que contraindique su participación en el estudio.

Los bebés se distribuyen en dos grupos según el estado de GBS de la madre y la PAI:

• Grupo IAP: niños nacidos de madres GBS positivas que han recibido IAP adecuado. De acuerdo con el protocolo de tratamiento institucional para la profilaxis de GBS (derivado de las pautas de los CDC), la ampicilina iv se administra cada 4 horas hasta el parto (primera dosis 2 g, dosis siguientes 1 g cada una). La IAP se considera adecuada si la madre ha recibido al menos dos dosis de ampicilina antes del parto.
• Grupo de control: recién nacidos de madres GBS negativas, que no reciben ningún tratamiento antibiótico antes o durante el parto.

El consentimiento informado por escrito se obtiene del padre/tutor legal de cada bebé cuando el bebé está a punto de ser dado de alta de la sala de recién nacidos (48 a 72 horas de vida). Las características de los pacientes, incluida la edad gestacional, el peso al nacer, el sexo y la puntuación de Apgar al 1' y 5' después del nacimiento, se resumen en un formulario de informe de caso específico.

Se recolectan dos muestras fecales de cada bebé durante las visitas de seguimiento a los 7 y 30 días de vida. En cada visita, información sobre aumento de peso, condiciones clínicas, alimentación y tratamientos en curso (es decir, uso de prebióticos, probióticos, antibióticos), se recogen de los padres de los lactantes.

Después de la recolección, las muestras fecales se colocan en recipientes de plástico estériles con tapa de rosca numerados y se congelan inmediatamente a -80 °C, hasta que se procesan para la extracción de ADN bacteriano.

Los análisis microbiológicos se realizan en el Departamento de Ciencias Agrícolas de la Universidad de Bolonia. Los investigadores que realizan los análisis son ciegos a la identidad del grupo de los bebés (IAP o grupo de control).

Se utilizan 200 miligramos de heces para la extracción de ADN bacteriano utilizando el kit QIAamp DNA Stool Mini (QIAGEN, West Sussex, Reino Unido). El ADN extraído se almacena a -80 °C. La pureza y la concentración del ADN extraído se determinan midiendo la relación de absorbancia a 260 y 280 nm (Infinite® 200 PRO NanoQuant, Tecan, Mannedorf, Suiza).

La cuantificación de grupos microbianos seleccionados (Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Bacteroides fragilis) se realiza con PCR en tiempo real. Los datos obtenidos de la amplificación se transforman para obtener el número de células bacterianas por gramo de heces, expresado como logaritmo de unidades formadoras de colonias (UFC)/g.

Los datos obtenidos se analizan utilizando IBM SPSS Statistic versión 20.0.0 (IBM Corporation, IBM Corporation Armonk, Nueva York, Estados Unidos). Las características basales en los grupos IAP y control se comparan utilizando la prueba U de Mann-Whitney para muestras independientes para variables continuas y la prueba de chi-cuadrado para variables categóricas. La influencia de la PAI en el recuento bacteriano fecal a los 7 y 30 días de vida se evalúa mediante la prueba U de Mann-Whitney para muestras independientes. Se realiza un análisis de regresión múltiple jerárquico para estimar el efecto de la IAP en el recuento de bacterias fecales después de controlar el tipo de alimentación infantil (codificada como una variable categórica binaria: lactancia materna exclusiva frente a cualquier alimentación con fórmula). un valor p