产时抗生素预防 (IAP) 对新生儿肠道菌群发育的影响。 (MICROBIOTA-SO)

出生时，新生儿胃肠道 (GI) 迅速被母体和环境细菌定殖；第一批定殖者通常是需氧菌和兼性厌氧菌，然后是严格厌氧菌（例如 双歧杆菌属、拟杆菌属和梭菌属）。 肠道微生物群的组成受多种因素的影响，例如分娩方式、胎龄、母体肠道和阴道微生物群、喂养方式、出生后住院以及抗生素和益生菌的使用。

阴道分娩和纯母乳喂养的足月婴儿的肠道微生物群被认为是理想的健康状态，艰难梭菌和大肠杆菌数量较少，双歧杆菌和乳酸杆菌数量较多，它们通过激活免疫活性细胞对宿主的健康产生积极影响在胃肠道中，促进分泌型 IgA 的产生，增加中性粒细胞的杀菌活性和细胞介导的免疫，如 NK 细胞活性。

B 族链球菌 (GBS) 是新生儿感染和败血症的最重要原因之一。 阴道分娩的婴儿可能在分娩过程中从母体阴道、子宫颈或直肠获得 GBS，大约 10-20% 的孕妇会感染 GBS。 自 90 年代中期以来，早发性 GBS 败血症的发病率显着降低，这是由于在妊娠晚期引入 GBS 普遍筛查以及随后对 GBS 阳性女性进行产时抗生素预防 (IAP)。

最近的数据表明，生命早期使用抗生素可能会改变肠道共生菌群，从而破坏生命后期健康与疾病之间的平衡。 IAP 对婴儿肠道细菌定植的影响尚未得到广泛研究。 此外，目前关于这个问题的可用数据主要来自使用基于培养的技术进行的研究；然而，准确的基于培养的结果受选择正确的培养基、温度、氧气含量和生长时间的影响，因此只有 10-50% 的整个肠道细菌很容易培养。 最近开发了基于 16S 核糖体细菌 RNA 基因扩增以区分原核生物分类群的分子技术，用于肠道微生物群的研究，从而能够比标准培养更详细地描述细菌群落。

我们之前已经评估了 IAP 对通过分子技术阴道分娩的纯母乳喂养足月婴儿样本的影响；在出生后 7 天，暴露于 IAP 和未暴露的婴儿之间的微生物群组成存在一些差异。

因此，本文的目的是进一步详细评估这些差异，扩大初始样本并对婴儿进行随访直至一个月大。 还探讨了喂养类型对微生物群组成的影响。

健康的足月婴儿、阴道分娩、出生体重适合胎龄，并且其母亲在妊娠 35-37 周时接受过 GBS 筛查，被纳入研究。

婴儿被排除在外，如果：

• 早产或小于/大于胎龄儿
• 剖腹产出生的
• 母亲在分娩前 4 周内接受过任何抗生素；
• 母体 IAP 是出于 GBS 阳性以外的原因（即 GBS 阴性女性的胎膜早破时间延长）；
• 产妇 IAP 不足；
• 母体 IAP 是用氨苄西林以外的抗生素进行的，例如红霉素；
• 婴儿有严重先天畸形；
• 婴儿出现感染迹象和/或出生后接受任何抗生素治疗；
• 婴儿有任何严重的临床状况，这表明他/她不能参加研究。

根据母体 GBS 状态和 IAP，婴儿被分为两组：

• IAP 组：已接受足够 IAP 的 GBS 阳性母亲所生的婴儿。 根据 GBS 预防的机构治疗方案（源自 CDC 指南），每 4 小时静脉注射氨苄西林直至分娩（首剂 2 g，后续剂量各 1 g）。 如果母亲在分娩前接受了至少两剂氨苄青霉素，则认为 IAP 就足够了。
• 对照组：GBS 阴性母亲所生的婴儿，在分娩前/分娩时未接受任何抗生素治疗。

当婴儿即将离开托儿所（出生 48-72 小时）时，从每个婴儿的父母/法定监护人处获得书面知情同意书。 患者的特征，包括胎龄、出生体重、性别和出生后 1' 和 5' 时的 Apgar 评分，在特定的病例报告表中进行了总结。

在出生后 7 天和 30 天的随访期间，从每个婴儿身上收集两个粪便样本。 每次就诊时，提供有关体重增加、临床状况、喂养和正在进行的治疗（即 使用益生元、益生菌、抗生素）是从婴儿的父母那里收集的。

收集后，将粪便样本放入带编号的螺帽无菌塑料容器中，并立即冷冻在 -80 °C 下，直到进行细菌 DNA 提取处理。

微生物分析在博洛尼亚大学农业科学系进行。 执行分析的调查人员不知道婴儿的群体身份（IAP 或对照组）。

使用 QIAamp DNA Stool Mini Kit（QIAGEN，West Sussex，UK）使用 200 毫克粪便提取细菌 DNA。 提取的 DNA 储存在-80°C。 提取的 DNA 的纯度和浓度通过测量 260 和 280 nm 处的吸光度比来确定（Infinite® 200 PRO NanoQuant，Tecan，Mannedorf，Switzerland）。

使用实时 PCR 对选定的微生物群（乳杆菌属、双歧杆菌属、脆弱拟杆菌）进行定量。 从扩增中获得的数据被转换以获得每克粪便中的细菌细胞数，表示为对数菌落形成单位 (CFU)/g。

使用 IBM SPSS Statistic 20.0.0 版（IBM Corporation，IBM Corporation Armonk，纽约，美国）分析获得的数据。 IAP 和对照组的基线特征使用连续变量的独立样本 Mann-Whitney U 检验和分类变量的卡方检验进行比较。 使用独立样本 Mann-Whitney U 检验评估 IAP 对 7 天和 30 天粪便细菌计数的影响。 进行分层多元回归分析以估计 IAP 在控制婴儿喂养类型后对粪便细菌计数的影响（编码为二元分类变量：纯母乳喂养与任何配方奶喂养）。 p值