분만 중 항생제 예방법(IAP)이 신생아 장내미생물총 발달에 미치는 영향. (MICROBIOTA-SO)

출생 시 신생아 위장관(GI)은 산모 및 환경 박테리아에 의해 빠르게 집락화됩니다. 첫 번째 식민자는 일반적으로 호기성 균과 통성 혐기성 균이며, 엄격한 혐기성 균(예: Bifidobacterium spp., Bacteroides spp. 및 Clostridium spp.). 장내 미생물총의 구성은 분만 방식, 재태 연령, 산모 장내 미생물군, 수유 유형, 출산 후 입원, 항생제 및 프로바이오틱스 사용과 같은 여러 요인의 영향을 받습니다.

자연 분만하고 전적으로 모유 수유를 받는 만삭아의 장내 미생물군은 C. difficile 및 E. coli의 수가 적고 Bidifobacteria 및 Lactobacilli의 수가 많아 이상적으로 건강한 것으로 간주되며 면역적격 세포를 활성화하여 숙주의 건강에 긍정적인 영향을 미칩니다. 위장관에서 분비성 IgA의 생산을 촉진하고 호중구의 살균 활성과 NK 세포 활성과 같은 세포 매개 면역을 증가시킵니다.

그룹 B 연쇄상구균(GBS)은 신생아 감염 및 패혈증의 가장 중요한 원인 중 하나입니다. 자연분만 영아는 산모의 질, 자궁경부 또는 직장에서 분만 과정 중에 GBS에 걸릴 수 있으며, 임산부의 약 10-20%에서 GBS가 존재합니다. 90년대 중반 이후 조기 발병 GBS 패혈증의 발생률은 임신 후기에 GBS 종합 선별검사를 도입하고 그에 따른 GBS 양성 여성의 분만 중 항생제 예방법(IAP)으로 인해 크게 감소했습니다.

최근 데이터에 따르면 생애 초기에 항생제를 사용하면 공생 장내 미생물군이 변경되어 나중에 건강과 질병 사이의 균형이 손상될 수 있습니다. 영아 장의 세균 집락화에 대한 IAP의 영향은 크게 조사되지 않았습니다. 더욱이, 이 문제에 대해 현재 이용 가능한 데이터는 주로 문화 기반 기술을 사용하여 수행된 연구에서 파생됩니다. 그러나 정확한 배양 기반 결과는 올바른 배지, 온도, 산소 함량 및 성장 시간의 선택에 의해 영향을 받으며, 이러한 이유로 전체 장내 세균의 10-50%만이 쉽게 배양됩니다. 원핵생물 분류군을 구별하기 위해 16S 리보솜 박테리아 RNA 유전자의 증폭을 기반으로 하는 분자 기술은 최근 장내 미생물 연구를 위해 개발되어 표준 배양보다 박테리아 군집의 더 상세한 특성화를 가능하게 합니다.

우리는 이전에 분자 기술을 통해 질식으로 분만된 완전 모유 수유 영아의 상대적으로 작은 샘플에서 IAP의 효과를 평가했습니다. 생후 7일째에 IAP에 노출된 영아와 노출되지 않은 영아 사이의 미생물 구성에 몇 가지 차이가 ​​있었습니다.

따라서 본 논문의 목적은 이러한 차이점을 더 자세히 평가하고 초기 샘플을 확장하고 생후 1개월까지 영아를 추적하는 것입니다. 미생물 구성에 대한 먹이 유형의 영향도 탐구됩니다.

질식으로 분만하고 재태 주령에 적합한 출생 체중을 갖고 산모가 임신 35-37주에 GBS 검사를 받은 건강한 만삭 영아를 연구에 등록합니다.

다음과 같은 경우 유아는 제외됩니다.

• 재태 연령에 비해 조산 또는 소형/대형
• 제왕절개로 태어난
• 산모가 분만 전 4주 동안 항생제를 투여받았습니다.
• 모성 IAP는 GBS 양성 이외의 이유로 수행됩니다(즉, GBS-음성 여성의 장기간 양막 파열);
• 모성 IAP가 부적절합니다.
• 산모 IAP는 에리스로마이신과 같은 암피실린 이외의 항생제로 수행됩니다.
• 영아는 중대한 선천성 기형을 가지고 있습니다.
• 영아가 감염 징후가 나타나거나 출생 후 항생제 치료를 받은 경우
• 영아는 연구 참여를 금하는 심각한 임상 상태를 가지고 있습니다.

유아는 산모의 GBS 상태와 IAP에 따라 두 그룹으로 나뉩니다.

• IAP 그룹: 적절한 IAP를 받은 GBS 양성 어머니에게서 태어난 영아. GBS 예방을 위한 기관 치료 프로토콜(CDC 지침에서 파생됨)에 따르면, iv 암피실린은 분만까지 4시간마다 제공됩니다(첫 번째 용량 2g, 다음 용량 각각 1g). IAP는 산모가 분만 전에 최소 2회 용량의 암피실린을 투여받은 경우 적절한 것으로 간주됩니다.
• 대조군: GBS 음성 산모에게서 태어나 분만 전/시에 항생제 치료를 받지 않은 영아.

유아가 보육원에서 퇴원할 때(생후 48-72시간) 각 유아의 부모/법적 보호자로부터 서면 동의서를 받습니다. 임신 주수, 출생 체중, 성별, 출생 후 1' 및 5'의 Apgar 점수를 포함한 환자의 특성을 특정 증례 보고서 형식으로 요약합니다.

생후 7일 및 30일에 후속 방문 중에 각 영아의 대변 샘플 2개를 수집합니다. 방문할 때마다 체중 증가, 임상 상태, 수유 및 진행 중인 치료(예: 프리바이오틱스, 프로바이오틱스, 항생제 사용)은 유아의 부모로부터 수집됩니다.

수집 후 대변 샘플을 번호가 매겨진 스크류 캡 멸균 플라스틱 용기에 넣고 박테리아 DNA 추출을 위해 처리될 때까지 즉시 -80°C에서 동결합니다.

미생물 분석은 볼로냐 대학교 농업 과학부에서 수행됩니다. 분석을 수행하는 조사관은 영아의 집단 정체성(IAP 또는 통제 집단)을 보지 못합니다.

QIAamp DNA Stool Mini Kit(QIAGEN, West Sussex, UK)를 사용하여 박테리아 DNA 추출에 200mg의 대변을 사용합니다. 추출된 DNA는 -80°C에 보관됩니다. 추출된 DNA의 순도와 농도는 260 nm와 280 nm에서 흡광도의 비율을 측정하여 결정됩니다(Infinite® 200 PRO NanoQuant, Tecan, Mannedorf, Switzerland).

선택된 미생물 그룹(Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Bacteroides fragilis)의 정량화는 실시간 PCR로 수행됩니다. 증폭에서 얻은 데이터를 변환하여 로그 콜로니 형성 단위(CFU)/g로 표현되는 배설물 그램당 박테리아 세포 수를 얻습니다.

얻어진 데이터는 IBM SPSS Statistic 버전 20.0.0(IBM Corporation, IBM Corporation Armonk, New York, United States)을 사용하여 분석하였다. IAP 및 대조군의 기준선 특성은 연속 변수에 대한 독립 샘플 Mann-Whitney U 검정과 범주형 변수에 대한 카이제곱 검정을 사용하여 비교됩니다. 생후 7일 및 30일에 배설물 세균 수에 대한 IAP의 영향은 독립 샘플 Mann-Whitney U 테스트를 사용하여 평가됩니다. 유아 수유 유형을 통제한 후 분변 세균 수에 대한 IAP의 효과를 추정하기 위해 계층적 다중 회귀 분석을 수행했습니다(이진 범주 변수로 코딩됨: 완전 모유 수유 대 모든 분유 수유). p 값