潰瘍性大腸炎における腸内細菌叢の調節におけるゴリムマブの効果 (GOLI2015)

潰瘍性大腸炎における腸内細菌叢の調節におけるゴリムマブの効果。 パイロット研究。

1. 最近、宿主の免疫応答を調節および指示する腸内微生物叢の能力が、消化器疾患における健康と病気の間の微妙なバランスを調節する極めて重要な要因の1つであると考えられていることを、一貫した証拠が示しています。 炎症性腸疾患 (IBD) の場合、腸内微生物叢は、患者の微生物学的恒常性を維持する上で中心的な役割を果たします。 最近の研究では、IBD患者と健康な個人の腸内微生物叢の異なるパターンの存在が説明されています。 疾患に関連しない微生物学的パターンの変化は腸内細菌叢として知られており、腸粘膜の炎症の程度に直接関係しているため、臨床状態に直接関係しています。腸内細菌叢は、結腸の炎症状態の直接的なマーカーです。

腸内細菌叢の状態は、結腸内の総細菌数のさまざまな微生物学的指標によって測定されます。 これらの指標の割合の変化は、患者の腸内微生物叢を特徴付けるために測定されるパラメーターです。 潰瘍性大腸炎 (UC) の場合、腸内微生物叢が深い寛解と再燃の存在との間のバランスを維持する上で中心的な要因であることが研究で示されています。 進歩にもかかわらず、腸内微生物叢が腸粘膜とどのように相互作用し、腸バリアを変化させるか、および分子/遺伝的メカニズムについての詳細な知識はまだわかっていません。 いくつかの遺伝子と関連する補因子が特定されていますが、相互作用の正確なメカニズムはまだ説明されていません。 データは、おそらく、調節のメカニズムが多因子プロセスであることを示しています。

このように、腸内微生物叢と宿主および結腸との相互作用の深い理解は、IBD 治療、特に UC の未来を形作るために非常に興味深いものになるでしょう。 したがって、IBD 患者の腸内細菌叢は、それ自体が治療の標的 (糞便移植) であるか、免疫調節剤を含む調整可能なアジュバントと見なされる可能性があります。病気の自然な呪い。 しかし、これらの薬が腸内細菌叢をどのように調節し、どのように干渉するかはまだ不明ですが、おそらく役割を果たします. 私たちのグループによる研究からの最近の結果は、臨床的寛解に入ると、腸内微生物叢が異常症との関連性が低いパターンに変更されることを示しています。 抗TNF薬の使用の重要性が増していることを考えると、dysbiosisに関連するパターンと健康な粘膜に関連するパターンを区別し、抗TNF薬の使用の結果としてそれらがどのように変化するかを区別することは非常に興味深い. このように、アダリムマブ抗TNF薬治療に関連する腸内微生物叢の変化を分析した私たちのグループの以前の結果は、患者の寛解への進行中に、粘膜の共生パターンが変化することを示しています。 一方、私たちのグループは、薬物治療が失敗した後、腸内微生物叢がディスバイオシスに近いパターンに戻ることも観察しました。 そのため、腸内微生物叢は、患者における実際の薬の有効性の優れた指標と見なすことができます.

UC で最近導入された抗 TNF 薬物療法であるゴリムマブに関しては、ゴリムマブとこの現象との関係に関する利用可能な研究が現在までにないため、腸内微生物叢を寛解関連パターンに調節する方法はまだ不明です。

プレバイオティクスとプロバイオティクスの使用は、UC の治療におけるアジュバントとしてある程度の有効性を示しています。 そのため、腸内微生物叢パターンのさらなる特徴付けは、特に抗 TNF 薬を投与されていて完全な寛解を達成していない患者において、それを調節するアジュバント能力のための新しい戦略を開発するために非常に重要です。 最近の研究と同様に、腸内微生物叢の調節がゴリムマブで治療された患者の反応結果を最適化できることを示唆しています。

結論として、文献の現在の傾向に基づいて、腸内微生物叢の調節と寛解関連パターンの特徴付けは、UC 患者の管理に大きな影響を与えることを示唆しています。 さらに、腸内微生物叢の調節と抗 TNF 薬の有効性は、炎症性腸疾患の管理において最も有望な分野である可能性があります。

2. 仮説と目的 2.1 仮説

1. 腸内細菌叢のプロファイルは、UC 活動に応じて変化します。
2. 臨床的寛解と相関する腸内細菌叢のプロファイルは、安定した腸内細菌叢の生物多様性によって表されます。
3. 腸内細菌叢が、抗 TNF 治療を受けていない患者および抗 TNF 治療を再発した患者におけるゴリムマブの有効性を測定するための有用なツールであるかどうかを評価します。

2.2 目的

1. ゴリムマブ治療下での臨床的寛解と正常な腸内細菌叢プロファイルの生物多様性とを関連付ける
2. ゴリムマブの使用に関連する腸内微生物叢のパターンと微生物変化の時間的ダイナミクスを特徴付ける。
3. ゴリムマブ未治療の潰瘍性大腸炎の治療において、疝痛障害の程度に対するゴリムマブの効果を評価します。

3. 材料および方法 3.1 研究/デザインの種類 多施設横断パイロット 研究 3.2 研究集団 提案された研究には、Hospital Universitari Dr. Josep Trueta からの 15 人の UC 抗 TNF ナイーブ患者が含まれます。 治験責任医師は、患者の内視鏡メイヨースコアが1以下で、活動指数スコアがメイヨー= 0ポイントの場合、寛解を考慮します。

3.3 介入 注記: 「特定の治療戦略への患者の割り当ては、研究プロトコルによって事前に決定されるのではなく、臨床実践によって決定されます。 さらに、特定の薬を処方するという決定は、その患者を研究に含めるという決定とは明らかに無関係です。 患者は、診断であろうとモニタリングであろうと、通常の臨床診療以外の介入を受けることはなく、収集されたデータの分析には疫学的方法が使用されます。」

3.3.1 治療 0 週目に 200mg、2 週目に 100mg の GOLIMUMAB 誘導。 80kg未満は50mg/月、80kg以上は100mg/月のフォローアップ治療を臨床的に行います。

3.4 変数 3.4.1 人口学的変数

• 年齢 (y)
• 性別 男性(M)/女性(F)
• ボディ・マス・インデックス
• 民族: コーカサス人/アフリカ人/アジア人/アメリカ人
• タバコ: はい / いいえ / 元喫煙者
• 年で表されるUC診断の年齢（y）
• おなじみの前例 (はい/いいえ) どのような病気?
• ローカリゼーション 左 (L)/右 (R)/拡張 (E) 3.4.2 臨床変数
• メイヨー クリニック スコア (Clinical colitis activity index) (Schroeder KW et al. NEngl J Med 1987; 317: 1625-9)。 スコア範囲: 0 ～ 9 ポイント
• CRP（C反応性タンパク）：血中C反応性タンパク濃度（mg/L）
• 糞便カルプロテクチン: g の糞に対する ug 単位のカルプロテクチンの濃度で表される糞便サンプル (ug/g)
• 標準分析:

ヘモグロビン：血中ヘモグロビン濃度（g/dl） 血小板：血中血小板濃度（x103/ul） 白血球：血中白血球濃度（x103/ul） アルブミン：血中アルブミン濃度（g/dl） クレアチニン値：血中クレアチニン濃度（mg/dl） ) 3.4.3 内視鏡変数 • Mayo (潰瘍性大腸炎の内視鏡スコア) (Schroeder KW et al. 1987)。 Mayo Endoscopic Sc​​ore は、内視鏡所見のみに基づいています。 Mayo スコアの範囲は 0 ～ 3 です。

o 注: 調査員は画像を一元化されたデジタル プラットフォームに送信します。このプラットフォームでは、観察者間のバイアスを最小限に抑えるために、Mayo スコアが 2 人の独立した専門家によって評価されます。

3.4.4 微生物学的変数

• 運用分類単位 (OTU)
• 豊富さと細菌負荷。 3.5 方法 提案された研究には、臨床診療に従って抗 TNF による治療を受けている、インフォームド コンセントに署名した 18 歳以上の 15 人の UC 患者が含まれます。 それらのすべては、日和見感染症についてスクリーニングされます。 患者は抗 TNF ナイーブ患者になります。

糞便サンプルは、抗 TNF 治療 (A) を開始する前に収集され、4 (B)、9 (C)、13 (D)、26 (E)、39 (F)、および 52 (G) 週に完了します。研究。 モニタリング期間は 1 年間とする。 調査員は、人口統計学的変数 (年齢、性別、タバコ、診断年齢、ローカリゼーションなど)、臨床データ (部分 Mayo 臨床スコア、CRP、アルブミン、ヘモグロビン、クレアチニン、白血球、血小板など)、および微生物学的変数を A、B で収集します。 、C、D、E、F、および G。また、7 カルプロテクチン サンプリング (週 4 (B)、9 (C)、13 (D)、26 (E)、39 (F)、および 52 (G) で)臨床診療）およびメイヨー内視鏡指数（ベースライン時および臨床診療としてのモニタリング期間の終了時）。 フォローアップの訪問も、通常の臨床診療の範囲内で行われます。 患者の経過をよりよく追跡するために、治験責任医師は、抗 TNF 治療開始後 12 週目に直腸 S 状結腸鏡検査として通常の臨床診療に含まれる追加の検査を実施します。

治験責任医師は、患者の内視鏡 Mayo スコアが 1 以下で、活動指数スコア、Mayo 臨床スコア = 0 ポイントの場合、寛解を考慮します。

さらに、患者の経過に応じて、モニタリング期間中の定期的な臨床プロトコルとして追加の検査も実施されます。

注: 研究および/または追加のテスト中に実行されるテストは、医師の臨床判断と基準に従って日常的な臨床診療です。

3.5.1 サンプル処理

DNA抽出:

微生物学的分析の前に、16s RNA 遺伝子のゲノム DNA を NucleoSpin® Soil Kit (Machery-Nagel GmbH & Co.、ドイツ) を使用して抽出します。 DNA 濃度は、Qubit® BR (Invitrogen) Kit を使用して決定されます。

パイロシーケンシングによるバクテリア 16S rRNA 遺伝子の増幅 パイロシーケンシングの目的で、抽出したゲノム DNA から 16S rRNA 遺伝子を部分的に増幅しました。 5'-CCG TCA ATT CCT TTG AGT TT-3' (907Y926)。 ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）２７００（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。その後、キット Ampure (Agencourt AMPure、Beckman Coulter Inc) を使用して PCR 産物を精製し、Qubit® BR (Invitrogen) Kit を使用して PCR 産物を定量化します。 パイロシーケンシングは、454 Life Genome Sciences Sequencer FLX で実行されます。

シーケンスの編集と分析 高品質のコンセンサス シーケンスが取得され、Bioedit ソフトウェア パッケージを使用して手動で調整されます。 ClustalW24ソフトウェアを使用してアライメントを実行しました。 コンセンサス配列は、BLASTN 2.2.10 を使用して、GenBank およびリボソーム データベース プロジェクトのものと比較されました。 シーケンスは、DOTUR プログラム 26 を使用して、0.01 の精度レベルで最遠隣法を使用して運用分類単位またはファイロタイプの数によってグループ化されます。 Phylip ソフトウェア パッケージの DNADIST プログラムで計算された Jukes-Cantor 補正を使用します。

3.6 統計分析 統計分析は、SPSSx バージョン 11.0 で実行されます。 グループ間の距離の有意性は、分散分析を使用してチェックされました。 Pearson_s x2 検定を使用して、属と種の有病率を比較しました。

臨床および検査データは、受信者操作特性 (ROC) 曲線を使用して、定量的な微生物指数の値と関連付けられます。