궤양성 대장염에서 장내 미생물총의 조절에 대한 Golimumab 효과 (GOLI2015)

궤양성 대장염에서 장내 미생물의 조절에 대한 골리무맙 효과. 파일럿 연구.

1. 배경 최근에, 숙주의 면역 반응을 조절하고 지시하는 장내 미생물총의 능력이 소화기 질환에서 건강과 질병 사이의 섬세한 균형을 조절하는 중추적 요인 중 하나로 간주된다는 일관된 증거가 있습니다. 염증성 장질환(IBD)의 경우, 장내 미생물군은 환자의 미생물학적 항상성을 유지하는 데 중심적인 역할을 합니다. 최근 연구에서는 IBD 환자와 건강한 개인의 장내 미생물총 패턴이 서로 다르다고 설명합니다. 질병과 관련되지 않은 미생물학적 패턴의 변경은 장내세균불균형으로 알려져 있으며 장 점막의 염증 정도와 직접적으로 관련이 있으므로 임상 상태: 더 큰 장세균불균형, 질병 상태와의 더 큰 임상적 상관관계 장내 미생물총은 결장 염증 상태의 직접적인 지표입니다.

장내세균불균형 상태는 결장 내 총 박테리아 집단의 다양한 미생물학적 지표를 통해 측정됩니다. 이러한 지수의 비율 변화는 환자의 장내 미생물을 특성화하기 위해 측정되는 매개변수입니다. 궤양성 대장염(UC) 연구의 경우 장내 미생물군이 깊은 관해와 재발의 존재 사이의 균형을 유지하는 데 핵심적인 요소인 것으로 나타났습니다. 발전에도 불구하고 장내 미생물이 장 점막과 어떻게 상호 작용하고 장 장벽과 분자/유전적 메커니즘을 변경하는지에 대한 심층적인 지식은 아직 알려지지 않았습니다. 일부 유전자 및 관련 보조 인자가 확인되었지만 상호 작용의 정확한 메커니즘은 아직 설명되지 않았습니다. 데이터는 아마도 규제 메커니즘이 다단계 프로세스임을 나타냅니다.

이러한 방식으로 IBD 치료, 특히 UC 치료의 미래를 형성하기 위해 장내 미생물군과 숙주 및 결장과의 상호 작용에 대한 깊은 이해가 큰 관심사가 될 것입니다. 따라서, IBD 환자의 장내 미생물군은 그 자체가 치료 표적(대변 이식)이거나 면역 조절제와 함께 조정 가능한 보조제로 간주될 수 있습니다. 질병의 자연 저주. 그러나 이러한 약물이 장내 미생물군을 어떻게 조절하고 어떻게 방해하는지에 대해서는 아직 알려지지 않았습니다. 우리 그룹의 최근 연구 결과에 따르면 임상적 관해에 진입하면 장내 미생물총이 세균불균형과 덜 관련이 있는 패턴으로 수정됩니다. 항TNF 약물 사용의 중요성이 증가함에 따라 세균불균형과 관련된 패턴과 건강한 점막과 관련된 패턴을 구별하고 항TNF 약물 사용의 결과로 어떻게 변형되는지를 구별하는 것이 매우 중요합니다. 이러한 방식으로, Adalimumab 항-TNF 약물 치료와 관련된 장내 미생물의 변화를 분석한 우리 그룹의 이전 결과는 환자가 완화로 진행되는 동안 점막 세균불균형 패턴이 변한다는 것을 보여주었습니다. 한편, 우리 그룹은 약물 치료 실패 후 장내 미생물군이 장내세균불균형에 가까운 패턴으로 되돌아가는 것을 관찰했습니다. 이러한 이유로 장내 미생물군은 환자의 실제 약물 효과에 대한 훌륭한 지표로 간주될 수 있습니다.

UC에서 최근 도입된 항-TNF 약물 요법인 Golimumab과 관련하여, 현재까지 Golimumab과 이 현상 사이의 관계에 대한 이용 가능한 연구가 없기 때문에 장내 미생물군을 완화 관련 패턴으로 조절할 수 있는 방법은 아직 알려지지 않았습니다.

프리바이오틱스와 프로바이오틱스의 사용은 궤양성대장염 치료에서 보조제로서 어느 정도 효과가 있는 것으로 나타났습니다. 이러한 이유로, 특히 항-TNF 약물을 투여받고 완전한 관해를 달성하지 못하는 환자에서 이를 조절하는 보조제 능력을 위한 새로운 전략을 개발하기 위해서는 장내 미생물군 패턴의 추가 특성화가 매우 중요합니다. 최근 연구와 유사하게 우리는 장내 미생물의 조절이 골리무맙으로 치료받은 환자의 반응 결과를 최적화할 수 있다고 제안합니다.

결론적으로, 문헌의 현재 경향에 기초하여 우리는 장내 미생물의 조절과 관해 관련 패턴의 특성화가 UC 환자 관리에 큰 영향을 미칠 것이라고 제안합니다. 또한 항TNF 약물 효과와 함께 장내 미생물의 조절은 염증성 장 질환 관리에서 가장 유망한 분야가 될 수 있습니다.

2. 가설과 목적 2.1 가설

1. UC 활동에 따른 장내 미생물군 프로파일 변화.
2. 임상적 완화와 관련된 장내 미생물군 프로파일은 안정적인 장내 미생물군 생물다양성으로 나타납니다.
3. 장내 미생물총이 항-TNF 치료에 순진한 환자와 항-TNF 치료에 재발하는 환자에서 Golimumab 효과를 측정하는 데 유용한 도구인지 평가합니다.

2.2 목표

1. Golimumab 치료 하의 임상적 완화와 정상적인 장내 미생물 프로필 생물다양성을 연관시키기 위해
2. Golimumab의 사용과 관련된 장내 미생물의 패턴과 미생물 변화의 시간적 역학을 특성화합니다.
3. Golimumab에 순진한 궤양성 대장염 치료에서 colic dysbiosis 정도에 대한 golimumab의 효과를 평가합니다.

3. 재료 및 방법 3.1 연구/설계 유형 다기관 횡단 파일럿 연구 3.2 연구 모집단 제안된 연구에는 Hospital Universitari Dr. Josep Trueta의 15명의 UC 항TNF 순진 환자가 포함됩니다. 조사관은 환자가 내시경 Mayo 점수 ≤1이고 활동 지수 점수인 Mayo=0점일 때 관해를 고려할 것입니다.

3.3 개입 참고: "특정 치료 전략에 환자를 할당하는 것은 임상 실습 대신 연구 프로토콜에 의해 미리 결정되지 않습니다. 또한 특정 약물을 처방하기로 한 결정은 환자를 연구에 포함하기로 한 결정과 명확하게 연결되지 않습니다. 환자는 일반적인 임상 실습 외에 진단이든 모니터링이든 어떠한 개입도 받지 않으며, 수집된 데이터의 분석을 위해 역학적 방법을 사용해야 합니다."

3.3.1 치료 0주차에 200mg, 2주차에 100mg으로 GOLIMUMAB 유도. 80kg 미만은 임상에서 50mg/월, 80kg 이상은 100mg/월로 후속 치료를 진행한다.

3.4 변수 3.4.1 인구 통계 변수

• 년으로 표현된 나이(y)
• 성별 남(M)/ 여(F)
• 체질량 지수
• 인종: 백인/아프리카인/아시아인/미국인
• 담배: 예 / 아니오 / 전-흡연자
• 년으로 표현된 UC 진단 연령(y)
• 익숙한 선례(YES/NO) 어떤 질병인가요?
• 현지화 왼쪽(L)/오른쪽(R)/확장(E) 3.4.2 임상 변수
• 메이요 클리닉 점수(Clinical colitis activity index)(Schroeder KW et al. NEngl J Med 1987; 317: 1625-9). 점수 범위: 0-9점
• CRP(C-reactive protein): 혈중 C-reactive protein 농도(mg/L)
• 대변 ​​칼프로텍틴: 대변 g(ug/g)에 대한 칼프로텍틴 농도(ug)로 표현된 대변 샘플
• 표준 분석:

헤모글로빈: 혈중 헤모글로빈 농도(g/dl) 혈소판: 혈소판 농도(x103/ul) 백혈구: 혈중 백혈구 농도(x103/ul) 알부민: 혈중 알부민 농도(g/dl) 크레아티닌 수치: 혈중 크레아티닌 농도(mg/dl ) 3.4.3 내시경 변수 • Mayo(궤양성 대장염의 내시경 점수)(Schroeder KW et al. 1987). Mayo Endoscopic Score는 내시경 소견만을 기반으로 합니다. 메이요 점수 범위는 0에서 3까지입니다.

o 참고: 조사관은 관찰자 간 편향을 최소화하기 위해 2명의 독립적인 전문가가 Mayo 점수를 평가하는 중앙 집중식 디지털 플랫폼으로 이미지를 보냅니다.

3.4.4 미생물학적 변수

• 운영 분류 단위(OTU)
• 풍부함과 박테리아 부하. 3.5 방법 제안된 연구에는 임상 실습에 따라 항-TNF 치료를 받고 사전 동의서에 서명한 18세 이상의 15명의 UC 환자가 포함될 것입니다. 그들 모두는 기회 감염에 대해 검사를 받을 것입니다. 환자는 항-TNF 나이브 환자일 것이다.

대변 ​​샘플은 항-TNF 치료를 시작하기 전(A), 완료하기 위해 4(B), 9(C), 13(D), 26(E), 39(F) 및 52(G)주에 수집됩니다. 연구. 모니터링 기간은 1년입니다. 조사관은 A, B에서 인구통계학적 변수(연령, 성별, 담배, 진단 연령, 국소화 등), 임상 데이터(부분 Mayo 임상 점수, CRP, 알부민, 헤모글로빈, 크레아티닌, 백혈구, 혈소판 등) 및 미생물학적 변수를 수집합니다. , C, D, E, F 및 G. 또한, 7개의 칼프로텍틴 샘플링(4(B), 9(C), 13(D), 26(E), 39(F) 및 52(G) 주에 임상 실습) 및 Mayo 내시경 지수(임상 실습으로서 기준선 및 모니터링 기간 종료 시). 후속 방문은 또한 일상적인 임상 실습 내에서 이루어질 것입니다. 환자의 경과를 더 잘 추적하기 위해 조사관은 항-TNF 치료를 시작한 후 12주차에 직장 구불 결장경 검사와 같은 일상적인 임상 실습에 포함된 추가 검사를 수행할 것입니다.

조사관은 환자가 내시경 Mayo 점수 ≤1이고 활동 지수 점수, Mayo 임상 점수 =0점인 경우 관해를 고려할 것입니다.

또한 환자의 경과에 따라 모니터링 기간 동안 일상적인 임상 프로토콜로 추가 테스트도 수행됩니다.

참고: 연구 및/또는 추가 테스트 중에 수행된 모든 테스트는 의사의 임상적 판단 및 기준에 따른 일상적인 임상 실습입니다.

3.5.1 샘플 처리

DNA 추출:

미생물 분석에 앞서 NucleoSpin® Soil Kit(Machery-Nagel GmbH & Co., Germany)를 사용하여 16s RNA 유전자의 genomic DNA를 추출합니다. DNA 농도는 Qubit® BR(Invitrogen) 키트로 결정됩니다.

파이로시퀀싱에 의한 박테리아 16S rRNA 유전자 증폭 파이로시퀀싱 목적을 위해, 범용 박테리아 프라이머 GC-357F 5'-CGCCCG CCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCC-CCT ACG GGA GGC AGC AG-3'(341Y357) 및 907R을 사용하여 추출된 게놈 DNA에서 16S rRNA 유전자를 부분적으로 증폭했습니다. 5'-CCG TCA ATT CCT TTG AGT TT-3'(907Y926). PCR은 GeneAmp PCR System® 2700(AppliedBiosystems)으로 수행되었습니다. 그런 다음 키트 Ampure(Agencourt AMPure, Beckman Coulter Inc)로 PCR 제품을 정제하고 Qubit® BR(Invitrogen) 키트로 PCR 제품을 정량화합니다. 파이로시퀀싱은 454 Life Genome Sciences Sequencer FLX로 수행됩니다.

시퀀스 편집 및 분석 Bioedit 소프트웨어 패키지를 사용하여 고품질 컨센서스 시퀀스를 얻고 수동으로 정제합니다. 정렬은 ClustalW24 소프트웨어로 수행되었습니다. BLASTN 2.2.10을 사용하여 GenBank 및 Ribosomal Database Project의 컨센서스 시퀀스와 비교했습니다. 서열은 0.01의 정밀도 수준에서 가장 먼 이웃 방법을 사용하는 DOTUR 프로그램26을 사용하여 운영 분류 단위 또는 계통형의 수로 그룹화됩니다. Phylip 소프트웨어 패키지의 DNADIST 프로그램으로 계산된 Jukes-Cantor 보정으로.

3.6 통계 분석 통계 분석은 SPSSx 버전 11.0으로 수행됩니다. 분산 분석을 사용하여 그룹 간 거리의 중요성을 확인했습니다. 속과 종의 유병률을 비교하기 위해 Pearson의 x2 테스트를 사용했습니다.

임상 및 실험실 데이터는 ROC(Receiver Operating Characteristic) 곡선을 사용하여 정량적 미생물 지수 값과 상관 관계가 있습니다.