RTカリエスの特徴。

1. 序章

   頭頸部がんは、全悪性腫瘍の 4 ～ 5% を占める、世界で 6 番目に多いがんです。 頭頸部がん (口腔、鼻腔、唾液腺、副鼻腔、咽頭、および喉頭を含む) は、英国で最も多く診断されているがんのトップ 10 の 1 つです。 Cancer Research UK によると、英国では 2013 年に新たに口腔がんと診断された 7591 人がおり、英国で 14 番目に多いがんを表しています。

   放射線療法 (RT) は、大部分の頭頸部がん患者にとって第一選択の治療であり、腫瘍を制御するための局所治療です。 頭頸部がん患者の 50% 以上が、治療が終了するまで 1 週間に 5 日間、2 グレイ (Gy) 単位で放射線療法を受けます (平均累積線量は 55 ～ 77 Gy)。 RT は、腫瘍細胞を破壊する細胞変化を刺激しますが、健康な口腔組織に劇的な影響を与え、この複雑な環境の恒常性を変化させる可能性があります。 RT は、大唾液腺および小唾液腺の恒久的な損傷 (唾液分泌低下、口腔乾燥症)、結合組織および血管組織の変化、特に粘膜および石灰化組織における治癒能力の低下 (粘膜炎) など、広範囲の有害な口腔組織反応の原因です。 、齲蝕病変、放射線骨壊死）。 強度変調放射線治療 (IMRT) として知られる RT 三次元 (3D) コンピュータ断層撮影 (CT) 計画放射線治療の有害な副作用を軽減しようとするために開発されました。

   RT が健康な口腔組織に誘発する急性 (粘膜炎) および遅発性の副作用/後遺症があります。 放射線誘発齲蝕は、最も一般的な晩期合併症ですが、その起源と性質は明らかではありません。 RT 関連の齲蝕は、好酸性細菌に有利な口腔微生物群集組成の変化、唾液分泌低下、口腔衛生不良、食事の変化などの要因の組み合わせの結果として、急速に発症します 。 患者は、最も重症の場合でもほとんどまたはまったく痛みを感じないことがよくあります。 組織学的特徴は、齲蝕の発症と進行が非 RT 関連の齲蝕と類似していることを示していますが、影響を受ける部位は異なります。 実際、RT 関連の齲蝕は、犬歯および切歯の頸唇面/切縁でより頻繁に発生しますが、非 RT 関連の齲蝕は、後歯 (大臼歯および前臼歯) の歯間/咬合領域でより頻繁に発生します。

   また、RT に伴う齲蝕は周方向に急速に進行し、歯の破折につながる可能性があります。 それは、歯の切端の不規則で一般化された侵食に関連して拡散し、進行する、切端面または咬合面への局所的な病変によって特徴付けられます。 さらに、歯の構造内の機械的変化 (弾性係数と剛性の増加) により、切端および咬合領域の摩耗が増加し、歯の完全な破折につながる可能性があります。

   歯の破壊は RT の最も深刻な結果の 1 つであり、3 ～ 5 年で完全な無歯顎になる可能性があります。 RT 患者の歯科管理は困難です。 口腔の健康を維持し、生活の質（QoL）を向上させるためには、学際的なチーム（修復歯科医、歯周病学、歯内療法、歯科衛生士、放射線腫瘍医、腫瘍内科医、口腔外科医）を集める必要があります。 がんサバイバーのほぼ 50% が、口腔乾燥症状に関連する抑うつ、心配、または緊張を報告しています。 したがって、RT の後遺症は、頭頸部がん患者の生活の質に悪影響を及ぼします。

   全体として、一般的な 2 つの副作用 (齲蝕/粘膜炎) の病因と病態生理を特定するためには、RT を受けた患者の歯/口腔内で発生する化学マトリックス成分、タンパク質、および微生物の変化の定量分析が必要です。 ）予防的測定とこの集団の適切な治療ケアと相関させる。 最後に、治療前のベースライン記録を作成し、RT 後および健康な個人と比較するために検証済みの測定値を作成するために、検証済みのインデックスを使用して完全な口頭評価を実行する必要があります。

2. 目的 このプロジェクトの目的は、HNC 患者の生化学的パラメーター、臨床パラメーター、および口腔の健康状態のバイオデータを関連付ける、よく管理され統合された縦断的研究を実施し、放射線療法のさまざまな副作用を調べた以前の研究の限界を克服することです。 HNC 患者 (数の減少、レトロスペクティブ、観察、短期追跡、詳細な臨床評価の欠如、副作用の治療に焦点を当てた)。

   この研究の最初の目的は、IMRT前後のHNC患者の口腔/歯の状態の定量分析を行い、臨床転帰間の関連性を分析することです。

   続いて、タンパク質濃度と分泌速度を分析することにより、IMRT 前後の HNC 患者の唾液腺機能を評価し、これらのタンパク質と臨床転帰との間の関連性を調査します。

   次の目的は、選択されたタンパク質濃度と分泌率と IMRT 後の口腔粘膜炎の結果との間の可能な関連性を判断することです。したがって、最終的な目的は、タンパク質濃度または唾液の分泌率が粘膜炎の存在と重症度の信頼できる予測因子であるかどうかを評価することです。

   帰無仮説 放射線療法前後のHNC患者における唾液の生化学的組成と放射線療法の経口副作用との間に相関関係はありません

3. 材料および方法。 Health Research Authority (IRAS プロジェクト ID:199100) への倫理申請。 研究のすべてのサンプルは、KCL Dental Institute の Guy's Hospital の Special Care Dental Unit および KCL Dental Institute の Dental Clinic から入手します。

サンプルには、唾液、バイオフィルム、粘膜スワブ、齲蝕象牙質および/または歯が含まれます。 サンプル採取により、従来の治療時間に約 10 ～ 20 分追加されます。 すべてのサンプルは、IMRT の前後の 3 時点で頭頸部がんから最大 12 か月の追跡調査で収集されます。

永久歯列を分析するための 18 歳以上の患者と、がん患者の年齢範囲は、遠隔転移を除いて、いずれの病期の男女とも 18 歳以上です。

頭頸部がんのない被験者 年齢と性別が一致しました。 これらの選択基準に従って、次の患者は除外されます 18 歳未満 (非永久歯列)、同意を与えることができない患者 口腔微生物叢が変化する可能性があるため、過去 3 か月間に抗生物質を投与された患者、全身性疾患 (など) の患者シェーグレン症候群）、唾液の流れと宿主の防御機構に影響を与える可能性のある制御されていない全身性疾患の被験者。

サンプル サイズの計算ステートメント 適切な検出力計算に必要なサンプル サイズを決定するために、この研究を開始する前に統計的なアドバイスを得ました。 検出力の計算は、IMRT 前後の頭頸部がん患者の平均タンパク質レベルの比較に基づいていました。 5% の有意水準で検出力 80% の研究 (Chaudhury et al., 2015) では、がん治療前後のすべてのパラメーターの真の差を、効果サイズ 0.5 (Cohen 1988 によると高い) で検出することができます。両側検定では、合計 35 人の患者のサンプルが必要になります

提案された統計分析:

サンプルの特徴やその他の臨床的要因を要約するために、記述統計が使用されます。

すべての分析は、STATA 15.1 (College Station、Texas USA、www.stata.com) を使用して実行されます。 GraphPad Prism 8 ソフトウェア (La Jolla California USA、www.graphpad.com) 正規性を確認した後、Microsoft Excel 2018。 データの正規性は、ヒストグラムとボックス プロットを使用して、すべてのパラメトリック分析についてテストされます。 結果は、変数に対する平均±SEMとして表され、「n」は被験者の数を表し、p <0.05値は統計的に有意であると見なされました。

サンプルコレクション

次のサンプルが収集されます。

• 無刺激の全口唾液 (UWMS)、生理食塩水リンス
• プラークバイオフィルム
• 頬の内側から残った唾液を採取する粘膜スワブ
• 掘削された齲蝕象牙質組織および/または抜去された齲蝕歯。 サンプル採取により、従来の処理時間に 15 分が追加されます。 サンプルは、日内変動を避けるために、歯科医院で定期的に午後 1 時 30 分から午後 3 時 30 分の間に収集されます。

無刺激の全口唾液サンプルコレクション (UWMS)

UWMS サンプルは、事前に計量した 50 mL 滅菌コニカル ポリプロピレン チューブ (Falcon; BD Biosciences、カリフォルニア州サンノゼ) に 10 分間受動的に垂らすことによって得られます。 すべての参加者は、サンプル収集の少なくとも 60 分間は飲食を避けます。 サンプルは氷上で４℃に保たれる。採集後、チューブは再秤量され、正味の唾液量が計算される。 唾液サンプルにラベルを付け、さらに分析するために 80 °C の冷凍庫に保存します。 唾液の流量が計算されます。

Fox ら (Fox et al., 1987) による検証済みのアンケートからの質問と、正常組織/体性客観的管理分析 (LENT/SOMA) 採点システムの晩期障害から抽出された質問に回答する臨床口腔評価口渇および味覚レポート.

世界保健機関 (WHO) の口腔毒性スケールを使用した口腔粘膜炎の等級付け 臨床的に目に見える色の変化からあらゆる表面の暗褐色への変化から口腔内の病変を開くまでの齲蝕病変の歯科的評価。 歯の数/虫歯、欠落、または充填（DMFT）が臨床評価に含まれます。

サンプル分析

UWMS唾液サンプルサンプルは、ビシンコニン酸アッセイ（BCA）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）による標的タンパク質濃度、過ヨウ素酸シッフ（PAS）染色、クーマシーブリリアントブルーおよびα-アミラーゼ活性を使用して、総タンパク質含有量について分析されます。標準的な動的酵素アッセイ (Salimetrics)。

生化学分析の前に、UWMS サンプルを 10000 RPM で 5 分間、4°C で遠心分離します。 上清を分離してタンパク質含有量の分析に使用し、ペレットを保存して DNA 抽出を行いました。

タンパク質分析 (濃度および分泌速度) ムチン 5B ムチン 7、IgA、α-アミラーゼ、アルブミン炭酸脱水酵素 VI、酸性プロリンリッチタンパク質およびスタテリンは、宿主防御、抗菌、細菌付着、コロニー形成、粘膜ペリクル、エナメル皮膜、粘弾性、レオロジー特性、潤滑、および再石灰化。

総タンパク質分泌速度は、唾液流量とタンパク質濃度（ug/min）を掛け合わせることで計算されます（Carpenter et al., 2000）。

ムチン 5B および 7 は、キネティック アッセイによる PAS、α-アミラーゼ、IgA、アルブミン、シスタチン S、プロリン リッチ タンパク質、および UWMS 中のスタテリン濃度によって定量化され、ELISA を使用して決定されます。