RT Cariesin luonnehdinta.

1. Johdanto

   Pään ja kaulan syöpä on kuudenneksi yleisin syöpä maailmassa ja se edustaa 4–5 prosenttia kaikista pahanlaatuisista kasvaimista. Pään ja kaulan syöpä (sisältäen suun, nenäontelon, sylkirauhaset, sivuonteloiden, nielun ja kurkunpään syöpä) on yksi 10 eniten diagnosoidusta syövästä Isossa-Britanniassa. Cancer Research UK:n mukaan vuonna 2013 maassa todettiin 7591 äskettäin suusyöpää, mikä on 14. yleisin syöpä Isossa-Britanniassa.

   Sädehoito (RT) on enemmistön pään ja kaulan syöpäpotilaiden ensisijainen hoitomuoto, joka on paikallinen hoito kasvaimen hallintaan. Yli 50 % pään ja kaulan syöpäpotilaista saa RT-hoitoa 2 Grayn (Gy) osissa päivittäin 5 päivänä viikossa hoitoannoksensa loppuun asti (keskimääräinen kumulatiivinen annos 55-77 Gy). RT stimuloi solumuutoksia, jotka tuhoavat kasvainsoluja, mutta voi vaikuttaa dramaattisesti terveisiin suun kudoksiin muuttaen tämän monimutkaisen ympäristön homeostaasia. RT aiheuttaa monenlaisia ​​haitallisia suun kudosreaktioita, kuten suurien ja pienten sylkirauhasten pysyviä vaurioita (hyposalivaatio, kserostomia), side- ja verisuonikudosten muutokset ja paranemiskyvyn heikkeneminen erityisesti limakalvoissa ja mineralisoituneissa kudoksissa (mukosiitti). , kariesleesio, osteoradionekroosi). RT:n haitallisten sivuvaikutusten vähentämiseksi on kehitetty kolmiulotteisen (3D) tietokonetomografian (CT) suunniteltua sädehoitoa, joka tunnetaan nimellä intensiteettimoduloitu sädehoito (IMRT).

   On olemassa akuutteja (mukosiitti) ja myöhään alkavia haittavaikutuksia/seurauksia, joita RT aiheuttaa terveissä suukudoksissa. Säteilyn aiheuttama karies on yleisin myöhäisvaikutus, mutta sen alkuperä ja luonne eivät ole selvillä. RT:hen liittyvä karies alkaa nopeasti useiden tekijöiden yhdistelmän seurauksena, kuten suun mikrobiyhteisön koostumuksen muutos, joka suosii asidofiilisiä bakteereja, hyposyljeneritys, huono suuhygienia ja ruokavalion muutokset. Potilailla on usein vähän/ei lainkaan kipua, jopa vaikeimmissa tapauksissa. Histologiset piirteet osoittavat, että karieksen puhkeaminen ja kehittyminen on samanlaista kuin ei-RT:hen liittyvien, mutta kohdat, joihin vaikuttaa, ovat erilaisia. Itse asiassa RT:hen liittyvä karies on yleisempää kulmahampaiden ja etuhampaiden kohdunkaulan-labiaalisella pinnalla/inkisaalisella reunalla, kun taas ei-RT:hen liittyvää kariesta esiintyy useammin takahampaiden (poski- ja esihampaiden) interproksimaalisilla/okklusaalisilla alueilla.

   Myös RT:hen liittyvä karies etenee nopeasti ympärysmittaisesti, mikä voi johtaa hampaan murtumaan. Sille on tunnusomaista paikallinen vaurio inkisaali- tai okklusaalipinnoille, jotka diffuusoituvat ja etenevät suhteessa hampaan inkisaalireunan epäsäännölliseen ja yleistyneeseen eroosioon. Lisäksi mekaaniset muutokset (lisääntynyt kimmomoduuli ja jäykkyys) hampaan rakenteessa lisäävät inkisaali- ja purentaalueiden kulumista ja voivat johtaa hampaan täydelliseen murtumiseen.

   Hampaiden tuhoutuminen on yksi RT:n vakavimmista seurauksista ja se voi aiheuttaa täydellisen hampaattomuuden 3–5 vuodessa. RT-potilaiden hammashoito on haastavaa. Suun terveyden ylläpitämiseksi ja elämänlaadun (QoL) parantamiseksi on tarpeen koota monialainen tiimi (restoratiiviset hammaslääkärit, parodontologia, endodontia, suuhygienisti, säteilyonkologit, lääketieteelliset onkologit ja suukirurgit). Lähes 50 % syövästä selviytyneistä ilmoitti masentuneensa, huolestuneensa tai jännittyneensä suun kuivuuden oireisiin. Näin ollen RT-seuraukset vaikuttavat haitallisesti pään ja kaulan syöpäpotilaiden elämänlaatuun.

   Kaiken kaikkiaan RT:n saaneiden potilaiden hampaissa/suuontelossa tapahtuvien kemiallisten matriisikomponenttien, proteiinien ja mikrobimuutosten kvantitatiivinen analyysi on välttämätöntä, jotta voidaan määrittää kahden yleisen sivuvaikutuksen (kariies/mukosiitti) etiologia ja patofysiologia. ) korreloida ennaltaehkäisevän mittauksen ja asianmukaisen hoitohoidon kanssa tälle väestölle. Lopuksi on tarpeen suorittaa täydellinen suullinen arviointi validoitua indeksiä käyttäen, jotta voidaan luoda lähtötasotietue ennen hoitoa ja validoitu mittaus, jota voidaan verrata RT:n jälkeen ja terveiden yksilöiden kanssa.

2. Tavoite Tämän projektin tavoitteena on suorittaa HNC-potilaiden hyvin kontrolloitu ja integroitu pitkittäistutkimus, joka korreloi biokemiallisten parametrien, kliinisten parametrien ja suun terveydentilan biodataa, jotta voidaan voittaa aiempien tutkimusten rajoitukset, joissa tutkittiin sädehoidon erilaisia ​​sivuvaikutuksia. HNC-potilaat (vähennetty määrä, retrospektiivinen, havainnollinen, lyhytaikainen seuranta, yksityiskohtaisen kliinisen arvioinnin puute, keskittynyt sivuvaikutusten hoitoon).

   Tämän tutkimuksen ensimmäinen tavoite on suorittaa kvantitatiivinen analyysi HNC-potilaiden suun/hampaiden tilasta ennen ja jälkeen IMRT:n ja analysoida mahdollisia kliinisten tulosten välisiä yhteyksiä.

   Sen jälkeen arvioidaan HNC-potilaiden sylkirauhasten toiminta ennen IMRT:tä ja sen jälkeen analysoimalla proteiinipitoisuutta ja erittymisnopeutta sekä tutkimalla mahdollisia yhteyksiä näiden proteiinien ja kliinisten tulosten välillä.

   Seuraavana tavoitteena on määrittää mahdollinen yhteys valittujen proteiinipitoisuuksien ja eritysnopeuden sekä suun mukosiitin tulosten välillä IMRT:n jälkeen, ja siksi lopullisena tavoitteena on arvioida, onko proteiinipitoisuus tai syljen erittymisnopeus luotettava ennustaja mukosiitin esiintymiselle ja vaikeudelle.

   Nollahypoteesi Syljen biokemiallisen koostumuksen ja sädehoidon suun sivuvaikutusten välillä ei ole korrelaatiota HNC-potilailla ennen ja jälkeen sädehoidon

3. Materiaalit ja menetelmät. Eettinen hakemus terveystutkimusviranomaiselle (IRAS Project ID:199100). Kaikki tutkimuksen näytteet hankittaisiin KCL Dental Instituten Special Care -hammasosastolta, Guy's Hospitalista ja KCL Dental Instituten hammasklinikasta.

Näytteet sisältävät sylkeä, biofilmiä, limakalvonäytteitä, kariesta dentiiniä ja/tai hampaita. Näytteenotto lisää noin 10-20 minuuttia tavanomaiseen käsittelyaikaan. Kaikki näytteet kerätään 3 kertaa ennen ja jälkeen IMRT:n pään ja kaulan syövästä 12 kuukauden seurantaan asti.

Yli 18-vuotiaat potilaat pysyvän hampaiston ja syöpäpotilaiden ikäjakauman analysoimiseksi ovat yli 18-vuotiaita, molemmat sukupuolet, missä tahansa sairauden vaiheessa paitsi etäetäpesäkkeissä.

Koehenkilöt, joilla ei ollut Pään ja kaulan syövän ikää ja sukupuolta. Näiden kriteerien mukaan poissuljetaan seuraavat alle 18-vuotiaat potilaat (ei-pysyvä hampaisto), jotka eivät voi antaa suostumustaan ​​potilaat, joille on annettu antibiootteja viimeisten 3 kuukauden aikana, koska suun mikrobisto voi muuttua, potilaat, joilla on systeeminen sairaus (esim. Sjogrenin oireyhtymä), potilailla, joilla on hallitsemattomia systeemisiä sairauksia, jotka voivat vaikuttaa syljeneritykseen ja isännän puolustusmekanismiin.

Näytteen koko Laskentalausunto Tilastollisia neuvoja hankittiin ennen tämän tutkimuksen aloittamista sopivan teholaskelman vaatiman otoskoon määrittämiseksi. Teholaskenta perustui pään ja kaulan syöpäpotilaiden keskimääräisten proteiinitasojen vertailuun ennen ja jälkeen IMRT:n. Tutkimus 80 % teholla 5 %:n merkitsevyystasolla (Chaudhury et al., 2015) pystyy havaitsemaan todellisen eron kaikissa parametreissa ennen ja jälkeen syöpähoidon teholla 0,5 (korkea Cohen 1988:n mukaan) käyttämällä kaksisuuntainen testi vaatisi 35 potilaan kokonaisotoksen

Ehdotettu tilastollinen analyysi:

Kuvaavia tilastoja käytetään otoksen ominaisuuksien ja muiden kliinisten tekijöiden yhteenvetoon.

Kaikki analyysit suoritetaan STATA 15.1:n avulla (College Station, Texas USA, www.stata.com), GraphPad Prism 8 -ohjelmisto (La Jolla California USA, www.graphpad.com) ja Microsoft Excel 2018 normaaliuden tarkistamisen jälkeen. Tietojen normaalius testataan kaikkien parametristen analyysien osalta käyttämällä histogrammia ja laatikkokaavioita. Tulokset ilmaisevat keskiarvona ± SEM suhteessa muuttujiin ja "n" edustaa koehenkilöiden lukumäärää, p < 0,05 arvoa pidettiin tilastollisesti merkitsevänä.

Näytekokoelma

Seuraavat näytteet kerätään:

• stimuloimaton koko suun sylki (UWMS), huuhtelu suolaliuoksella
• plakin biofilmi
• limakalvopuikkoja, jotka keräävät jäännössylkeä posken sisäpuolelta
• kaivettu karies hammaskudos ja/tai poistettu karieshampaat. Näytteenotto lisää 15 minuuttia tavanomaiseen käsittelyaikaan. Näytteitä kerätään päivän aikana, rutiininomaisesti klo 13.30-15.30 hammasklinikalla, jotta vältetään vuorokausivaihtelut.

Stimuloitumaton koko suun sylkinäytteenotto (UWMS)

UWMS-näytteet otetaan passiivisesti kuolaamalla esipunnittuun 50 ml:n steriiliin kartiomaiseen polypropeeniputkeen (Falcon; BD Biosciences, San Jose, CA, USA) 10 minuutin ajan. Kaikki osallistujat välttävät ruokaa ja juomaa vähintään 60 minuuttia ennen näytteenottoa. Näytteet säilytetään jäillä 4°C:ssa. Keräyksen jälkeen putket punnitaan uudelleen ja nettosylkitilavuus lasketaan. Sylkinäytteet merkitään ja säilytetään -80 °C:n pakastimissa jatkoanalyysiä varten. Syljen virtausnopeus lasketaan.

Kliinisen suun arvioinnin kuivan suu- ja makuraportti, joka vastaa kysymykseen Fox et al.:n validoidusta kyselystä (Fox et al., 1987) ja kysymykseen, joka on poimittu normaalikudoksen myöhäisvaikutuksista/somaattisen tavoitteen hallinnan analyyttisestä (LENT/SOMA) pisteytysjärjestelmästä .

Suun mukosiitin luokittelu Maailman terveysjärjestön (WHO) suun toksisuusasteikon avulla. Hammaslääkärin kariesleesioiden arviointi kliinisesti näkyvästä värinmuutoksesta tummanruskeaksi millä tahansa pinnalla avoimiin leesioihin suuontelossa. Hampaiden lukumäärä / karies, puuttuneet tai täytetyt (DMFT) otetaan mukaan kliiniseen arviointiin.

Näytteen analyysi

UWMS-sylkinäytteet Näytteiden kokonaisproteiinipitoisuus analysoidaan käyttämällä Bicinchoninic Acid Assay (BCA) -testiä, tavoiteproteiinipitoisuutta entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA), Periodic Acid Schiff (PAS) -värjäystä, Coomassie Briljanttisinistä ja α-amylaasiaktiivisuutta. standardi kineettinen entsyymimääritys (Salimetrics).

Ennen biokemiallista analyysiä UWMS-näytteet sentrifugoidaan nopeudella 10 000 rpm 5 minuuttia 4 °C:ssa. Supernatantti erotetaan käytettäväksi proteiinipitoisuuden analysoinnissa ja pelletti säilöttiin DNA-uuton suorittamista varten.

Proteiinianalyysi (konsentraatio ja eritysnopeus) Mucin 5B musiini 7, IgA, α-amylaasi, albumiinin karboanhydraasi VI, hapan proliinirikas proteiini ja statheriini valittiin niiden suhteen isännän puolustukseen, mikrobien torjuntaan, bakteerien kiinnittymiseen, kolonisaatioon, limakalvokalvoon, emalikalvo, viskoelastisuus, reologiset ominaisuudet, voitelu ja remineralisaatio.

Proteiinin kokonaiserityksen nopeus lasketaan kertomalla syljen virtausnopeus ja proteiinipitoisuus ug/min (Carpenter et al., 2000).

Musiini 5B ja 7 kvantifioidaan PAS:lla, a-amylaasilla kineettisellä määrityksellä, IgA, albumiini, kystatiini S, runsaasti proliinia sisältävä proteiini ja statheriinipitoisuus UWMS:ssä määritetään käyttämällä ELISA:ta.