RT 우식증의 특성.

1. 소개

   두경부암은 전체 악성 종양의 4-5%를 차지하는 세계에서 여섯 번째로 흔한 암입니다. 두경부암(구강, 비강, 침샘, 부비동, 인두 및 후두 포함)은 영국에서 가장 많이 진단되는 10대 암 중 하나입니다. 영국 암 연구소(Cancer Research UK)에 따르면 2013년 영국에서 새로 구강암 진단을 받은 사람은 7,591명으로 영국에서 14번째로 흔한 암이었습니다.

   방사선 요법(RT)은 대다수의 두경부암 환자를 위한 첫 번째 선택 치료법으로, 종양을 조절하기 위한 국소 치료법입니다. 두경부암 환자의 50% 이상이 치료 용량(평균 누적 용량 55-77 Gy)이 끝날 때까지 일주일에 5일 ​​동안 매일 2Gy의 비율로 RT를 받습니다. RT는 종양 세포를 파괴하는 세포 변화를 자극하지만 이 복잡한 환경의 항상성을 바꾸는 건강한 구강 조직에 극적으로 영향을 미칠 수 있습니다. RT는 주요 및 소타액선의 영구적인 손상(침샘저하, 구강 건조증), 결합 조직 및 혈관 조직의 변형, 특히 점막 및 광물화된 조직의 치유 능력 감소(점막염)와 같은 광범위한 구강 조직 부작용의 원인입니다. , 충치 병변, osteoradionecrosis). RT 3차원(3D) 컴퓨터 단층 촬영(CT)의 부작용을 줄이기 위해 강도 변조 방사선 요법(IMRT)으로 알려진 계획 방사선 요법이 개발되었습니다.

   RT가 건강한 구강 조직에서 유발하는 급성(점막염) 및 후기 발병 부작용/후유증이 있습니다. 방사선 유발 치아우식증은 가장 흔한 후발성 후유증이지만 그 기원과 특성은 명확하지 않다. RT 관련 우식증은 호산성 박테리아를 선호하는 구강 미생물 군집 구성의 변화, 타액분비 저하, 불량한 구강 위생 및 식이 변경과 같은 요인의 조합으로 인해 빠르게 발병합니다. 환자는 종종 가장 심한 경우에도 통증이 거의 없거나 전혀 없습니다. 조직학적 특징은 우식의 발병 및 발달이 RT와 관련되지 않은 것과 유사하지만 영향을 받는 부위가 다르다는 것을 보여줍니다. 실제로 RT 관련 우식은 견치와 앞니의 경추-순측 표면/절단 가장자리에서 더 빈번한 반면 비 RT 관련 우식은 구치(대구치 및 소구치)의 치간/교합 영역에서 더 빈번합니다.

   또한 RT와 관련된 우식증은 치아 파절로 이어질 수 있는 급속한 원주 진행을 보입니다. 그것은 치아의 절단 가장자리의 불규칙하고 일반화된 침식과 관련하여 확산되고 진행되는 절단 또는 교합면에 국부적인 병변이 특징입니다. 또한, 치아 구조 내의 기계적 변화(탄성 계수 및 강성 증가)는 절단 및 교합 영역의 마모를 증가시키고 치아의 완전한 파절을 초래할 수 있습니다.

   치아 파괴는 RT의 가장 심각한 결과 중 하나이며 3~5년 안에 완전한 무치악을 유발할 수 있습니다. RT 환자의 치과 관리는 어려운 일입니다. 구강 건강을 유지하고 삶의 질(QoL)을 향상시키기 위해서는 다학제적 팀(수복치과, 치주과, 근관치료, 치과위생사, 방사선종양학과, 내과, 구강외과)이 필요합니다. 암 생존자의 거의 50%가 구강 건조 증상과 관련된 우울증, 걱정 또는 긴장을 보고했습니다. 따라서 RT 후유증은 두경부암 환자의 삶의 질에 해로운 영향을 미칩니다.

   전반적으로 두 가지 우식 부작용(충치/점막염 ) 이 모집단에 대한 예방적 측정 및 적절한 치료와 상관관계를 갖습니다. 마지막으로, 치료 전 기준 기록을 생성하고 RT 후와 건강한 개인과 비교하기 위해 검증된 측정치를 생성하기 위해 검증된 지표를 사용하여 완전한 구강 평가를 수행해야 합니다.

2. 목표 이 프로젝트의 목적은 HNC 환자에 대해 생화학적 매개변수, 임상 매개변수 및 구강 건강 상태의 생체 데이터를 연관시키는 잘 통제되고 통합된 종적 연구를 수행하여 다음과 같은 방사선 요법의 다양한 부작용을 조사한 이전 연구의 한계를 극복하는 것입니다. HNC 환자(숫자 감소, 후향적, 관찰, 단기 추적, 자세한 임상 평가 부족, 부작용 치료에 집중).

   본 연구의 첫 번째 목적은 IMRT 전후의 HNC 환자의 구강/치아 상태에 대한 정량적 분석을 수행하고 임상 결과 간의 가능한 연관성을 분석하는 것입니다.

   단백질 농도와 분비율을 분석하여 IMRT 전후에 HNC 환자의 타액선 기능을 평가하고 이러한 단백질과 임상 결과 사이의 가능한 연관성을 조사합니다.

   다음 목표는 선택된 단백질 농도와 분비율 및 IMRT 후 구강 점막염 결과 사이의 가능한 연관성을 결정하는 것이며, 따라서 최종 목적은 단백질 농도 또는 타액의 분비율이 점막염 존재 및 중증도의 신뢰할 수 있는 예측 인자인지 평가하는 것입니다.

   귀무 가설 방사선 요법 전후의 HNC 환자에서 타액의 생화학적 구성과 방사선 요법의 경구 부작용 사이에는 상관관계가 없을 것입니다.

3. 재료 및 방법. 보건 연구 기관에 대한 윤리 신청서(IRAS 프로젝트 ID:199100). 연구의 모든 샘플은 KCL Dental Institute의 Special Care Dental Unit, Guy's Hospital 및 KCL Dental Institute의 Dental Clinic에서 얻을 수 있습니다.

샘플에는 타액, 생물막, 점막 면봉, 충치 상아질 및/또는 치아가 포함됩니다. 샘플 수집은 기존 처리 시간에 약 10~20분을 추가합니다. 모든 샘플은 두경부암에서 최대 12개월 추적 관찰까지 IMRT 전후 3개 시점에서 수집됩니다.

영구치 및 암 환자의 연령대를 분석하기 위해 18세 이상의 환자는 18세 이상, 성별, 원격 전이가 있는 경우를 제외하고 모든 질병의 단계에서.

두경부암이 없는 피험자는 연령과 성별이 일치했습니다. 이러한 포함 기준에 따라 다음 환자는 18세 미만(비영구 치아), 구강 미생물이 변경될 수 있기 때문에 이전 3개월 동안 항생제를 투여받은 환자에 동의할 수 없는 환자, 전신 질환 환자(예: Sjogren 증후군), 타액 흐름 및 숙주 방어 메커니즘에 영향을 줄 수 있는 조절되지 않는 전신 질환이 있는 피험자.

표본 크기 계산 진술 적절한 검정력 계산에 필요한 표본 크기를 결정하기 위해 이 연구를 시작하기 전에 통계적 조언을 얻었습니다. 전력 계산은 IMRT 전과 후 두경부암 환자의 평균 단백질 수준을 비교하는 것을 기반으로 합니다. 5% 유의 수준에서 80% 검정력을 사용한 연구(Chaudhury et al., 2015)는 양측 검정에는 총 35명의 환자 샘플이 필요합니다.

제안된 통계 분석:

기술 통계는 샘플 특성 및 기타 임상 요인을 요약하는 데 사용됩니다.

모든 분석은 STATA 15.1(College Station, Texas USA, www.stata.com)을 사용하여 수행되며, GraphPad Prism 8 소프트웨어(La Jolla California USA, www.graphpad.com) 정상성을 확인한 후 Microsoft Excel 2018. 데이터의 정규성은 히스토그램 및 박스 플롯을 사용하여 모든 파라메트릭 분석에 대해 테스트됩니다. 결과는 변수에 대한 평균 ± SEM으로 표현하고 'n'은 대상자의 수를 나타내며, p<0.05 값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

샘플 수집

다음 샘플이 수집됩니다.

• 비자극 전체 구강 타액(UWMS), 식염수 헹굼
• 플라크 생물막
• 안쪽 뺨에서 잔류 타액을 수집하는 점막 면봉
• 발굴된 우식 상아질 조직 및/또는 추출된 우식 치아. 샘플 수집은 기존 처리 시간에 15분을 추가합니다. 샘플은 주간 변동을 피하기 위해 치과 진료소에서 일상적으로 오후 1시 30분에서 오후 3시 30분 사이에 수집됩니다.

무자극 전체 구강 타액 샘플 수집(UWMS)

UWMS 샘플은 미리 계량된 50mL 멸균 원추형 폴리프로필렌 튜브(Falcon; BD Biosciences, San Jose, CA, USA)에 10분 동안 수동 침을 흘림으로써 얻을 수 있습니다. 모든 참가자는 샘플 수집 전 최소 60분 동안 음식과 음료를 피합니다. 샘플은 4°C의 얼음에 보관됩니다. 수집 후 튜브의 무게를 다시 측정하고 순 타액 부피를 계산합니다. 타액 샘플에 라벨을 붙이고 추가 분석을 위해 - 80°C 냉동고에 보관합니다. 타액 유속이 계산됩니다.

임상 구강 평가 구강 건조 및 미각 보고서 Fox et al(Fox et al., 1987)의 검증된 질문과 LENT/SOMA(Late Effects of Normal Tissue/Somatic Objective Management Analytic) 점수 시스템에서 추출한 질문에 답변 .

세계보건기구(WHO) 구강 독성 척도를 사용한 구강 점막염 등급 치과 임상적으로 볼 수 있는 색상의 변색이 모든 표면에서 암갈색으로 변하여 구강 내 개방 병변에 존재하는 우식 병변의 평가. 치아 수/부패, 누락 또는 충진(DMFT)이 임상 평가에 포함됩니다.

샘플 분석

UWMS 타액 샘플 샘플은 BCA(Bicinchoninic Acid Assay)를 사용하여 총 단백질 함량, ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)에 의한 표적 단백질 농도, PAS(Periodic Acid Schiff) 염색, Coomassie Brilliant blue 및 α-아밀라아제 활성에 대해 분석됩니다. 표준 운동 효소 분석(Salimetrics).

생화학적 분석 전에 UWMS 샘플은 4°C에서 5분 동안 10000 RPM으로 원심분리됩니다. 상등액은 단백질 함량 분석에 사용하기 위해 분리하고 펠릿은 DNA 추출을 수행하기 위해 보존했습니다.

단백질 분석(농도 및 분비율) Mucin 5B mucin 7, IgA, α-amylase, albumin carbonic anhydrase VI, acidic proline rich protein, statherin은 숙주방어, 항균, 세균부착, 집락형성, 점막피막, 에나멜 펠리클, 점탄성, 유변학적 특성, 윤활 및 재광화.

총 단백질 분비율은 타액 유속과 단백질 농도(ug/min)를 곱하여 계산됩니다(Carpenter et al., 2000).

뮤신 5B 및 7은 동역학 검정에 의한 PAS,α-아밀라아제에 의해 정량화될 것이며, UWMS의 IgA, 알부민, 시스타틴 S, 프롤린 풍부 단백질 및 스타테린 농도는 ELISA를 사용하여 결정될 것입니다.