La caractérisation des caries RT.

1. Introduction

   Le cancer de la tête et du cou est le sixième cancer le plus répandu dans le monde, représentant 4 à 5 % de toutes les tumeurs malignes. Le cancer de la tête et du cou (comprend la cavité buccale, nasale, les glandes salivaires, les sinus paranasaux, le pharynx et le larynx) est l'un des 10 cancers les plus diagnostiqués au Royaume-Uni. Selon Cancer Research UK, il y avait 7591 nouveaux diagnostics de cancer de la bouche en 2013 dans le pays, ce qui représente le 14e cancer le plus courant au Royaume-Uni.

   La radiothérapie (RT) est le traitement de premier choix pour la majorité des patients atteints d'un cancer de la tête et du cou, qui est un traitement localisé pour contrôler la tumeur. Plus de 50 % des patients atteints d'un cancer de la tête et du cou reçoivent une RT administrée par fractions de 2 Gy (Gy) quotidiennement pendant 5 jours par semaine jusqu'à la fin de leur traitement (dose cumulée moyenne de 55 à 77 Gy). La RT stimule les changements cellulaires qui détruisent les cellules tumorales, mais peuvent affecter considérablement les tissus buccaux sains en modifiant l'homéostasie de cet environnement complexe. La RT est la cause d'un large éventail de réactions tissulaires buccales indésirables telles que des lésions permanentes des glandes salivaires majeures et mineures (hyposalivation, xérostomie), une modification des tissus conjonctifs et vasculaires et une réduction de la capacité de cicatrisation, en particulier dans les tissus muqueux et minéralisés (mucosite). , lésion carieuse, ostéoradionécrose). Afin d'essayer de diminuer les effets secondaires indésirables de la RT tridimensionnelle (3D), la radiothérapie planifiée connue sous le nom de radiothérapie à modulation d'intensité (IMRT) a été développée.

   Il existe des effets/séquelles indésirables aigus (mucosite) et tardifs induits par la RT dans les tissus buccaux sains . La carie dentaire radio-induite est l'effet tardif le plus courant, mais son origine et sa nature ne sont pas claires. Les caries liées à la RT apparaissent rapidement en raison d'une combinaison de facteurs tels que le changement de la composition de la communauté microbienne buccale favorisant les bactéries acidophiles, l'hyposalivation, une mauvaise hygiène buccale et des modifications alimentaires . Les patients ont souvent peu ou pas de douleur, même dans les cas les plus graves. Les caractéristiques histologiques montrent que l'apparition et le développement des caries sont similaires à ceux non liés à la RT, mais les sites affectés sont différents. En effet, les caries liées à la RT sont plus fréquentes sur la surface cervico-labiale/bord incisif des canines et des incisives tandis que celles non liées à la RT sont plus fréquentes dans les zones interproximales/occlusales des dents postérieures (molaires et prémolaires).

   De plus, les caries associées à la RT ont une progression circonférentielle rapide qui peut entraîner une fracture dentaire. Elle se caractérise par une lésion localisée des surfaces incisives ou occlusales qui diffuse et progresse en relation avec une érosion irrégulière et généralisée du bord incisif de la dent. De plus, les modifications mécaniques (augmentation du module élastique et de la rigidité) au sein de la structure dentaire augmentent l'usure des zones incisives et occlusales et peuvent entraîner une fracture complète de la dent.

   La destruction des dents est l'une des conséquences les plus graves de la RT et peut entraîner un édentement complet en 3 à 5 ans. La prise en charge dentaire des patients RT est difficile. Il est nécessaire de rassembler une équipe multidisciplinaire (dentistes restaurateurs, parodontologie, endodontie, hygiéniste dentaire, radio-oncologues, oncologues médicaux et chirurgiens bucco-dentaires) pour maintenir la santé bucco-dentaire et améliorer la qualité de vie (QoL). Près de 50 % des survivants du cancer ont signalé une dépression, des inquiétudes ou des tensions liées aux symptômes de sécheresse buccale. Par conséquent, les séquelles de RT affectent négativement la qualité de vie des patients atteints d'un cancer de la tête et du cou.

   Dans l'ensemble, il est nécessaire d'effectuer une analyse quantitative des composants de la matrice chimique, des protéines et des modifications microbiennes qui se produisent dans les dents/la cavité buccale des patients, qui ont subi une RT, afin de déterminer l'étiologie et la physiopathologie des deux effets secondaires prévalents (caries/mucosite ) à mettre en corrélation avec des mesures préventives et des soins de traitement appropriés pour cette population. Enfin, il est nécessaire de réaliser un bilan oral complet à l'aide d'un index validé afin de créer un dossier de référence avant le traitement et une mesure validée pour comparer après la RT et avec des individus sains.

2. Objectif L'objectif de ce projet est de réaliser une étude longitudinale bien contrôlée et intégrée des patients HNC corrélant les données biologiques des paramètres biochimiques, des paramètres cliniques et de l'état de santé bucco-dentaire, pour surmonter les limites des études précédentes, qui ont examiné les différents effets secondaires de la radiothérapie de Patients HNC (nombre réduit, suivi rétrospectif, observationnel, à court terme, manque d'évaluation clinique détaillée, axé sur le traitement des effets secondaires).

   Le premier objectif de cette étude sera d'effectuer une analyse quantitative de l'état bucco-dentaire des patients HNC avant et après IMRT et d'analyser les associations possibles entre les résultats cliniques.

   Suivi par l'évaluation de la fonction des glandes salivaires des patients HNC avant et après l'IMRT en analysant la concentration de protéines et le taux de sécrétion et en étudiant les associations possibles entre ces protéines et les résultats cliniques.

   L'objectif suivant est de déterminer l'association possible entre la concentration de protéines sélectionnées et le taux de sécrétion et les résultats de la mucosite orale après IMRT, et par conséquent, l'objectif final est d'évaluer si la concentration de protéines ou le taux de sécrétion de la salive est un prédicteur fiable de la présence et de la gravité de la mucosite.

   Hypothèse nulle Il n'y aura pas de corrélation entre la composition biochimique salivaire et les effets secondaires oraux de la radiothérapie chez les patients HNC avant et après la radiothérapie

3. Matériels et méthodes. Application éthique à l'Autorité de recherche en santé (ID de projet IRAS : 199100). Tous les échantillons de l'étude seraient obtenus auprès de l'unité dentaire de soins spéciaux de l'institut dentaire KCL, de l'hôpital Guy et de la clinique dentaire de l'institut dentaire KCL.

Les échantillons comprendront de la salive, du biofilm, des écouvillons de muqueuses, de la dentine et/ou des dents cariées. La collecte des échantillons ajoutera environ 10 à 20 min au temps de traitement conventionnel. Tous les échantillons seront prélevés à 3 moments avant et après l'IMRT du cancer de la tête et du cou jusqu'à 12 mois de suivi.

Les patients de plus de 18 ans afin d'analyser la dentition permanente et la tranche d'âge des patients atteints de cancer sont âgés de plus de 18 ans, les deux sexes, à n'importe quel stade de la maladie, sauf en cas de métastases à distance.

Sujets sans Cancer de la tête et du cou appariés selon l'âge et le sexe. Suite à ces critères d'inclusion, les patients suivants sont exclus de moins de 18 ans (dentition non permanente), incapables de donner leur consentement les patients qui ont reçu des antibiotiques au cours des 3 mois précédents car le microbiote buccal pourrait être altéré, les patients atteints d'une maladie systémique (telle que syndrome de Sjögren), sujets atteints de maladies systémiques non contrôlées, pouvant affecter le flux salivaire et le mécanisme de défense de l'hôte.

Énoncé de calcul de la taille de l'échantillon Des conseils statistiques ont été obtenus avant de commencer cette étude afin de déterminer la taille de l'échantillon requise par un calcul de puissance approprié. Le calcul de la puissance était basé sur la comparaison des niveaux moyens de protéines chez les patients atteints d'un cancer de la tête et du cou avant et après l'IMRT. Une étude avec une puissance de 80 % à un niveau de signification de 5 % (Chaudhury et al., 2015) sera en mesure de détecter la vraie différence dans tous les paramètres avant et après le traitement du cancer avec une taille d'effet de 0,5 (élevée selon Cohen 1988) en utilisant un test bilatéral nécessiterait un échantillon total de 35 patients

Analyse statistique proposée :

Des statistiques descriptives seront utilisées pour résumer les caractéristiques de l'échantillon et d'autres facteurs cliniques.

Toutes les analyses seront effectuées à l'aide de STATA 15.1 (College Station, Texas USA, www.stata.com), Logiciel GraphPad Prism 8 (La Jolla Californie USA, www.graphpad.com) et Microsoft Excel 2018, après vérification de la normalité. La normalité des données sera testée pour toutes les analyses paramétriques à l'aide d'histogrammes et de boîtes à moustaches. Les résultats sont exprimés en moyenne ± SEM par rapport aux variables et 'n' représente le nombre de sujets, la valeur p <0,05 a été considérée comme statistiquement significative.

Collecte d'échantillons

Les échantillons suivants seront collectés :

• salive buccale entière non stimulée (UWMS), solution de rinçage saline
• biofilm de la plaque
• écouvillons muqueux recueillant la salive résiduelle de l'intérieur de la joue
• tissu dentinaire carieux excavé et/ou dents cariées extraites. La collecte des échantillons ajoutera 15 minutes au temps de traitement conventionnel. Les échantillons seront prélevés pendant la journée, systématiquement entre 13 h 30 et 15 h 30 à la clinique dentaire afin d'éviter les variations diurnes.

Prélèvement d'échantillons de salive buccale non stimulée (UWMS)

Les échantillons UWMS seront obtenus par bave passive dans un tube en polypropylène conique stérile pré-pesé de 50 ml (Falcon; BD Biosciences, San Jose, CA, USA) pendant 10 minutes. Tous les participants éviteront de manger et de boire pendant au moins 60 minutes avant le prélèvement de l'échantillon. Les échantillons seront conservés sur glace à 4°C. Après le prélèvement, les tubes seront repesés et le volume net de salive calculé. Les échantillons de salive seront étiquetés et stockés dans des congélateurs à -80 °C pour une analyse plus approfondie. Le débit de salive sera calculé.

Clinical Oral Assessment Dry Mouth and Taste Report répondant à une question d'un questionnaire validé par Fox et al. (Fox et al., 1987) et à une question extraite du système de notation Late Effects of Normal Tissue/Somatic Objective Management Analytic (LENT/SOMA) .

Classement de la mucosite buccale à l'aide de l'échelle de toxicité orale de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) Évaluation dentaire des lésions carieuses présentes, du changement de couleur cliniquement visible au brun foncé sur n'importe quelle surface jusqu'aux lésions ouvertes dans la cavité buccale. Le nombre de dents / cariées, manquantes ou obturées (DCAO) sera inclus dans l'évaluation clinique.

Analyse d'échantillon

Échantillons de salive UWMS Les échantillons seront analysés pour la teneur totale en protéines à l'aide du dosage de l'acide bicinchoninique (BCA), la concentration de protéines ciblées par dosage immuno-enzymatique (ELISA), la coloration à l'acide périodique de Schiff (PAS), le bleu de Coomassie brillant et l'activité α-amylase par le dosage enzymatique cinétique standard (Salimetrics).

Avant l'analyse biochimique, les échantillons UWMS seront centrifugés à 10 000 tr/min pendant 5 minutes à 4 °C. Le surnageant sera séparé pour être utilisé pour analyser la teneur en protéines et le culot a été conservé pour effectuer l'extraction de l'ADN.

Analyse des protéines (concentration et taux de sécrétion) Mucine 5B mucine 7, IgA, α-amylase, albumine carbonique anhydrase VI, protéine riche en proline acide et stathérine ont été sélectionnés en raison de leur relation avec la défense de l'hôte, l'antimicrobien, l'adhérence bactérienne, la colonisation, la pellicule muqueuse, pellicule d'émail, propriétés viscoélastiques, rhéologiques, lubrification et reminéralisation.

Le taux de sécrétion protéique total sera calculé en multipliant le débit salivaire et la concentration protéique en ug/min (Carpenter et al., 2000).

Les mucines 5B et 7 seront quantifiées par PAS, l'α-amylase par un dosage cinétique, les IgA, l'albumine, la cystatine S, la protéine riche en proline et la concentration de stathérine dans l'UWMS seront déterminées par ELISA.