Характеристика РТ кариеса.

1. Введение

   Рак головы и шеи является шестым по распространенности раком в мире, составляя 4-5% всех злокачественных новообразований. Рак головы и шеи (включая ротовую полость, полость носа, слюнные железы, околоносовые пазухи, глотку и гортань) входит в десятку наиболее диагностируемых видов рака в Великобритании. По данным Cancer Research UK, в 2013 году в стране был диагностирован 7591 рак ротовой полости, что представляет собой 14-е место среди наиболее распространенных видов рака в Великобритании.

   Лучевая терапия (ЛТ) является методом первого выбора для большинства пациентов с раком головы и шеи, который представляет собой локализованное лечение для контроля над опухолью. Более 50% больных раком головы и шеи получают лучевую терапию фракциями по 2 Грея (Гр) ежедневно в течение 5 дней в неделю до окончания курса терапии (средняя кумулятивная доза 55-77 Гр). ЛТ стимулирует клеточные изменения, которые разрушают опухолевые клетки, но может резко воздействовать на здоровые ткани полости рта, изменяя гомеостаз этой сложной среды. ЛТ является причиной широкого спектра неблагоприятных реакций тканей полости рта, таких как необратимое поражение больших и малых слюнных желез (гипосаливация, ксеростомия), модификация соединительной и сосудистой тканей и снижение способности к заживлению, особенно в слизистой оболочке и минерализованных тканях (мукозит). , кариес, остеорадионекроз). Чтобы попытаться уменьшить неблагоприятные побочные эффекты трехмерной (3D) компьютерной томографии (КТ) RT, была разработана плановая лучевая терапия, известная как лучевая терапия с модулированной интенсивностью (IMRT).

   Существуют острые (мукозит) и поздние побочные эффекты/последствия, которые ЛТ вызывает в здоровых тканях полости рта. Радиационно-индуцированный кариес зубов является наиболее частым поздним последствием, но его происхождение и природа не ясны. Кариес, связанный с лучевой терапией, имеет быстрое начало в результате сочетания таких факторов, как сдвиг в составе микробного сообщества полости рта в пользу ацидофильных бактерий, гипосаливация, плохая гигиена полости рта и диетические изменения. Пациенты часто испытывают слабую боль или ее отсутствие даже в самых тяжелых случаях. Гистологические особенности показывают, что начало и развитие кариеса аналогичны кариесу, не связанному с лучевой терапией, но пораженные участки отличаются. Действительно, кариес, связанный с ЛТ, чаще встречается на шеечно-губной поверхности/резцовом крае клыков и резцов, тогда как кариес, не связанный с ЛТ, чаще встречается в интерпроксимальных/окклюзионных областях жевательных зубов (моляры и премоляры).

   Кроме того, кариес, связанный с РТ, имеет быстрое прогрессирование по окружности, что может привести к перелому зуба. Он характеризуется локализованным поражением режущих или жевательных поверхностей, которое диффузно и прогрессирует в связи с неравномерной и генерализованной эрозией режущего края зуба. Кроме того, механические изменения (увеличение модуля упругости и жесткости) в структуре зуба увеличивают износ режущих и окклюзионных областей и могут привести к полному разрушению зуба.

   Разрушение зубов является одним из самых тяжелых последствий ЛТ и может привести к полной адентии через 3-5 лет. Лечение зубов у пациентов с РТ представляет собой сложную задачу. Необходимо собрать междисциплинарную команду (стоматологи-реставраторы, пародонтологи, эндодонтисты, стоматологи-гигиенисты, радиационные онкологи, медицинские онкологи и челюстно-лицевые хирурги) для поддержания здоровья полости рта и улучшения качества жизни (КЖ). Почти 50% выживших после рака сообщали о депрессии, беспокойстве или напряжении, связанных с симптомами сухости во рту. Следовательно, последствия ЛТ пагубно влияют на качество жизни больных раком головы и шеи.

   В целом необходим количественный анализ компонентов химического матрикса, белков и микробных изменений, происходящих в зубах/ротовой полости пациентов, перенесших лучевую терапию, для определения этиологии и патофизиологии двух распространенных побочных эффектов (кариес/мукозит). ) коррелировать с профилактическим измерением и соответствующим лечением для этой группы населения. Наконец, необходимо выполнить полную устную оценку с использованием утвержденного индекса, чтобы создать базовую запись до лечения и подтвержденные измерения для сравнения после ЛТ и со здоровыми людьми.

2. Цель Целью данного проекта является проведение хорошо контролируемого и интегрированного лонгитюдного исследования пациентов с HNC, коррелирующего биоданные биохимических параметров, клинических параметров и состояния здоровья полости рта, с преодолением ограничений предыдущих исследований, в которых изучались различные побочные эффекты лучевой терапии. Пациенты с HNC (уменьшенное количество, ретроспективное, обсервационное, краткосрочное наблюдение, отсутствие подробной клинической оценки, сосредоточенное на лечении побочных эффектов).

   Первой целью этого исследования будет проведение количественного анализа орального/зубного статуса пациентов с HNC до и после IMRT и анализ возможных ассоциаций между клиническими результатами.

   Затем была проведена оценка функции слюнных желез пациентов с HNC до и после IMRT путем анализа концентрации белка и скорости его секреции и исследования возможных ассоциаций между этими белками и клиническими результатами.

   Следующая цель состоит в том, чтобы определить возможную связь между концентрацией и скоростью секреции выбранных белков и исходами орального мукозита после IMRT, и, следовательно, конечной целью является оценка того, является ли концентрация белка или скорость секреции слюны надежным предиктором наличия и тяжести мукозита.

   Нулевая гипотеза Не будет корреляции между биохимическим составом слюны и оральными побочными эффектами лучевой терапии у пациентов с HNC до и после лучевой терапии.

3. Материалы и методы. Заявление по вопросам этики в Управление медицинских исследований (ID проекта IRAS: 199100). Все образцы для исследования будут получены из стоматологического отделения специального ухода Стоматологического института KCL, больницы Гая и стоматологической клиники Стоматологического института KCL.

Образцы будут включать слюну, биопленку, мазки со слизистой оболочки, кариозный дентин и/или зубы. Сбор образцов добавит примерно от 10 до 20 минут к обычному времени обработки. Все образцы будут собраны в 3-кратных точках до и после IMRT от рака головы и шеи до 12 месяцев наблюдения.

Пациенты старше 18 лет с целью анализа постоянного прикуса и возрастного диапазона для онкологических больных старше 18 лет, обоих полов, на любой стадии заболевания, кроме случаев наличия отдаленных метастазов.

Возраст и пол субъектов без рака головы и шеи совпадают. В соответствии с этими критериями включения исключаются следующие пациенты моложе 18 лет (с непостоянным прикусом), пациенты, которые не могут дать согласие, пациенты, которым вводили антибиотики в течение предыдущих 3 месяцев, поскольку микробиота полости рта может быть изменена, пациенты с системными заболеваниями (такими как синдром Шегрена), субъекты с неконтролируемыми системными заболеваниями, которые могут повлиять на слюноотделение и защитные механизмы хозяина.

Заявление о расчете размера выборки Статистическая рекомендация была получена до начала этого исследования, чтобы определить размер выборки, необходимый для подходящего расчета мощности. Расчет мощности был основан на сравнении средних уровней белка у пациентов с раком головы и шеи до и после IMRT. Исследование с мощностью 80 % при уровне значимости 5 % (Chaudhury et al., 2015) сможет выявить истинную разницу во всех параметрах до и после лечения рака с размером эффекта 0,5 (высокий по Cohen, 1988) с использованием для двухстороннего теста потребуется общая выборка из 35 пациентов.

Предлагаемый статистический анализ:

Описательная статистика будет использоваться для обобщения характеристик образца и других клинических факторов.

Весь анализ будет проводиться с использованием STATA 15.1 (College Station, Texas USA, www.stata.com), Программное обеспечение GraphPad Prism 8 (La Jolla California USA, www.graphpad.com) и Microsoft Excel 2018 после проверки на нормальность. Нормальность данных будет проверяться для всех параметрических анализов с использованием гистограмм и диаграмм. Результаты выражают как среднее значение ± стандартная ошибка среднего по отношению к переменным, а «n» представляет количество субъектов, значение р<0,05 считалось статистически значимым.

Сбор образцов

Будут собраны следующие образцы:

• нестимулированная слюна всего рта (UWMS), полоскание физиологическим раствором
• биопленка зубного налета
• мазки со слизистой оболочки, собирающие остаточную слюну с внутренней стороны щеки
• раскопанная кариозная ткань дентина и/или удаленные кариозные зубы. Сбор проб добавит 15 минут к обычному времени обработки. Образцы будут собираться в течение дня, обычно с 13:30 до 15:30 в стоматологической клинике, чтобы избежать дневных колебаний.

Сбор образцов нестимулированной слюны всего рта (UWMS)

Образцы UWMS будут получены путем пассивного слюнотечения в предварительно взвешенную стерильную коническую полипропиленовую пробирку объемом 50 мл (Falcon; BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США) в течение 10 минут. Все участники будут воздерживаться от еды и питья не менее чем за 60 минут до сбора образцов. Образцы будут храниться на льду при температуре 4°C. После сбора пробирки будут повторно взвешены и рассчитан чистый объем слюны. Образцы слюны будут маркированы и сохранены в морозильных камерах при температуре -80 °C для дальнейшего анализа. Будет рассчитана скорость потока слюны.

Клиническая оценка полости рта. Отчет о сухости во рту и вкусе, отвечающий на вопрос из утвержденного опросника Фокса и др. (Fox et al., 1987) и на вопрос, извлеченный из аналитической системы оценки поздних эффектов нормальных тканей/соматических объективов (LENT/SOMA). .

Оценка орального мукозита с использованием шкалы оральной токсичности Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) Стоматологическая оценка кариозных поражений от клинически видимого изменения цвета до темно-коричневого на любой поверхности до открытых поражений в ротовой полости. Количество зубов / разрушенных, пропущенных или запломбированных (DMFT) зубов будет включено в клиническую оценку.

Анализ проб

Образцы слюны UWMS будут проанализированы на содержание общего белка с помощью анализа на бицинхониновую кислоту (BCA), целевую концентрацию белка с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), окрашивание периодической кислотой Шиффа (PAS), Кумасси бриллиантовый синий и активность α-амилазы с помощью стандартный кинетический ферментный анализ (Salimetrics).

Перед биохимическим анализом образцы UWMS центрифугируют при 10000 об/мин в течение 5 минут при 4°C. Надосадочную жидкость отделяют для анализа содержания белка, а осадок сохраняют для выделения ДНК.

Анализ белков (концентрация и скорость секреции) Муцин 5B, муцин 7, IgA, α-амилаза, альбуминкарбоангидраза VI, кислый белок, богатый пролином, и статерин были выбраны из-за их связи с защитой хозяина, антимикробным действием, бактериальной адгезией, колонизацией, пленкой слизистой оболочки, пленка эмали, вязкоупругость, реологические свойства, смазывание и реминерализация.

Общая скорость секреции белка будет рассчитываться путем умножения скорости слюноотделения и концентрации белка в мкг/мин (Carpenter et al., 2000).

Муцин 5B и 7 будут количественно определять с помощью PAS, α-амилазу - с помощью кинетического анализа, концентрацию IgA, альбумина, цистатина S, белка, богатого пролином, и концентрацию статерина в UWMS будут определять с помощью ELISA.