磁気活性化細胞選別 (MACS) を使用した体外受精のための非アポトーシスヒト精子の選択 (MACS-HS)

不妊カップルの研究は、男性因子が不妊に役割を果たすことを示しています. 精子は、受精と胚発生に影響を与える分子レベルでの損傷を示す可能性があります。 これらの分子損傷の 1 つは、デオキシリボ核酸 (DNA) の断片化によって表されます。この断片化は、受精後のゲノム活性化中に発生学的結果に悪影響を及ぼし、流産率の増加とも相関します。

DNA の断片化は、アポトーシスの後期症状の 1 つです。 DNA の断片化を示す精子 (アポトーシス精子) の識別には、固定と染色が必要です。 したがって、このメソッドは、ICSI のための非アポトーシス精子を選択する臨床診療に適用できません。 ただし、この選択は、磁気活性化セルソーティング (MACS) を使用することで可能です。 この手順は、アネキシン V がアポトーシス精子細胞の原形質膜でこの抗原を認識する能力を使用することにより、アポトーシスの初期マーカー、すなわちホスファチジルセリン (PS) の外在化を示す精子の同定と枯渇に基づいています。 MACS の後、非アポトーシス細胞 (アネキシン V 陰性細胞) に富む画分をさらに臨床応用に使用できます。

MACS システムは、磁場内に配置された分離カラムと、常磁性ビーズで標識されたアネキシン V 試薬を利用します。

最初に、精液サンプルは密度勾配遠心法 (DGC) にかけられます。 得られたサンプルは 2 つの画分に分割されます: 一方の画分は磁気選別 (画分 1) の対象となり、もう一方の画分はコントロール (並べ替えなし、画分 2) を表します。

画分 1 の細胞をアネキシン V とインキュベートし、磁場内に配置された分離カラムを通過させます。 アポトーシス細胞 (アネキシン V 陽性細胞) が選択的にカラムに保持されます。 アネキシン V によって標識されていない非アポトーシス細胞は、カラムを通過し、さらに使用するために収集されます。

ICSI の時点で、兄弟の成熟した卵母細胞は、画分 1 (非アポトーシス細胞が豊富) または画分 2 (コントロール、従来の方法で調製された精子) からの精子で授精されます。 ICSIに続いて、すべての受精卵母細胞は、同じ培養皿で同じ条件で個別に培養されます。 移植する胚の選択は、胚の質に基づいて行われます。 両腕からの過剰な良質の胚は、さらに使用するために凍結されます。

本研究は、MACS の使用が、精子 DNA 断片化率が高いカップルの胚の質/利用率を改善するかどうかを判断することを目的としています。 患者間の変動を避けるために、研究は兄弟卵母細胞研究として設計されています。 記述統計は、中央値、平均値、割合、標準偏差、範囲、および 95% 信頼区間を適切に分析することによって実行されます。 必要に応じて、標準的なパラメトリックおよびノンパラメトリック検定を使用して、グループ間で一次結果と二次結果を比較します。 サンプルサイズの計算: 80% の検出力を達成するには、各群で 142 個の成熟卵母細胞が必要です。これは、5% レベルで有意であり、対照群の 13% から 26% への一次結果測定値の増加です。実験グループ。