Udvælgelse af ikke-apoptotisk menneskelig sæd til in vitro fertilisering ved hjælp af magnetisk aktiveret cellesortering (MACS) (MACS-HS)

Undersøgelser af infertile par har vist, at mandlig faktor spiller en rolle i infertilitet. Spermatozoer kan frembyde skader på molekylært niveau, som har en effekt på befrugtning og embryoudvikling. En af disse molekylære skader er repræsenteret af DeoxyriboNucleic Acid (DNA) fragmentering, hvis negative indvirkning på embryologisk resultat vises under genomaktivering efter befrugtning og er også korreleret med øget abortrate.

DNA-fragmentering repræsenterer en af ​​de sene manifestationer af apoptose. Identifikation af spermatozoer, der viser DNA-fragmentering (apoptotiske spermatozoer), kræver fiksering og farvning. Derfor kan denne metode ikke anvendes i klinisk praksis til at udvælge ikke-apoptotiske spermatozoer til ICSI. Dette valg er dog muligt ved at bruge magnetisk aktiveret cellesortering (MACS). Proceduren er baseret på identifikation og udtømning af spermatozoer, der viser den tidlige markør for apoptose, nemlig eksternaliseringen af ​​phosphatidylserin (PS), ved at bruge Annexin Vs evne til at genkende dette antigen i plasmamembranen af ​​apoptotiske sædceller. Efter MACS kan den fraktion, der er beriget i ikke-apoptotiske celler (Annexin V-negative celler), yderligere anvendes til klinisk anvendelse.

MACS-systemet gør brug af en separationssøjle placeret i et magnetfelt og af Annexin-V-reagens mærket med paramagnetiske perler.

Sædprøven vil i første omgang blive genstand for densitetsgradientcentrifugering (DGC). Den opnåede prøve vil blive opdelt i 2 fraktioner: en fraktion vil blive genstand for magnetisk sortering (fraktion 1), og den anden fraktion vil repræsentere kontrollen (ingen sortering; fraktion 2).

Cellerne fra fraktion 1 vil blive inkuberet med Annexin-V og derefter ført gennem separationssøjlen placeret i et magnetfelt. De apoptotiske celler (Annexin V-positive celler) vil blive selektivt tilbageholdt i kolonnen. De ikke-apoptotiske celler, der ikke er mærket af Annexin V, vil passere gennem kolonnen og vil blive opsamlet til videre brug.

I ICSI-øjeblikket vil modne søskendeæggeceller blive insemineret med spermatozoer fra fraktion 1 (beriget med ikke-apoptotiske celler) eller fra fraktion 2 (kontrol, konventionelt fremstillede spermatozoer). Efter ICSI vil alle de inseminerede oocytter blive dyrket individuelt under de samme forhold i samme dyrkningsskål. Valget af embryo(r) til overførsel vil være baseret på embryokvalitet. De overtallige embryoner af god kvalitet fra begge arme vil blive frosset til videre brug.

Den foreliggende undersøgelse har til formål at afgøre, om brugen af ​​MACS forbedrer embryokvaliteten/udnyttelseshastigheden i par med høj sperm-DNA-fragmenteringshastighed. For at undgå variation mellem patienter er undersøgelsen designet som en søskendeæggeundersøgelse. Beskrivende statistik vil blive udført ved at analysere median, middelværdi, proportioner, standardafvigelse, intervaller og 95 % konfidensintervaller efter behov. Standard parametriske og ikke-parametriske test vil blive brugt, alt efter hvad der er relevant, til at sammenligne primære og sekundære resultater mellem grupper. Prøvestørrelsesberegning: et antal på 142 modne oocytter i hver arm vil være nødvendigt for at opnå 80 % evne til at detektere, lige så signifikant på 5 % niveauet, en stigning i det primære resultatmål fra 13 % i kontrolgruppen til 26 % i forsøgsgruppen.