MACS(Magnetic Activated Cell Sorting)를 이용한 체외 수정을 위한 비사멸 인간 정자의 선택 (MACS-HS)

불임 부부에 대한 연구는 남성 요인이 불임에 중요한 역할을 한다는 것을 보여주었습니다. 정자는 수정 및 배아 발달에 영향을 미치는 분자 수준에서 손상을 나타낼 수 있습니다. 이러한 분자 손상 중 하나는 수정 후 게놈 활성화 중에 배아 결과에 부정적인 영향을 미치는 DNA(DeoxyriboNucleic Acid) 단편화로 표시되며 유산률 증가와도 관련이 있습니다.

DNA 단편화는 세포사멸의 후기 징후 중 하나를 나타냅니다. DNA 단편화를 보이는 정자(아폽토시스 정자)를 식별하려면 고정 및 염색이 필요합니다. 따라서 이 방법은 ICSI에 대한 비세포사멸 정자를 선택하기 위해 임상 실습에 적용할 수 없습니다. 그러나 MACS(Magnetic-Activated Cell Sorting)를 사용하면 이러한 선택이 가능합니다. 이 절차는 세포사멸 정자 세포의 원형질막에서 이 항원을 인식하는 Annexin V의 능력을 사용하여 세포사멸의 초기 마커, 즉 포스파티딜세린(PS)의 외부화를 나타내는 정자의 식별 및 고갈을 기반으로 합니다. MACS 후 비세포사멸 세포(Annexin V-negative cells)가 풍부한 분획은 추가로 임상 적용에 사용될 수 있다.

MACS 시스템은 자기장에 배치된 분리 컬럼과 상자성 비드가 표시된 Annexin-V 시약을 사용합니다.

처음에 정액 샘플은 밀도 구배 원심 분리(DGC)의 대상이 됩니다. 얻은 샘플은 2개의 부분으로 나뉩니다. 한 부분은 자기 분류(분획 1)의 대상이 되고 다른 부분은 대조군(분류 없음, 부분 2)을 나타냅니다.

분획 1의 세포는 Annexin-V와 함께 배양된 다음 자기장에 위치한 분리 컬럼을 통과합니다. 아폽토시스 세포(Annexin V 양성 세포)는 컬럼에 선택적으로 유지됩니다. Annexin V에 의해 표지되지 않은 비세포사멸 세포는 컬럼을 통과하고 추가 사용을 위해 수집됩니다.

ICSI 순간에, 형제 성숙한 난모세포는 분획 1(비-아폽토시스 세포가 풍부함) 또는 분획 2(대조군, 통상적으로 제조된 정자)의 정자로 수정될 것입니다. ICSI에 따라 모든 수정된 난모세포는 동일한 배양 접시에서 동일한 조건에서 개별적으로 배양됩니다. 이식할 배아의 선택은 배아의 품질에 따라 결정됩니다. 두 팔에서 ​​나온 여분의 양질의 배아는 추가 사용을 위해 냉동됩니다.

본 연구는 MACS의 사용이 정자 DNA 단편화율이 높은 부부에서 배아의 질/이용률을 향상시키는지 확인하는 것을 목표로 한다. 환자 간 변동을 피하기 위해 연구는 형제 난모세포 연구로 설계되었습니다. 중앙값, 평균, 비율, 표준 편차, 범위 및 95% 신뢰 구간을 적절하게 분석하여 기술 통계를 수행합니다. 그룹 간의 기본 및 보조 결과를 비교하기 위해 표준 파라메트릭 및 비모수 테스트가 적절하게 사용됩니다. 샘플 크기 계산: 80%의 검출력을 달성하려면 각 팔에 있는 142개의 성숙한 난모세포가 필요하며, 5% 수준에서 중요하며, 1차 결과 측정에서 대조군의 13%에서 대조군의 26%로 증가합니다. 실험군.