血管機能、微小循環および血栓症に対する電子タバコ吸入の急性影響

22 名の健康な女性および男性の一時喫煙者またはスヌース使用者 (18 ～ 55 歳、1 か月あたり 10 本のタバコ、1 か月あたり 10 袋のスヌース) が含まれます。 研究対象者は、曝露の少なくとも 24 時間前からアルコールとカフェインの摂取を控える必要があります。 タバコの使用 (スウェーデンの湿った嗅ぎタバコを含む) または電子タバコの使用は、曝露前 7 日間は許可されていません。

すべての被験者は、通常の健康宣言を完了する必要があります。

無作為化されたクロスオーバー方式で、すべての被験者が 1 つの電子タバコ、eVic-Primo SE (Shenzhen Joyetech Co., Ltd.、中国) から蒸気 (30 分間 30 パフ) を吸い込みます。十分に換気された特別に準備された部屋で。

市場には多くのリキッドの製造業者と流通業者があります。 独立したコンテンツ分析により、リキッドのバッチ間でのニコチンのばらつきが少なく、製造業者が述べたニコチンの量は多くの場合正しいことが示されました。 ニコチン（１９ｍｇ／ｍｌ）を含まない、および含む、香料を含まないＥ液体（Ｖａｌｅｏ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＧｍｂＨ、ドイツ）を使用する。 コンテンツ分析は、メーカーのホームページ (http://www.e-liquid-wholesale.com) で無料で利用できます。 第 3 世代の EC は、設定 (温度 230°C、効果 32 W、抵抗 0,20 Ω) で使用されます。

研究対象者は、曝露シーケンスの少なくとも 24 時間前からアルコールの摂取を控え、12 時間はカフェインを控える必要があります。 2 つの機会は、少なくとも 1 週間は離れています。 被験体は暴露前に15分間休む。

最初の 15 分間の休息に続いて、さまざまな心血管エンドポイントの測定がベースラインで実行され、両方の曝露の 2 時間後まで実行されます。 これは、次の方法で行われます。

血管機能の測定

フォトプレチスモグラフィー (PPG) 動脈硬化は、血管の損傷とリスクの独立した尺度であり、ゴールド スタンダード技術の脈波速度 (PWV) で最もよく評価されます。 ただし、この方法は技術的に要求が高く、特別な機器 (SphygmoCor など) と教育を受けた研究担当者が必要です。 ただし、指のフォトプレチスモグラフィーは、PWV と同じ情報を提供する可能性があり、動脈硬化の継続的な測定に理想的です。

脈波伝播時間 (PPT)、脈波の収縮期から拡張期のピークまでの間隔。 PPT は、動脈硬化と血管老化の今後のマーカーです。 同時に、心電図とマイクによる熱音が記録され、分析が検証しやすくなります。

微小循環イオントフォレシスおよびレーザー スペックル コントラスト イメージング (LSCI) 微小循環は、2 つの物質 (アセチルコリンとニトロプルシド) を皮膚表面の小さなチャンバー (0.5 ml) に適用する非侵襲的な方法で評価されます。 微小循環の変化は、レーザードップラーで測定されます。 この方法は完全に無害で無痛です。 まれではあるがもっともらしい副作用は、局所的な一時的な皮膚発疹です。

心拍ごとに圧力波が生成され、体の最も末梢の部分にまで到達します。 光吸収の変化を測定することにより、指先などの皮下組織の末梢動脈および細動脈の膨張 (非常に小さい場合でも) を評価することができます。 微小循環は、皮膚の微小循環を評価するための非侵襲的で完全に痛みのない方法であるレーザー スペックル コントラスト イメージング (LSCI) によっても測定できます。

血圧 半自動オシロメトリック血圧計を使用して、血圧と心拍数を測定します。

採血 血液サンプルは、1/10 の 0.129 M クエン酸ナトリウム、EDTA、およびベースラインの血清を含む試験管に、暴露後 0 時間、1 時間、および 2 時間で採取されます。 血漿は、室温（RT）で2000gで20分間遠心分離した後に収集され、分析まで-70°Cで凍結されます。

血栓形成の測定 (T-TAS) T-TAS® (Total Thrombus-formation Analysis System) は、少量の血液サンプルを使用して、さまざまな流量条件で血栓形成を評価する手段です。

コチニンの測定 コチニンのレベルは、市販の ELISA 技術を使用して血清で測定されます。

指の 1 つの爪床の毛細血管の直接顕微鏡検査により、毛細血管の血流を評価できます (毛細血管の血球速度、CBV、mm/s)。 これは完全に無痛で非侵襲的な方法で、実行には約 15 分かかります。

ＭＶの測定 血漿を解凍し、室温で２０分間、２０００ｇで遠心分離する。 次いで、上清を室温で２分間、１３０００ｇで再遠心分離する。 20 μl のサンプルを、ファロイジン-Alexa-660 (Invitrogen、ペイズリー、英国)、ラクトアドヘリン-FITC (Haematologic Technologies、バーモント、米国)、CD42a-PE (血小板-MP (PMP)、BD、クローン Alma-16)、CD45-PC7 (Leukocyte-MV (LMV)、Beckman Coulter、Dublin、Ireland) および CD144-APC (Endothelial-MV (EMV)、AH Diagnostics、Stockholm、SWE)。 PMV は CD154-PE (CD40L、abcam、ケンブリッジ、英国) で標識され、EMV は CD62E (E-セレクチン、Beckman Coulter、ダブリン、アイルランド) で標識されています。 MV は、Beckman Gallios 装置 (カリフォルニア州、米国) でフローサイトメトリーによって測定されます。 ＭＶゲートは、それぞれ直径０．５μｍ、０．９μｍおよび３．０μｍのビーズの混合物であるメガミックスビーズ（ＢｉｏＣｙｔｅｘ、マルセイユ、フランス）を使用して決定される。 MV は、サイズが 1.0 μm 未満の粒子、ファロイジン陰性 (細胞膜断片を除外するため)、ラクタドヘリン陽性の粒子として定義されます。 ヒト抗原に対する反応性を持たないコンジュゲート アイソタイプが一致する免疫グロブリン (IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-APC および IgG1-PC7) をネガティブ コントロールとして使用して、サイトメトリー分析のバックグラウンド ノイズを定義します。 MV の絶対数は、次の式によって計算されます: (MV カウント x 標準ビーズ ⁄ L) ⁄ 標準ビーズ カウント (FlowCount、Beckman Coulter)。

活性化またはアポトーシスにより MV が放出されるかどうかを判断するには、MV を SYTO 13 で標識します。 SYTO 13 (Molecular Probes) は細胞透過性があり、DNA または RNA に結合すると高い蛍光収率を示します。 私たちの仮説は、アポトーシス細胞から放出されたMVがより多くのDNAまたはRNAを発現するというものです。

ＭＶの凝固促進効果 トロンビン生成に対するＭＶの影響、およびＭＶによって提供される負に帯電した表面の相対的な寄与を調査するために、インビトロ実験が行われる。 簡単に言えば、血漿サンプルを解凍し、上記の遠心分離ステップの後、サンプルをさらに遠心分離して (45 分間で 21 000 g で 2 回、RT)、MV 濃縮ペレットを取得します。 次いでペレットを市販の血漿（Haemochrom、Diagnostica、エッセン、ドイツ）にTFまたはリン脂質を添加せずに添加する。 血漿中のトロンビン生成は、Hemker らによって最初に説明されたように、較正された自動トロンボグラム (CAT) を使用して決定されます。 計算された曲線下の面積は、経時的に生成されたトロンビンの総量を表し、内因性トロンビン ポテンシャル (ETP) と呼ばれます。 トロンビン生成の開始までの時間 (遅延時間)、トロンビン生成の最大濃度 (ピーク トロンビン)、および最大トロンビン生成までの時間 (トロンビンがピークになるまでの時間) も CAT 分析で評価されます。